重组人集落刺激因子临床应用研究进展

<正>自从1966年Bradley等首先在造血细胞培养中,发现骨髓细胞要分化增殖为粒一巨噬细胞集落,并需有一种刺激造血的物质参与,并将该物质称为集落刺激因子(Colony Stimulating Factor,简称CSF)。随着CSF的纯化和重组技术的发展,目前应用生物工程技术已经能合成大量的重组人CSF(recombinant human colony stimulating factor)。其生物学特性逐渐被人们所认识,而且已将对其研究从实验室进入到临床。各项初步临床应用结果显示了广泛的应用前景,并日趋受到各国医学界的高度重视。     

影响人骨髓CFU-C产率某些因素的分析

在CFU-C(粒系或单核-巨噬细胞集落生成单位)体外琼脂培养中,只有在CSF(细胞集落生成刺激因子)的作用下粒系祖细胞才能增殖、分化,生长成为细胞集落。CSF来源广泛,其刺激活力文献报告不一。此外,CFU-C产率波动较大,影响因素甚多。本文在相同的实验条件下,比较了不同来源的CSF刺激活力,并对影响CFU-C产率的某些因素进行了分析。     

低能量激光对造血细胞的增殖作用

激光能刺激造血细胞增殖,促使粒-巨噬细胞集落形成单位(GM—CFUc)增多。从人脐带血中分离制备的有核细胞,加入集落刺激因子(CSF)后,形成的GM—CFUc为18.6±12.6/10~4;如果加入的CSF是经激光照射后的细胞制成的,其GM—CFUc为40.5±20.2/10~4;若先用激光照射脐带血的有核细胞,在培养时加入的是未经激光处理细胞制成的CSF,也有增殖效应,GM—CFUc为36.5±18.5/10~4;如果脐带血有核细胞和制备CSF的细胞都用低能激光照射,就可以见到GM—CFUc明显地增多,其值为57.4±41.2/10~4是未经激光处理者的三倍。表明激光照射脐带血有核细胞及制备CSF的细胞均可使GM—CFUc增殖。     

FL对脐血造血细胞长期液体培养的影响*

用脐血进行千细胞移植有许多优点,但有一个主要的缺点是可获得的细胞数量有限。因此脐血干细胞的体外扩增对于其临床应用具有重要意义。考察了Flt-3配体(FL)和干细胞因子(SCF)、白介索3(IL一3)、IL-6、粒细胞集落刺激因子(G-csF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)的组合对脐血细胞扩增和分化的影响。培养42d,总细胞最多扩增了385,30±163 51倍(FL+SCF+G．CSF+GM—CSF),粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)在第28天达到最高,最高扩增了409．52±189．50倍(FL十SCF+IL-3+IL一6)。FL与SCF等细胞因子具有协同作用,对所有考察的细胞因子组合中,加入FL都使总细胞和CFUGM的扩增倍数增加。FL+SCF培养的总细胞扩增最小,而CFU-GM长时间保持在较高水平,表明这FL和SCF有利于保持造血干细胞的活性,防止细胞分化。在存在G-CSF和GMCSF的培养中,总细胞获得了最大的扩增,但CFU-GM达到最大后很快下降至O,表明G-CSF和GM—CSF促进了细胞的分化。结果提示,细胞因子组合对脐血造血细胞的扩增和分化具有重要的作用．FL和SCF可促进造血细胞的扩增,而G-CSF和GM—CSF等可导致细胞的过度分化。     

不同刺激因子对狗骨髓CFU-C的影响

集落刺激因子(CSF)是集落形成单位(CFU-C)体外培养中的一个必不可少的条件,对培养结果的好坏起着决定性的作用。在狗的骨髓细胞培养中,同种异体血清是目前普遍采用的一种CSF,但由于制备方法不同,其刺激活力可有显著差别。为了确定狗血清刺激活力的适宜条件,我们对几种不同的CSF进行了研究。     

产黑色素类杆菌ATCC25845内毒素对小鼠集落刺激因子的诱生活性

产黑色素类杆菌(Bacteroides melaninogenicus)是口腔感染的主要致病菌,由该菌产生的内毒素在致病中具有重要作用。本文采用半固体琼脂培养基培养小鼠骨髓细胞.以形成的集落数作为集落刺激因子(CSF)的水平指标,研究了产黑色素类杆菌内毒察的CSF诱生活性。实验发现,在一定范围内,CSF水平随内毒索剂量增加而上升,但当内毒索剂量大于50μg时。CSF水平不再继续上升。产黑色素类杆菌内毒素的集落形成单位数(CFU-C)为66.6±8.5。     

FDA批准了Leukine

四月份,根据一个咨询委员会所提的建议,美国食品和药物管理局(FDA)批准了Immunex Corp.(Seattle, WA)的重组粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)译本.GM—CSF能够治疗患有急性髓细胞性自血病(AML)的成年患者。AML是一种非常普通的且能致死的急性白血病。     

成骨生长肽的合成及其与粒细胞集落刺激因子之间的协同作用

Fmoc法固相合成成骨生长肽 (sOGP) ,HPLC鉴定纯度大于 98.6 % ,质谱测定 ,分子量 15 2 3.5kD ,与理论分子量相符 ,N端全序列测定结果正确。Balb/c小鼠体内实验证实sOGP与临床使用的人重组粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)之间有明显的协同作用。实验共分两部分 :第一 ,sOGP共给予 13天 ,每天 1次 ,其中在给予sOGP 5天后开始同时给予rhG CSF ;第二 ,同时给予sOGP和rhG CSF ,每天 1次 ,连续 10天 (sOGP ,0 .5nmol/鼠 ;rhG CSF ,2 μg/鼠 )。两组都显示 ,sOGP能显著地协同rhG CSF促进外周血白细胞数和淋巴细胞数增加 ,但对外周血红细胞和血小板数无影响。骨髓有核细胞记数、骨髓涂片、胸骨切片和脾脏切片显示 ,联合给予sOGP及rhG CSF并未造成髓系和淋巴系异常增生。因此 ,sOGP是一种可以增强目前临床上广泛使用的rhG CSF功能的新的因子 ,是一种极有开发前景的新药。     

白细胞介素18的生物学作用

白细胞介素 18(IL - 18)是新近发现的细胞因子 ,具有诱导 IFN-γ的产生 ,促进 T细胞的增殖 ,促进 Th1细胞的发育和增殖 ,增强 NK细胞及 Th1细胞的细胞毒性 ,增强粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)的产生 ,抗肿瘤效应 ,抑制 Ig E的生成以及破骨细胞的形成等多种生物学活性和作用     

具有GCSF活性的噬菌体展示肽

从NFS 6 0细胞中克隆了小鼠粒细胞集落刺激因子 (granulocytecolony stimulatingfactor,G CSF)受体的细胞因子受体同源区 (cytokinereceptorhomologous ,CRH)结构域 ,采用GST融合表达策略 ,实现了CRH结构域的表达 .以纯化的GST CRH融合蛋白为靶 ,从噬菌体随机环七肽库中筛选CRH结构域的结合肽 ,找到两组具有核心序列的噬菌体展示肽 .其中C2和C13噬菌体展示肽能刺激NFS 6 0细胞增殖 ,说明C2和C13噬菌体展示肽具有G CSF活性     

从原始生殖细胞分离克隆鸡胚胎生殖细胞的研究

从孵化 5 5天的鸡胚生殖腺中分离得到大量原始生殖细胞 (PGCs)集落 ,这些集落的细胞经多次克隆传代具有胚胎生殖细胞 (EG)的诸多特征 ,如有连续传代的能力 (传至第 9代 ) ,细胞集落有典型鸟巢状结构 ,PAS染色阳性 ,AKP染色阳性 ,在无饲养层无分化抑制因子LIF时可以自发分化成几种细胞类型 ,包括成纤维细胞、神经细胞、自律细胞等 ,悬浮培养时具有形成类胚体的能力。上述发现表明该细胞具EG细胞的诸多特性 ,为类EG细胞     

FDA给Amgen及Immunex的CSF开绿灯

美国食品与药物管理局(FDA)的生物学反应修饰剂顾问委员会在1990年12月13日的会议上建议批准两种不同的重组型集落刺激因子(CSF)进入市场.顾问委员会的提议虽不能保证正式批准,但FDA以往总是听从上述委员会的提议,因此,有理由期待明年伊始获得正式批准. 第一项是批准应用Amgen的重组型粒细胞CSF(G-CSF)来预防因使用非骨髓癌癌症冶疗药物而引起的感染.G-CSF可刺激产生嗜中性细胞.这是一种白细胞,机体用     

RA和DMSO对鼠胚胎癌细胞的诱导分化

胚胎癌(EC)细胞是来自畸胎癌的多能干细胞。鼠胚胎癌细胞系P_(19)可以被维生素A酸(RA)或DMSO诱导分化。单个EC细胞能增殖形成肉眼可见的集落,其集落形成率高达40-70％;而在同样条件下,分化细胞的集落形成率却非常低(一般小于10~(-6))。已经证实在分化过程的早期就有集落形成能力的丧失;同时,分化培养中的平皿效率已被用来测定未     

裂变中子照射狗血清集落刺激因子的变化

利用体外半固体琼脂培养骨髓粒单系祖细胞的方法测定狗血清中集落刺激因子(CSF)活力。狗受1.3、1.7和2.0Gy裂变中子照射后1～15d,受照射动物血清CSF持续上升。2.0Gy照射动物死前血清CSF活力可为照射前7～20倍。1.3Gy及1.7Gy照射活存狗照射后13～30d CSF活力直线下降。γ线3.5和2.5Gy照射狗早期血清中CSF活力变动呈波动性,5～10d后持续上升的幅度也不如中子照射动物。 实验结果证明,血清CSF活力和外周血白细胞数的变化呈负相关。本文对中子照射动物血清CSF活力升高的机理和CSF在中子照射动物造血恢复中的意义进行了探讨。     

造血调控因子及其受体转录调控机制的研究进展

综述了5种集落刺激因子(CSF)、红细胞生成素(EPO)、5种白介素、干扰素、肿瘤坏死因子、白血病抑制因子、干细胞抑制因子、2种 CSF 受体 (R)、EPOR 和两种白介素 R 等转录调控分子机制的研究进展.     

生长因子促进了强剂量化学疗法在治疗某些癌症中的应用

最初设想的集落刺激因子(CSF)的各种用途,除了作为佐剂提高化学疗法的成功率以外,在临床试验中都得到了肯定.现在,越来越多的证据说明,至少有一种CSF,即粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF),可促进高强度化学疗法,因而提高某些癌症患者的存活率.临床试验的结果尚未公布,但是强剂量疗法与GM-CSF处理相结合这一途径已在试点研究中得到了试验,结果很多患者的肿瘤完全消退而且不再复发.多机构随机研究即将开始并在2～3个月后公布.同时,新墨西哥大学癌症中心主任James Neidhart正在积极研究CSF的这种用途,他总结出如下结果.     

小鼠LAK细胞对粒-单系祖细胞增殖的影响

在小鼠粒单系祖细胞(CFU-GM)集落培养体系中加入LAK细胞能显著增强CFU-GM增殖,LAK∶BMC为8时,CFU-GM数比对照增加194.4%。LAK细胞条件液也有类似co-CSF的活性,单独LAK细胞条件液不能刺激CFU-GM增殖。LAK细胞和BMC共孵育4小时后再进行CFU-GM培养,低浓度LAK细胞仍能增强CFU-GM增殖,而高浓度LAK细胞则显著抑制CFU-GM增殖,LAK∶BMC为8时,CFU-GM仅为对照的27.6%。作者认为小鼠LAK细胞能通过分泌某些co-CSF增强CSF的活力,而LAK细胞对CFU-GM又有接触杀伤的活性。     

森永乳业、绿十字公司6月申请制造来自尿的M-CSF的认可

森永乳业、绿十字公司上月明确向厚生省提出两公司共同开发的来自尿的巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF,商品名为“P-100”)的制造承认申请。CSF作为干扰素的优胜后补者,正在进行临床开发。达到开发医药的最终阶段的制造承认。这在世界上还是第一次。估计今后商品化的粒状白细胞CSF、粒状巨噬细胞CSF、重组     

重组人GM—CSF／MCAF融合蛋白的变性、复性及纯化研究

医学科学院生物工程研究所 北京 100071)摘 要 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和单核细胞趋化激活因子(MCAF)融合蛋白在大肠杆菌中高效表达后,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经分离和洗涤后,探索了rhGM—CSF／MCAF变性和复性的合适条件。复性后的样品经Sephadex G-75凝胶过滤和CM—Sepharose FF离子交换两步层析,得到了具有生物学活性的SDS—PAGE纯的rhGM-CSF／MCAF。Western blot检测表明,纯化的rhGM—CSF／MCAF能分别与GM—CSF和MCAF抗体发生特异反应。     

氧化苦参碱对骨髓来源细胞生长的双向调节作用

目的:观察氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对骨髓来源细胞增殖的影响.方法:应用MTr比色法、流式细胞仪检测法、集落形成法和免疫细胞活性测定等方法,检测OMT对白血病细胞K562的抑制作用;骨髓造血干细胞的集落形成实验和脾细胞对肿瘤细胞的杀伤的生物活性试验,检测OMT对小鼠免疫和造血的影响.结果:(1)不同浓度的OMT可明显抑制白血病细胞K562细胞的增殖、集落形成,导致细胞凋亡(P＜0.05),且作用呈浓度依赖性.(2)OMT可以促进小鼠骨髓粒系造血,且在0.2475 mg/mL时达到峰值.(3)OMT可抑制小鼠的免疫功能.结论:OMT可抑制白血病K562细胞的增殖并诱导其凋亡,同时抑制小鼠的免疫功能,促进小鼠骨髓CFU-GM的形成,表现出对骨髓来源细胞生长的双向调节作用.