梅山猪胚胎附植期EphB2的组织表达及RNA-seq分析

猪产仔数是一个重要的经济和繁殖性状, 而胚胎附植是影响猪产仔数的重要因素。为了研究促红细胞生成素产生肝细胞受体B2 (EphB2)对猪胚胎附植过程中子宫内膜迁移和粘附活动的影响, 文章以太湖流域梅山猪为研究对象, 利用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法, 检测EphB2基因在梅山猪胚胎附植前、中、后期子宫内膜附植点/非附植点和卵巢组织的mRNA和蛋白表达谱, 并用转录组测序(RNA-seq)方法分析了不同附植时期子宫内膜附植点和卵巢组织的差异表达基因。qRT-PCR和Western blot结果表明, EphB2在胚胎附植前、中、后期子宫内膜附植点和非附植点的mRNA和蛋白均呈现先升高后降低的表达趋势, 且附植中期的表达量显著高于前期和后期(P<0.01);EphB2在附植前、中、后期卵巢中的mRNA和蛋白表达趋势则相反, 为先降低后升高, 且不同时期间表达差异显著(P<0.05)。RNA-seq结果表明, EphB2在子宫内膜附植点的mRNA表达, 附植中期极显著高于附植前期(P<0.01);EphB2在卵巢的mRNA表达, 附植中期显著高于附植后期(P<0.05)。综上所述, EphB2很可能在猪胚胎附植过程中发挥着重要的调控作用, 为潜在的猪产仔数性状候选基因。     

绵羊胚胎附植分子调控研究进展

胚胎附植是哺乳动物复杂的生殖生理过程,是妊娠建立的标志和首要环节。早期胚胎发育、母体妊娠识别、胚胎附植和妊娠维持都严格依赖于孕体和中间的信号联系。大量研究证明,在绵羊胚胎附植过程中,来源于胚胎、母体子宫及宫外组织的多种生殖激素、黏附分子、细胞外基质、细胞活素物质和生长因子通过极其精密的协调共同参与和维持了孕体的发育、子宫内膜的重塑、分泌功能和子宫生长。综述了近年来绵羊胚胎附植的相关分子调控机制的最新研究进展,对胚胎附植分子调控信号的掌握将有助于诊断和确定那些引起妊娠失败的原因,为提高家畜和人类妊娠率提供参考。     

粪尿类固醇物质监测野生动物繁殖状态研究进展

粪尿类固醇物质监测野生动物繁殖状态研究进展张家骅（西北农业大学家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨陵７１２１００）关键词野生动物，繁殖状态，粪尿类固醇了解野生动物在自然状态下的生活习性，尤其是了解其繁殖习性，是有效地控制其群体数量的先决条件。...     

一种鉴别胚胎性别的药盒在农场投入应用

澳大利亚的科学家开发了一种轻便的药盒,用它在农场只花3小时便可既鉴别动物胚胎的性别,又可使胚胎的数目翻倍。这种方法简化了要花两周时间在实验室完成的方法,并将简化牛和其它家畜的繁殖过程。     

牦牛LIFR 基因的克隆及其在繁殖周期卵巢中的表达

白血病抑制因子受体(LIFR)与白血病抑制因子(LIF)结合,在排卵、胚胎发育及胚胎附植等过程中起重要的调节作用,与哺乳动物生殖过程密切相关。为进一步研究白血病抑制因子受体(LIFR)基因在卵巢中的表达,本研究对牦牛LIFR 基因进行克隆和序列分析,并利用RT-PCR 技术研究其在繁殖周期卵巢中的表达情况。本研究克隆得到牦牛3 329 bp 的LIFR 基因cDNA 序列,内含3 288 bp 开放阅读框序列。与家牛的相应序列具有很高的同源性(99 5% ),表明LIFR 基因在进化过程中较为保守。实时定量RT-PCR 检测LIFR 基因在繁殖周期卵巢中的表达,结果显示卵巢中LIFR 基因在妊娠期表达最强。表明LIFR 基因在牦牛繁殖周期中具有不可忽视的作用。     

家畜胚胎干细胞多能性候选信号通路及分子标志

家畜胚胎干细胞具有重要的生物学意义和广阔的应用前景。以下对比了小鼠、人胚胎干细胞多能性调控信号通路的异同,阐述了小鼠、人胚胎干细胞与家畜胚胎干细胞在多能性分子标志上的差异,并结合本实验室开展绵羊胚胎干细胞研究的实际经验,对目前家畜胚胎干细胞建系中可能存在的多能性候选信号通路及分子标志进行了探讨。     

家畜胚胎工程研究现状与展望

畜牧业即将进入一个可根据产品和环境需要制做和快速繁殖动物的令人兴奋的时代。这正是由于胚胎工程出现的结果。胚胎工程或叫胚胎技术(embryo technology),是以胚胎移植为基础,以转基因动物为中心的,通过人工操作胚胎,定向改变动物性状使之为人类造福的一系列生物技术的总称。其中主要包括:胚胎移植,体外生产胚胎,胚胎克隆,性别鉴定和转基因技术等。这些新技术与人工授精和选种等老技术相结合将会形成大规模生产、销售及移植遗传优秀家畜的景然有序的生产线。本文将综述胚胎工程主要技术目前的研究和应用现状及存在问题,并对近期和长远发展前景作一展望。     

胚胎的阶段和母体激素水平的变异对家畜胚胎存活的影响

同步胚胎移植所要求的生理机制,在有些家畜中,特别是在绵羊,已经明确。交配过的动物,其激素状况和胚胎阶段的变异,已证明可以导致胚胎的死亡,这可能是由于不同步所引起。也许在胚胎移植过程中,更加大了激素水平和胚胎阶段之间的偏差。在某一确定时间给予受体一些激素,并在开始这一处理后间隔一定时间,移植处于某一特殊发育阶段的胚胎,可能会有所帮助。     

蛋白质组学技术在精子蛋白研究中的应用

从蛋白质组学研究的技术手段、蛋白质组学在人类不育及精卵相互识别并结合的机理研究、免疫法开展男性避孕方法的研究及蛋白质组学研究方法在家畜繁殖环节中的应用等几个方面阐述了蛋白质组学在人类生殖及动物繁殖环节相关研究中的重要作用。说明蛋白质组学已经成为生命科学未来发展的主要分支之一,为揭示生命个体的蛋白质动态变化提供了技术手段和理论基础,并将在药物开发,生命活动机理研究等方面发挥巨大作用,也必将会在家畜繁殖学领域发挥其应有的作用。     

用电穿孔方法研究 H5N1 禽流感病毒DNA 疫苗对动物的免疫保护作用

为了研究 H5N1 DNA 疫苗对小鼠和鸡的保护效率,用 H5N1 禽流感病毒 HA DNA 疫苗免疫 BALB/c 小鼠和 SPF 鸡 . 小鼠和鸡分别经电穿孔和肌肉注射免疫两次,间隔为 3 周 . 二次免疫后,用致死量的同源病毒进行攻毒实验 . 空白对照组在攻毒后全部死亡,而经电穿孔免疫的小鼠和鸡均获得了完全的保护,并能有效地抑制病毒在小鼠肺脏和鸡泄殖腔的繁殖 . 同时,电穿孔免疫的小鼠和鸡均产生了高水平的特异性抗体 . 经电穿孔免疫的小鼠攻毒后 CTL 反应明显加强 . 这些结果表明, HA DNA 疫苗能有效地保护小鼠和鸡对禽流感病毒的感染,同时也表明电穿孔免疫是 DNA 疫苗免疫的有效途径之一 .     

最近国际家畜繁殖生理研究动向

1961年6月在荷兰海牙召开的“第四届国际家畜繁殖会议”,有来自56个国家的有关科学研究工作者五百多人,提出论文报告160篇,包括家畜繁殖生理、人工授精和繁殖病理三个方面,涉及的问题很广泛,内容很丰富。这些论文报告在一定程度上可以反映出最近国际家畜繁殖科学研究所得的结果,表现的水平和发展的趋向。下面将从这些论文报告中所反映出的在家畜繁殖生理方面的研究进展和动向,作简略的介绍,希望有助于大家窥见一个概貌。     

电穿孔介导小干扰RNA高效转染小鼠附植前胚胎

使用Cy3标记的阴性对照小干扰RNA(siRNA)转染小鼠附植前胚胎,建立向小鼠附植前胚胎导入siRNA的电穿孔方法。通过控制透明带弱化程度、电压、脉冲时间和脉冲次数等条件,采用不同参数组合并结合使用不同介质作为电转缓冲液将Cy3标记的阴性对照siRNA转染小鼠附植前胚胎。在荧光倒置显微镜下,观察胚胎的存活率、siRNA转染率以及阳性转染存活胚胎的囊胚发育率。结果显示小鼠附植前胚胎在使用台氏液消化胚胎透明带10 s后,以opti-MEM作为电转缓冲液,电穿孔参数设置为30 V,1 ms,3次的条件下取得最佳转染效果。总之,电穿孔方法可实现siRNA简便、高效地转染小鼠附植前胚胎。     

提高转基因小牛生产效率

芬兰Kuopio大学和Virtanen Institute研究人员已成功地从离体培养胚胎(胚胎转移之前经性别筛选,有转基因存在)培养获得转基因奶牛。 由于家畜的妊娠周期长、同窝仔体小、护理费用高等原因,使转基因家畜的生产费用较为昂贵。若利用活体成熟胚胎又需要大量的供体动物,且这些胚胎供量又有限。在奶牛中,通过使用离体成熟并受精     

双壳贝类染色体标本制备技术的优化

本研究以牡蛎、咬齿牡蛎鳃细胞为材料,采用PHA处理法、低温同步化法及活体去壳法进行预处理,制作成染色体标本;以马氏珠母贝、企鹅珍珠贝担轮幼虫为材料,采用PHA促繁殖获取胚胎法,制作胚胎染色体标本.对不同时间不同处理方式获得牡蛎染色体分裂相比例、PHA促繁殖获取胚胎法获得马氏珠母贝染色体分裂相比例进行统计.结果发现,PHA处理法在24 h时能获取最多分裂相(3.50‰),低温同步化法在72 h时能获得最多分裂相(2.20‰),活体去壳法始终保持较高分裂相比例(3.60‰),PHA促繁殖获取胚胎法获得最大分裂相比例(10.00‰).4种方法都能获得理想的中期分裂相数目.其中,低温同步化法缺点是温度难控制、预处理时间长;活体去壳法易导致贝类死亡;PHA促受精获取胚胎法缺点是胚胎的获取受繁殖季节限制.PHA处理法预处理时间短、获取分裂相数目多,无疑是贝类成体染色体制备的最好的方法.同时,PHA也为贝类人工繁殖提供了一种更为有效的手段.     

家畜诱导性多能干细胞研究进展

目前,家畜胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)建系技术还不完善,很多大型家畜都未能建立ESCs系,这在很大程度上限制了家畜相关研究的开展。诱导性多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPSCs)技术的建立,为迅速、高效的获得家畜多潜能干细胞提供了新方法。家畜iPSCs的建立,将推动家畜发育生物学、异种器官移植、人类疾病模型建立、家畜品种改良等研究。综述了家畜iPSCs技术的最新进展,并探讨了家畜iPSCs的应用前景。     

胚胎工程中激素选择的生理学解析

从生理学的角度解析了家畜发情机制及胚胎工程中用孕激素进行同期发情处理和用促性腺激素进行超数排卵的原因.     

两栖类胚胎少量细胞的短期离体培养

以往研究两栖类的胚胎诱导常用的方法是外植、浸泡法,都利用胚胎的预定外胚层进行实验,这种外植块细胞众多,在分化中所表现的,除诱导物质的作用外,还有细胞与细胞或组织与组织间的作用。为了避免细胞与细胞之     

生平回顾

不曾惊天动地,也不曾轰轰烈烈;然平凡中见伟大。在几十年科研生涯中,郑教授主要从事家畜生殖生理及家畜繁殖等方面的研究,做了大量具有开拓性工作,为国家培训了大批家畜人工授精技术人员,推广繁殖技术,使科研与生产密切结合,为发展我国的畜牧科技事业做出了重大贡献。他与国内外进行广泛的学术交流,论著甚丰。通读全篇,真切地感受到老一辈科学家的情怀,令晚辈学者深受启迪和鼓舞。     

烟曲霉硫氧还蛋白还原酶对侵袭性曲霉病小鼠的免疫保护作用

目的探讨烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)对侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis,IA)的免疫保护作用。方法 C57BL/6小鼠随机分为免疫组和对照组,免疫组小鼠用重组TR免疫2次。感染烟曲霉前用环磷酰胺和地塞米松对全部小鼠进行免疫抑制处理,通过气道穿刺法向气管内注入烟曲霉孢子悬液,建立IA疾病模型。观察两组小鼠的存活率、局部器官真菌载量、肺组织病理变化、肺泡灌洗液细胞分类计数,评估TR蛋白的免疫保护作用。结果存活率:免疫组小鼠7d存活率为64.7%,对照组为0。肺组织匀浆烟曲霉CFU中位数:存活小鼠为0,死亡小鼠为44(P25,P75为21,70)(P0.01)。组织病理学检观察:死亡小鼠肺肿胀出血、肺泡间隔增宽、大量炎症细胞聚集、组织灶状坏死,并有大量烟曲霉菌丝存在,而存活小鼠肺组织损伤程度轻,且组织间无菌丝。肺泡灌洗液涂片染色细胞计数显示:存活小鼠单个核细胞约占84.2%,中性粒细胞仅占15.8%;死亡小鼠单个核细胞占33.6%,中性粒细胞约占66.4%。结论烟曲霉重组蛋白TR能诱导小鼠产生抵抗IA的免疫保护力,是一个有潜力的保护性抗原。     

不同防冻剂对兔胚胎干细胞慢速冷冻保存的影响

干细胞冷冻保存是干细胞研究和临床应用中的必需技术。为提高兔胚胎干细胞在慢速冻存过程中的保存效果，比较了二甲基亚砜(DMSO)和乙二醇(ethylene glycol，EG)对兔胚胎干细胞冷冻保护效果。对冷冻复苏后的细胞进行台盼蓝染色，并研究其胚胎干细胞分子特性，结果表明DMSO比EG具有更好的冷冻保护效果。再在以10% DMSO为基础的防冻液中添加膜稳定剂海藻糖(trehalose)或谷氨酰胺(glutamine)，细胞冷冻复苏后结果显示，谷氨酰胺对兔胚胎干细胞有明显的冷冻保护作用，使细胞存活率从71%提高到83.7%。当谷氨酰胺浓度为0、5、10、20、40 mmol/L分别加入防冻液中后，20 mmol/L的谷氨酰胺具有最佳的冷冻保护效果。以上结果得出兔胚胎干细胞慢速冷冻的防冻液改进配方为：在胚胎干细胞培养液中添加10% DMSO＋20 mmol/L谷氨酰胺。