胚胎干扰素

随着生殖生物学研究的不断深入,从分子生物学水平探索着床机理已成为一种必然趋势。美国的J.D.Gordin和R.M.Robert等从羊、牛妊娠早期的胚胎分泌物中分离出干扰素类似物:羊滋养层蛋白质-1(ovine trophoblast Protein-1)和牛滋养层蛋白质-1(bovine tropho-blast protein-1),并首先提出了胚胎干扰素(conceptus interferon)的概念。     

生物工程技术预测

一、医药与医疗方面利用重组DNA技术商品化生产胰岛素(84.2～87.1)、干扰素(84.6～87.7)、牛生长激素(84.12～88.2)、人生长激素(85.8～89.2)、肝炎疫苗(85.9～89.1)和癌疫苗(93.10～97.6)。利用重组DNA技术开发感冒疫苗(85.G～89.1)和癌疫苗的生产技术(89.7～93.1)。     

牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法的建立

本研究旨在建立一种牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法,并评价该方法用于牛结核病检测的价值。通过筛选与天然牛γ干扰素特异性结合的单克隆抗体分别作为包被抗体和检测抗体,并探索不同的实验条件确定最佳包被抗体浓度、最佳细胞数量和最佳检测抗体浓度等,建立牛γ干扰素ELISPOT检测方法。采集30头奶牛尾静脉血并分离外周血单个核细胞,以结核菌素作为刺激原,使用建立的ELISPOT检测方法进行牛结核病检测,并与BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测结果进行比较。筛选到两株与天然牛γ干扰素特异性结合的单抗2G5和5E11,确定ELISPOT检测方法的最佳实验条件为:包被抗体2G5浓度2.5μg/m L,每孔细胞数量2.5×105个,检测抗体Bio-5E11浓度1μg/mL。使用建立的ELISPOT检测方法与BOVIGAMTM ELISA试剂盒对30头奶牛进行同步检测,结果显示,以BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测结果作为参考标准,14头BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测阳性牛中,ELISPOT方法检出的阳性牛为11头,敏感性为78.6%(11/14);16头BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测阴性牛中,ELISPOT方法检出的阴性牛为12头,特异性为75%(12/16)。应用结核菌素作为刺激原的牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法可用于牛结核病辅助检测,具有潜在的临床应用价值。     

重组鲁西黄牛α干扰素融合蛋白的表达及其抗病毒活性研究

通过PCR从鲁西黄牛(Yellowcattle)基因组DNA中克隆了α干扰素(BoIFN-α)基因,并插入到pET32a 中,构建成重组原核表达质粒pET32a /BoIFN-α,进行测序和诱导表达。测序结果表明,鲁西黄牛IFN-α基因全长498个核苷酸,含一个开放阅读框(ORF),编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型氨基酸组成同源性为97.6%。表达产物经SDS-PAGE分析,表达出40kD的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的26.7%。表达产物经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化,纯化产物进行复性后在MDBK/VSV上的活性为5×105u/mg。重组牛IFN-α(rBoIFN-α)对牛轮状病毒(BRV)有一定的抑制作用,抗BRV病毒活性为1.5×105u/mg。结果显示从鲁西黄牛中克隆了IFN-α基因的一种新亚型,即BoIFN-αC2,并实现了高效表达,获得了具有较高抗病毒活性的重组干扰素产物,为重组牛干扰素的开发奠定了基础。     

淋巴因子和干扰素

试验了仙台病毒和新城疫病毒对NamIva细胞培养物生产人体淋巴母细胞样干扰素〔HuIFN一d(Ly)〕诱导潜能。细胞在RPMI16叹。培养基(补加切%胎牛血清,L一谷胺醚胺,庆大霉素和Hepes缓冲液)中培养到静止期。细饱繁殖温度是37℃,诱导时35℃。     

干扰素基因

干扰素(IFN)是一类蛋白质,它作用于靶细胞产生抗病毒作用,它还具有抑制细胞生长和调节免疫功能等作用。干扰素的研究无论在理论上还是在临床应用上都有重要意义。随着基因工程技术的发展,用基因工程来研究和生产干扰素便成为科学家努力的目标了。目前,从一公斤大肠杆菌菌体可生产2克α-干扰素(IFN-α)。IFN-α基因在酵母中的表达也获得了成功。β-干扰素(IFN-β)及r-干扰素(IFN-r)的基因工程生产也已成功。干扰素基因工程的研究又促进两个方面的研究得到重要发展,一是干扰素基因结构的研究取得十分重要的进展;另一是干扰素的基因人工合     

猪白细胞干扰素制备与检定方法

<正>Soloviev等人,连续发表了4篇文章,报导有关猪白细胞干扰素的试验结果,现综述如下: 一、猪白细胞干扰素制备方法 1.制备方法 分离猪白细胞:采血后2～4小时内,加2～3倍容积的0.83％氯化铔溶液、摇匀,4℃静置10分钟。取出,离心沉淀1000转/分10分钟。倒掉上清液(血浆和血红素等)。白细胞用199营养液(其中加10％牛     

Beta~((β))干扰素开始临床试验

对大规模生产和临床试验干扰素(重组DNA方法制造的)的巨大兴趣已集中在alpha,(α)干扰素并在一定程度上集中在gamma(Υ)干扰素上。目前,重组beta (fibroblaα)干扰素,即抗病毒和癌的干扰素的临床试验,将在与Shell oil公司达成协议之后,用Cetus公司的产品开始进行     

Ciba-Geigy''''s的模拟干扰素

Roberts已将注意力转向CG.CG大量生产牛重组α-干扰素-1,用于治疗牛呼吸道感染.Roberts说,60%的CG产品与天然的滋养层蛋白相同.他于妊娠的第二和第三周给羊注射γ-干扰素.这样处理后,母羊的妊娠发育率从76%猛增至92%.羊羔的出生率     

牛λ3干扰素在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及其抗病毒活性检测

牛λ3干扰素(BoIFN-λ3)是一种新型干扰素,可应用于牛传染性疾病的防治。在家蚕杆状病毒表达系统中可实现BoIFN-λ3的高效表达。首先在优化合成的BoIFNλ3基因起始密码子上游引入Kozak序列,将其克隆至转移载体pVL1393,获得pVL1393-BoIFN-λ3重组质粒。利用本实验室构建的家蚕杆状病毒表达系统,获得整合BoIFN-λ3基因的重组家蚕杆状病毒,将重组病毒感染五龄起蚕,在蚕血淋巴中得到表达产物BoIFN-λ3。采用微量细胞病变抑制法在MDBK/VSV*GFP 系统检测蚕体中表达BoIFN-λ3的效价可达（2.7±0.12）×105 U/mL,利用空斑筛选法筛选重组病毒,测得最高表达量的重组病毒表达的BoIFN-λ3的效价可达（8.1±0.52）×105 U/mL,表达量提高3倍。家蚕杆状病毒表达系统为优质高效的牛λ3干扰素产品的生产提供了一种新方法。     

其它药物

920166大型动物细饱分裂素的分子生物学〔英〕/M alisz。“,ski,C.…/Ady.Vet.Sei.Comp.Med一1990,35一181~213〔译自DBA,1991,20(9),91一04983〕 内容如下:选择的细胞分裂素的生物学特性,用细胞分裂素调节血细胞生成和免疫应答,以及牛和猪的重组细胞分裂素,包括(i)牛重组白细胞介素一1,(ii)牛重组白细胞介素一2,(i 11)牛重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子,(iv)牛重组干扰素甲,(v)猪重组白细胞介素一1和(vi)它们的结构特征及其基因。可利用交又杂交技术克隆编码这些细胞分裂素的cDNA,并在酵母或细菌中得以表达。在基础水平上,大量重组…     

重组杆状病毒表达牛β干扰素及其生物学活性研究

本研究构建了表达牛β干扰素的重组杆状病毒,感染sf9细胞后,分别采用免疫荧光和免疫印迹证实了重组BoIFN-β的表达存在于细胞内和培养上清中。采用表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒(VSV*GFP)检测分泌到细胞上清中重组BoIFN-β的抗病毒活性,可达到106.0AU/mL。同时重组BoIFN-β还可以激活鸡Mx启动子控制的萤光素酶报告基因的转录表达。综上,本研究采用杆状病毒表达系统,重组牛β干扰素以分泌形式高水平表达,且具有天然Ⅰ型干扰素的生物学活性。     

疫苗

863291牛莫拉氏菌(Mara二ella bovfs)〔专,英」/Gerber,J.D.了European Pate-。t Appl.EP 0146523.Pub.26.06.s5.Ap-pl.US 560780,filed 12.12.83〔译自CBA,1985,(9),3049〕 用牛莫拉氏菌生产的蛋白酶,可用作抗牛莫拉氏菌感染的免疫预防剂。(邓永鸿)863292疫苗及其制备过程〔专,德〕/Frei-herr von Malsen一Poniekau,E.了Europ-ean Patent Appl.EP 0146144.Pub.26.06.85.Appl.DE 3345864,filed 19.12.83〔译自CBA,1985,(9),3052〕 仅翻译出题目。(邓永鸿)863293新的人干扰素多肤衍生物巨专,英〕/Itoh,S。…了European Patent…     

淋巴因子和干扰素

871797HVJ(仙台病毒)用于生产干扰素时刺激白细胞释放千扰素[英]/Matsu-moto,K.…//J.Gen.Virol一1956,67(4)-809～812[译自CBA,1986,(7),2697] 本文研究曾受到HVJ(仙台病毒)干扰素(lFN)诱导的白细胞,在第二次类似的刺激后,产生干扰素的能力。     

转基因克隆牛

台湾大学农学院畜产学系科研人员用细胞核移植技术生产转基因克隆牛。其方法 :将受胎牛成纤维母细胞和卵丘细胞 ,经用电穿孔法把带有牛乳蛋白启动子 (α LA)序列与胞外岐氧化酶素 (ECSOD)的cDNA融合基因整合到其基因组 (genome)后 ,待 1月筛选并经PCR测试 ,证明已成功建立初代培养的两种供核细胞 ;另外应用这种携带有αLA ECSOD基因的受胎牛成纤维母细胞和牛卵丘细胞分别为供核源 ,经移植生产转基因克隆牛囊胚 ,试验结果共获 4 0个正常牛囊胚 ,其效率为 2 6 .7% (4 0 / 14 8)。将其中 2 0个源自核移植生产的囊胚移植于 13头受胚牛后…     

一种牛干扰素研制成功

干扰素是一种稀缺的药物,用它有效地防治病毒病。美国遗传工程公司应用基因捻接技术研制牛干扰素已获得成功。家畜中流行的一种病叫出血性败血病(Shipping fever),由一种病毒引起的。     

干扰素的特性

自1957年伊萨克斯(Isaacs)和伦德曼(Lindeman)等发现和命名干扰素以来,干扰素的研究已从其特性、生产制备、临床应用到其功能与作用原理等方面取得了巨大进展。特别是干扰素作为细胞经诱导剂诱导产生的一类蛋白质,在机体防御系统中的作用和地位已逐渐明了。     

影响人β干扰素超诱导的因素

用聚I:C-环己亚胺-放线菌素D系统超诱导生产人,干扰素(HuIFN-β),是一种比较成熟的方法,但其影响因素很多。为了探讨用国产聚I:C代替进口产品大量生产干扰素的可能性,以及寻找合适的诱生条件提高干扰素产量,我们对一些影响超诱导的因素进行了比较研究。     

低浓度干扰素在体外对肿瘤有生长刺激作用

干扰素(interferons,IFNs)是一组由真核细胞产生的抗病毒多肽类物质,能抑制多种正常或转化的细胞的生长、抑制L细胞(一种属于正常小鼠成纤维细胞的细胞株)的增殖、刺激淋巴细胞以及对免疫反应和表面抗原的表达发挥作用。近年来,重组DNA技术已成功地应用于干扰素的生产,有可能研究高纯度的干扰素生长调节活性。C.U.Ludwig等在体外用人肿瘤克隆试验(HTCA)研究了干扰素IFN-αA、IFN-αD以及IFN-α对肿瘤     

不同型别的基因工程干扰素抗病毒活性的比较

对大肠杆菌生产的不同型别的基因工程干扰素rIFN-α1(α1)、rIFN-αA(αA)、rIFN-β17ser(β17ser)和rIFN-γ(γ),以及自然人白细胞干扰素nIFN-αco,在不同细胞上对不同病毒的抗病毒活性做了比较研究。证明:①α1抗病毒作用的细胞谱较广,尤其在牛肾MDBK细胞和猪肾PK细胞上有很高的活性,分别为在人细胞上的29倍和7倍。β17ser和γ在异种细胞上活性极低,在鼠、猪和牛肾细胞上的活性为人细胞上的1～2％以下。②5种干扰素对麻疹、CoxB1、Sindbis、腺病毒7型和Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒的抗病毒活性无明显差异。但不同病毒对干扰素的敏感性有明显差别,以Sindbis病毒为最敏感,7型腺病毒最不敏感。③5种干扰素对流行性出血热病毒均有明显的抗病毒作用,尤以人α1型和β干扰素作用最强,α1对出血热病毒的抗病毒活性是对滤泡性口膜炎病毒(VSV)的1/2.85,人β干扰素是对VSV的1/4.1。上述结果为人基因工程干扰素的临床应用提供了实验依据。