胰蛋白酶与底物在尿素溶液中的结合

胰蛋白酶的专一性底物,对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯,对酶在236mμ的尿素差吸收峰有熄灭作用;不同量的对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯对胰蛋白酶236mμ的尿素差吸收值的影响形成一滴定曲线。在8M尿素溶液中对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯和胰蛋白酶的旋光不具有加和性。这些事实说明在尿素溶液中胰蛋白酶能够和底物结合。二异丙磷酰胰蛋白酶的236mμ尿素差吸收峰亦能被对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯熄灭,指出二异丙磷酰胰蛋白酶仍然具有和对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯结合的能力。用N-溴代琥珀酰亚胺氧化胰蛋白酶的色氨酸残基后,酶的尿素差示光谱消失以及酶的pH差示光谱中反映了一个pK2.8的解离基团,说明色氨酸残基和羧基可能直接或间接与236mμ左右的差示光谱有关。从底物存在下胰蛋白酶在pH1.6—3.6范围内不再呈现pH差示光谱看来,羧基可能参与底物的结合。     

甘油醛-3-磷酸脫氫酶—还原輔酶 Ⅰ絡合物的光照分解产物NADH-X′

Krebs等发现在pH6左右,甘油醛-3-磷酸脱氢酶能催化NADH转变成一个新的衍生物NADH-X。NADH-X的吸收光谱与NADH的酸分解产物相似,吸收高峰在265mμ,在340mμ没有光吸收,290mμ—300mμ附近的光吸收此NADH大。Hilvers等报告当用甘油醛作底物时,在甘油醛-3-磷酸脱氢酶催化NAD~+还原的反应初期生成一个新的衍生物“340 mμ化合物”,此化合物在340 mμ有吸收高峰,但此化合物显然不是NADH,它在反应过程中能逐渐转变成NADH。     

121MB型氨基酸分析仪测定羟脯氨酸的经验介绍

羟脯氨酸(Hypro)是脯氨酸的衍生物,它和脯氨酸与茚三酮的反应基本相同,反应不放出NH_3,而直接生成黄色产物,在440nm波长处有最大吸收峰。我们对现在常用     

血红素对一些黄酶的抑制作用

血红素对一些黄酶都具有强烈的抑制作用,并且血红素过老化以后对一些黄酶活力的抑制程度因受体不同而有显著差别。在相同的抑制剂浓度下,心肌制剂琥珀酸及NADH氧化酶系中以氧气、细胞色素c和PMS为受体时的活力没有影响,但对以正铁氰化钾、DGPIP和细胞色素b为受体时的活力则有明显抑制。对水溶性琥珀酸脱氢酶、黄递酶和NADH-细胞色素c还原酶以不同受体进行反应时的抑制情况也与上述结果相似,说明抑制作用点直接与琥珀酸脱氢酶及NADH脱氢酶有关。老化血红素对黄嘌呤氧化酶的抑制作用不同,它不影响DCPIP为受体时的活力而却抑制细胞色素c的还原。老化血红素对胆硷氧化酶系及α-甘油磷酸氧化酶系的抑制行为与NADH及琥珀酸氧化酶系相似,看来胆硷和α-甘油磷酸脱氢酶可能也都是黄酶。老化血红素对以上黄酶的抑制都是可逆的,并且从检查6个酶系的结果知道这些抑制皆属竞争性类型。     

变色酸显色法同时测定核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶活性

提出一个用变色酸-硫酸显色浊同时测定核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)羧化酶/加氧酶活性的方法:RuBP羧化酶/加氧酶与底物作用后,用碱性磷酸酯酶将其产物水解生成乙醇酸和甘油酸,然后与变色酸试剂在1:5的体积比下,沸水浴中显色反应90min,乙醇酸与变色酸反应生成红紫色化合物,甘油酸生成淡棕色化合物,分别在573nm,745nm各有一特征吸收峰。根据A_(573),A_(745)与乙醇酸和甘油酸浓度间的函数关系式,求出RuBP羧化酶/加氧酶活性。     

红曲霉葡萄糖淀粉酶的紫外差光谱的研究

红曲霉葡萄糖淀粉酶(EC3 2．1．3)在凝胶电泳上呈现3--5个极为接近均具有酶活性的区带,测定了其中主要的两个分子型E,和E．的紫外吸收特性,它们在水,pH5．0酷酸缓冲液,pH7．0柠檬酸缓冲液中吸收光谱十分接近,吸收峰均在Z80am。 E,在水溶液中280am时8=11．3 x104,A==20．4,E．在水溶液中280rim时8=11．0×104Ai==20．0,E3和E4在0.1NNaOH中吸收均增强且峰位红移,在0.1N HCI中吸收峰略为蓝移。测定了E,和E．在pH 3．1和pH 3．6时的温度差光谱,在pH 3.1 E,和E. AA变化极小,在pH 3.6,E,比E．△A变化大,但转变温度E,和E．都在56℃左右。E,和E．酪氨酸光谱滴定行为极为接近,其pK值在11．5左右。测定了E,pH差光谱和变性差光谱,以pH 2．66为参比溶液,在pH 3.55、4.65、7.14及7．84可以见到酪氨酸和色氨酸的差吸收峰。8M尿素和6M盐酸胍均能使E,出现酪氨酸和色氢酸的负的差吸收峰。     

血红素加氧酶与炎症性疾病

血红素加氧酶(HO)是一种降解血红素的限速酶,它能催化血红素降解生成一氧化碳(CO)、胆绿素和游离铁离子。大量证据表明HO-1及其催化产物具有抗炎、抗氧化损伤、抗增生等功能,具有细胞保护作用,能使细胞产生对伤害性刺激的适应和保护性作用。炎症反应是大多数疾病共同的病理特征,研究HO与炎症的关系将为炎症性疾病的治疗开辟新的途径。     

茶多糖金属络合物的制备及清除自由基活性研究

粗老绿茶经弱碱性的大孔阴离子交换树脂D315柱层析分级,得到以酸性糖为主的多糖样品ATPS.将ATPS与金属离子Ca2+、Fe3+络合,制备得到ATPS-Ca(Ⅱ),ATPS-Fe(Ⅲ)络合物.研究发现茶多糖对不同的金属离子配位能力大小不同,ATPS-Ca(Ⅱ)的络合程度远高于ATPS-Fe(Ⅲ).红外光谱扫描发现茶多糖可能以仲羟基和羧基的C-O配位为主.采用化学发光体系产生自由基模型,以比较经金属离子络合后的不同结构的茶多糖清除自由基的能力.研究发现:ATPS及其络合物清除·OH活性远高于O2-,且ATPS-Ca(Ⅱ)清除羟自由基活性比ATPS减弱很多,ATPS-Fe(Ⅲ)清除羟自由基活性与ATPS接近,一方面,这可能与茶多糖ATPS与二价钙的络合程度远远强于与三价铁的络合程度,其清除·OH活性很大程度与络合金属离子位点的数目及络合强度有关,另一方面,可能与·OH相比,茶多糖与O2-的反应活性很弱有关.     

胰蛋白酶在尿素溶液中失活与复活的动力学

胰蛋白酶的尿素差示光谱在292、286和236mμ有三个负的差吸收峯,和在260mμ范围有一较为平坦的正峯。在变性过程和恢复过程中伴随着活力的丧失和恢复都有差吸收的变化。变性过程差吸收的变化略快于活力的变化,而恢复过程活力的变化又快于差吸收的变化。变性过程可以分解为两个一级反应,仅其中较慢的反应与活力的变化一致,另一反应则与活力无关。底物对甲苯磺酰精氨酸甲酯,对变性过程差吸收和活力变化都有保护作用。由以上结果看来,胰蛋白酶表现其活力并不要求整个酶分子具有完整的空间构型并且它们的活性中心部分的空间构型是较为稳定的。此外本文还研究和计算了变性与恢复过程的热力学常数,并且对它们进行了讨论。     

盐类对二苯胺法脱氧核糖核酸定量测定的干扰作用

(1)DNA二苯胺反应受碱、盐类和高浓度的某些強酸的干扰,干扰作用都随浓度之增大而加強,但不同物貭的浓度-干扰曲綫不同,对显色产物的吸收光譜影响也不同。(2)卤化物中氯化物如NaCl、KCl、NH_4Cl、MgCl_2、MnCl_2以及HCl在最終浓度为0.1N时即可使显色值(600mμ)下降15%左右。NaF在0.25N以下对显色并无干扰。NaBr在0.05N,NaI在0.002N即可使显色值下降50%左右。卤化物对显色产物吸收光譜的影响除600mμ高峯下降之外还有520mμ新吸收高峯的出現。(3)一般鈉盐如Na_2SO_4、NaAc、NaOH、NaH_2PO_4、Na_2HPO_4、Na_3PO_4、柠檬酸鈉、三氯乙酸鈉皆对显色有显著干扰。但磷酸、柠檬酸、三氯乙酸则皆无干扰作用。这些鈉盐对显色产物吸收光譜的影响除600mμ高峯的下降外,还有480mμ新高峯的出現。(4)其它金属盐类如NH_4Ac、Mg(Ac)_2、(NH_4)_2SO_4、MgSO_4、ZnSO_4、MnSO_4也有不同程度的干扰作用。銨盐、鎂盐的作用都稍強于相应的鈉盐,对吸收光譜的影响則与一般鈉盐相类似。(5)強酸如H_2SO_4和HClO_4在高浓度时也有干扰作用,而NaHSO_4、NaClO_4反无干扰作用,它們对吸收光譜的影响都是只有600mμ吸收高峯的下降,并无新的高峯出現。(6)除卤化物以外的一般盐类和碱的干扰作用,在浓度不超过1N的情况下,都可以用适当提高二苯胺試剂中硫酸含量的方法定量的予以消除。反应产物吸收光譜的形状也可完全恢复。用这种改进的試剂对DNA显色值的大小,对显色后的稳定性以及反应的特异性都影响不大,实际可用。上述高浓度強酸的干扰作用則可用先加碱中和的方法予以消除。(7)HClO_4可完全代替二苯胺試剂中的H2SO_4,DNA的显色值不变,HClO_4也同样有消除卤化物以外一般盐类以及碱对显色的干扰作用。(8)上述盐类、碱以及高浓度的强酸的干扰作用是应用二苯胺反应进行有关DNA定量中必須考虑的因素。     

ALA-PDT:新型光动力疗法

传统的肿瘤光动力疗法是利用集聚在肿瘤中的外源光敏剂吸收激发光后启动光动力反应 ,产生活性产物扑杀肿瘤组织。氨乙酸丙酸 (ＡＬＡ)是人体生理过程中血红素合成中的基本原料 ,是原卟啉的前体。在正常组织中ＡＬＡ转变成原卟啉后 ,在亚螯合物酶的作用下 ,再与Ｆｅ+ + 结合成血红素。而在肿瘤组织中亚螯合物酶活性低 ,如有原卟啉产生 ,则不能有效的将之转变为血红素 ,将导致原卟啉集聚。因此如外源输入原卟啉前体ＡＬＡ ,则可在肿瘤中内源生成原卟啉 ,作为内源光敏剂原卟啉应同样可启动光动力反应。本文以离体培养的肿瘤细胞为样品 ,探讨Ａ…     

短梗霉黑色素的分离纯化及结构的初步分析

采用热碱提取、水煮酸沉法从短梗霉发酵液中提取得到黑色素粗品,再经DMSO萃取、酸性甲醇(pH=2)沉淀得到不含多糖和蛋白的短梗霉黑色素。此黑色素不溶于水及常规有机溶剂,可溶于碱性溶液和DMSO;离子交换色谱分析表明黑色素组分均一,出峰时间26±0.5 m in;紫外光谱谱图最大吸收峰为215 nm左右,未见蛋白(280 nm)与核酸(260 nm)的特征吸收峰;红外光谱谱图具有黑色素3μm和6μm的特征吸收峰,并含大量的羟基、氨基,与核磁共振和液质联机谱图结合分析推出短梗霉黑色素可能含有酚羟基、羧基和吲哚等官能团,主要结构骨架为5,6-二羟基吲哚-羧酸和多巴醌,推断该黑色素为酪氨酸酶控制合成的真黑素。     

血红素加氧酶1及其代谢产物在心血管系统病变中的保护作用

血红素加氧酶1(HO-1)最初被鉴定为血红素分解代谢过程中的限速酶,近20年来,其抗炎、抗细胞凋亡、抗增殖和抗氧化功能被逐渐揭示。现有研究认为,HO-1是一种广泛存在的抗损伤效应信号分子,属于热激蛋白家族,直接参与代谢血红素并生成一氧化碳、胆红素和游离铁。正常情况下,HO-1在大多数组织内呈低水平表达,同时可被多种应激环境和病理学改变诱发表达。HO-1不仅可通过其本身发挥损伤保护效应,其代谢分解产物也能够发挥在多种疾病状态下的重要保护作用。本文重点综述HO-1及其分解产物在各种不同类型心血管疾病病变反应中的保护性作用及机制。     

抗坏血酸增强氯高铁血红素诱导的溶血

研究抗坏血酸对氯高铁血红素所诱导的红细胞溶血的影响.红细胞溶血采用在540 nm处测定 上清液血红蛋白吸光度的方法;红细胞巴比妥酸反应产物 (TBARS)测定采用Stocks 等建立的方法;高铁血红蛋白的测定采用Sezebeni等报道的方法.结果表明：抗坏血酸显著增强氯高铁血红素所诱导的溶血.尽管氯高铁血红素本身并不影响红细胞TBARS和高铁血红蛋白的水平,但是,氯高铁血红素和抗坏血酸一起诱导红细胞TBARS和高铁血红蛋白含量的增加;过氧化氢酶显著地抑制抗坏血酸增强氯高铁血红素诱导红细胞的溶血、TBARS和高铁血红蛋白的生成;氢氧自由基淬灭剂显著地抑制抗坏血酸增强氯高铁血红素诱导红细胞溶血.由上述可得到如下 结论：抗坏血酸增加氯高铁血红素诱导的红细胞氧化压力与H₂O₂有关;氢氧自由基可能是抗坏血酸增强氯高铁血红素诱导红细胞溶血的原因;抗坏血酸在氯高铁血红素存在时,可以作为一个亲氧化剂而非一个抗氧化剂.     

金属离子螯合剂对橙汁中L—抗坏血酸的保护及其机理探讨

本文研究了在加热过程中金属离子螯合剂植酸、聚磷酸钠和EDTANa_2对橙汁和橙汁模拟体系中L—抗坏血酸的稳定作用,并采用红外光谱和紫外差光谱对EDTANa_2的保护机理作了初步探讨。结果表明:植酸和聚磷酸钠均不能降低Cu~(2+)对橙汁模拟体系中L—抗坏血酸氧化降解的催化作用,而EDTANa_2不仅能络合Cu~(2+),减少L—抗坏血酸的催化降解损失,而且红外光谱和紫外差光谱及溶剂微扰研究还揭示出EDTANa_2可与L—抗坏血酸形成氢键保护,这种氢键保护作用受到糖和柠檬酸的不利影响。     

S-磺酸型胰岛素A链的旋光性质

胰岛素A链是廿一肽,正处于形成螺旋的临界长度。Schellman曾根据旋光色散数据说明磺酸型A链是松散而无螺旋结构的。我们前此测定了S-磺酸型A键的差别光谱,其结果说明,将pH6.9—8.5对pH1.7的溶液读数,有负的差吸收峰出现,峰的大小在该中性pH值范围内不变。S-磺酸型A链在不同pH值时的旋光性质如图1所示。与前此差吸收的结果相应,于pH5—9.5,[α]D不变,平均值是-98°。但λ_(?)之变化与[α]D不平行。在8M脲中[α]D是-106°,λ_c是198mμ。     

Vgb在大肠埃希菌中表达及生物活性的研究

目的将vgb克隆到大肠埃希菌表达载体pQE-30中,研究vgb表达产物对细胞摄氧能力的影响。方法利用PCR和基因重组技术克隆vgb与大肠埃希菌表达质粒pQE V,大肠埃希菌转化采用CaCl2法,VHb活性分析采用CO示差光谱法。结果克隆了vgb和重组质粒pQE V,vgb基因在大肠埃希菌中获得表达,在A420 nm处达到典型吸收峰。结论 vgb在大肠埃希菌中表达产物加强了对氧的摄取能力,对解决细胞高密度发酵培养中氧需矛盾、促进代谢产物的产率具有非常重要的应用价值。     

天花粉蛋白等五种核糖体失活蛋白的5′－AMP－磷酸酯酶活性

用ＨＰＬＣ和薄层层析等方法,分析了不同反应时间天花粉蛋白（ＴＣＳ）和５＇－ＡＭＰ的反应产物成分,结果显示在０．５ｈ内生成腺嘌呤核苷,随着反应时间的增加,同时有腺嘌呤核苷和腺嘌呤生成,４８ｈ后则反应产物主要是腺嘌呤,α－苦瓜子蛋白、肥皂草蛋白、丝瓜素毒蛋白和多花白树毒蛋白等单链核糖体失活蛋白也有类似结果,紫外差光谱研究结果也表明ＴＣＳ与５＇－ＡＭＰ相互作用显示出明显的时间过程,提示单链核糖体失活蛋白除了Ｎ－糖苷酶活性外,还具有５＇－ＡＭＰ磷酸酯酶活性．     

老龄小鼠胼胝体髓鞘化神经纤维改变

目的研究小鼠老化过程中脑白质区域髓鞘密度和厚度的变化。方法采用透射电镜技术观察3、13、17和22月龄小鼠,脑白质胼胝体区域髓鞘的密度和厚度的改变;计算髓鞘化轴突的g-ratio的改变。结果脑胼胝体区髓鞘密度与年龄呈负相关,22月龄较3月和13月小鼠髓鞘密度降低;髓鞘化轴突g-ratio数值与年龄呈正相关,22月龄小鼠脑胼胝体区g-ratio与3、13、17月龄比较均有增加;比较g-ratio在不同直径轴突上的分布,发现直径在0.2～1μm的轴突上包绕的髓鞘厚度在与年龄呈正相关,而直径>1μm的髓鞘化轴突中髓鞘厚度与年龄呈负相关。结论年龄的增加可能导致脑白质脱髓鞘和髓鞘厚度改变,参与中枢神经系统老化过程中的神经功能减退。     

排硫硫杆菌D6中硫化氢脱氢酶的纯化及性质

从烟气生物脱硫系统的好氧产硫磁性稳态流化床反应器中,经反复纯化分离出脱硫优势菌排硫硫杆菌菌株D6,采用四步工艺纯化出膜结合型硫化氢脱氢酶。SDS-PAGE测定显示其由α1β1亚基组成,光谱分析表明含有1 mol FAD/mol酶,血红素染色揭示小亚基上结合有1 mol血红素c/mol酶,该酶属于氧还蛋白家族。该酶的最适pH为8.6,对马心细胞色素c和硫化物的表观Km分别为2.5μmol/L和6.1μmol/L,反应计量实验表明其氧化产物为元素硫。硫化氢脱氢酶受到硫和亚硫酸盐的抑制,100μmol/L的氰化钾对该酶抑制率达72%。