牛副流感病毒3型的分离鉴定

从黑龙江省某牛场患有呼吸道疾病的病牛鼻液中分离到1株病毒, 该病毒能在MDBK细胞上增殖并产生特征性细胞病变, 对分离毒株进行理化特性、RT-PCR鉴定及序列测定与分析, 结果发现该病毒为RNA病毒, 具有血凝性, 对乙醚、氯仿极其敏感, 不耐热, 对酸的抵抗力差; 分离株与GenBank中已发表的病毒株N基因片段的同源性为82.6%~99.1%, 结果表明分离的病毒为牛副流感病毒3型毒株, 命名为BPIV3 DQ1株。根据GenBank上发表的牛副流感病毒3型核衣壳蛋白N基因序列, 设计合成了一对特异性引物, 能扩增704 bp的目的片段, 可以检测出10个 TCID50/100 μL病毒核酸。     

流感病毒与细胞凋亡

流感病毒与细胞凋亡的相关研究近年来一直是流感研究的热点,流感病毒可使MDCK细胞,呼吸道细支气管细胞,淋巴细胞以及绒毛膜细胞和胎膜细胞发生凋亡,弄清楚流感病毒与细胞凋亡相互间的关系无疑对流感病毒的致病机制及抗感染免疫的研究有着积极的促进作用,本文仅对近几年来,流感病毒与MDCK细胞以及其它相关细胞的凋亡情况或关系的研究作一综述。     

水痘-带状疱疹病毒分离和鉴定

本文报告了用7份水痘或带状疱疹病人的皮肤病变水泡液,在人胚肺二倍体细胞(2BS)中培养传代,分离到7株病毒分离物,第一株是由带状疱疹病例分离到的,经细胞病变、核内包涵体和电镜形态学观察,认为此分离物属于疱疹病毒科成员;经血清学鉴定,证实为水痘-带状疱疹病毒(VZV),其宿主范围与疱疹病毒(HSV)不同,余6株分离物经ELISA、IFA及CF血清学试验鉴定均为VZV。     

流感病毒感染诱导MDCK细胞凋亡的研究

用荧光染色、DNA凝胶电泳等方法检测了A型流感病毒株A1／京防86－1和B型流感病毒株B/沪防93－1诱导狗肾体代细胞(MDCKcells)的凋亡情况,并采用MTT法和流式细胞仪比较了这2株病毒对MMCK细胞的毒力和凋亡诱导能力水平。结果显示：病毒感染6h后,细胞DNA发生断裂,病毒感染12h后,可见明显的染色质凝聚;在一定范围内,细胞凋亡强度表现出明显的时间和剂量依赖关系;并且,A型流感病毒株的毒力和调亡诱导能力均强于B型流感病毒株。实验结果表明：流感病毒感染引起的细胞死亡主要是通过调亡实现的,毒力不同的流感病毒株诱导细胞调亡的能力不同。     

新分离乙型流感病毒的培养温度

乙型流行性感冒病毒在鸡胚培养的温度,各国学者曾作过研究,认为35℃结果最好。我们实验室的分离及传代的常规方法也是培养于35℃。但在1961及1964午乙型流感病毒分离过程中发现,阳性标本的鸡胚羊水或尿液的血凝很不规律,有时甚至全部阴性,特别是冷冻保存(-40℃)的病毒材料,有时盲传二代仍然未见阳性血凝现象。     

流感病毒感染诱导MDCK细胞调亡的研究

用荧光染色、ＤＮＡ凝胶电泳等方法检测了Ａ型流感病毒株Ａ１／京防８６－１和Ｂ型流感病毒株Ｂ／沪防９３－１诱导狗肾传代细胞（ＭＤＣＫｃｅｌｌｓ）的凋亡情况,并采用ＭＴＴ法和流式细胞仪比较了这２株病毒对ＭＤＣＫ细胞毒力和调亡诱导能力水平。结果显示：病毒感染６ｈ后,细胞ＤＮＡ发生断裂,病毒感染１２ｈ后,可见明显的染色质凝聚;在一定范围内,细胞调亡强度表现出明显的时间和剂量依赖关系;并且,Ａ型流感病毒株的毒     

猪流感病毒分离鉴定

用非免疫鸡胚从我国上海、福建、湖北分离到3株猪流感病毒,分别命名为SSH1、SFJ1和SHB1.SIV分离株第5代病毒液对0.7%豚鼠红细胞的血凝活性分别1∶28、1∶27和1∶28,与H3亚型标准血清血凝抑制价1∶28、1∶27和1∶28,但不能被鸡新城疫阳性血清所抑制.纯化的病毒在电镜下观察,可见到猪流感典型的病毒粒子.病毒液接种于小白鼠,可表现出临床症状,剖杀后可观察到病毒性肺炎.猪体回归试验,可表现出临床症状和病理变化,从肺脏中可分离到病毒并且RT-PCR也可检测到病毒相应的基因片段.从纯化的病毒中提取RNA,进行RT-PCR,可扩增出预期的条带.     

鸡胚睾丸支持细胞的分离、纯化与鉴定

以18天鸡胚睾丸为实验材料,经胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法得到生精上皮细胞悬液.在原代培养过程中经差异贴壁和低渗处理后,获得了纯度约为90%的单层支持细胞.对纯化的培养物染色鉴定,结果显示支持细胞为碱性磷酸酶(AKP)阴性,而混杂在其中的另一种体细胞管周细胞为AKP阳性;油红O染色显示,支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴,核内见双极小体;吖啶橙染色证实支持细胞富含RNA;罗丹明123染色显示支持细胞富含线粒体;Hoechst 33342染色显示支持细胞细胞核呈长卵圆形,核的长轴与细胞长轴平行;免疫荧光染色显示支持细胞胞质中表达波形蛋白.建立了一套简单、易行的鸡胚睾丸支持细胞分离纯化与鉴定方法.     

四株鸡有益链球菌的分离鉴定

用厌氧菌增菌培养基（ＢＲ）、厌氧菌血琼脂（ＣＤＣ）、选择乳酸杆菌培养基（ＬＢＳ）从鸡直肠内容物中分离出四株革兰氏阳性链球菌,据分离菌的形态、染色和培养特性及生化试验结果,鉴定为牛粪链球菌两株（Ｓｂ１、Ｓｂ２）,尿链球菌两株（Ｓｆ１、Ｓｆ２）。四株菌对雏鸡安全,无致病性和副作用,对头孢三嗪、复方新诺明耐药。     

猪流感病毒分离鉴定

用非免疫鸡胚从我国上海、福建、湖北分离到3株猪流感病毒,分别命名为SSH1、SFJ1和SHB1。SIV分离株第5代病毒液对0．7％豚鼠红细胞的血凝活性分别1：2^8、1：2^7和1：2^8,与H3亚型标准血清血凝抑制价1：2^8、1：2^7和1：2^8,但不能被鸡新城疫阳性血清所抑制。纯化的病毒在电镜下观察,可见到猪流感典型的病毒粒子。病毒液接种于小白鼠,可表现出临床症状,剖杀后可观察到病毒性肺炎。猪体回归试验,可表现出临床症状和病理变化,从肺脏中可分离到病毒并且RT-PCR也可检测到病毒相应的基因片段。从纯化的病毒中提取RNA,进行RT-PCR,可扩增出预期的条带。     

MDCK细胞和MDCK-G1细胞感染H1N1流感病毒后病毒滴度和细胞转录组表达差异分析

目的通过分析细胞表达基因及其相关信号通路的差异等信息,探索MDCK和MDCK-G1细胞株在接种H1N1流感病毒后出现病毒滴度和细胞生长趋势差异的内在生物学特性等原因。方法通过Illumina测序平台对2株细胞进行转录组测序(RNA sequencing, RNA-seq)和测序结果生物信息学分析后,选择了17个差异基因进行实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)验证。结果 MDCK和MDCK-G1细胞差异基因(differentially expressed genes, DEGs)|log_2(FoldChange)|0和padj≤0.05总数为2 786个。相比于MDCK细胞,MDCK-G1细胞有967个基因的表达显著上升,1 819个基因的表达显著下降。差异基因通过基因本体(Gene Ontology, GO)数据库富集功能注释和京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)进行通路分析发现,2株细胞在免疫调控和细胞生长周期调控上均存在差异,qRT-PCR验证的17个基因中有16个基因的表达趋势与转录组测序结果一致。结论 2株细胞的转录谱存在显著差异。     

新疆辣椒轻微斑驳病毒的分离鉴定

从石河子露地辣椒病株上分离到一株病毒分离物,引起辣椒轻微斑驳。该分离物经人工接种能侵染５科９种植物。感染的辣椒种子可传毒,但桃蚜不能传播。Ｐ－２致死温度９０℃,稀释限点１０＾－９,体外保毒期５０天以上。病毒颗粒呈杆状,稍弯曲,大小为２９５±１０×１７ｎｍ;辣椒病组织超薄切片可见大量以平行或交叉排列的病毒集结体。该分离物与辣椒轻微斑驳病抗血清呈阳性反应。在辣椒上与ＴＭＶ无任何交叉保护。ＳＤＳ－聚丙烯     

虎源猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定

利用细胞培养方法从中国某虎园送检的腹泻虎肠内容物中分离出1 株细小病毒(TPV/ HT - 69),经系统的形态学、理化学、血清学试验、人工感染试验、PCR 扩增和VP2 基因序列分析,符合猫泛白细胞减少症病毒特征,证明该毒株为猫泛白细胞减少症病毒强毒。     

云南省两株环状病毒的分离和鉴定

从云南省采集的中华(?)蚊和棕头库蚊中,分离到两株对3周鼠致死的病毒。血清学鉴定表明,该病毒与披膜病毒科(甲病毒属)、黄病毒科、布尼亚病毒科病毒的免疫腹水,以及呼肠孤病毒科环状病毒(M14)的免疫腹水均不发生反应。电镜观察病毒为球形,具双层壳体的颗粒,直径为70.35±3.07nm,毒粒常常和颗粒状包涵体及管状结构相连;核衣壳具有环状病毒特有的20面体对称结构,直径为56.06±2.42nm。在负染标本中能观察到直径为38.36±2.42nm的核心颗粒。该病毒对乙醚相对抵抗,对酸,热敏感。聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,病毒基因组由10条RNA片段组成,分子量在0.3～2.5×10~6道尔顿之间,病毒基因组RNA带形分布(3-3-3-1)类似环状病毒,但与已知环状病毒RNA带形分布都有不同。     

miR26a和miR939调控H1N1型流感病毒在MDCK细胞中的复制

摘要：【目的】研究发现microRNAs（miRNAs）可以参与调控病毒在宿主细胞内感染和复制的过程。作者研究了两条miRNAs对H1N1型流感病毒在宿主细胞内复制的影响。【方法】构建miR26a和miR939的高效表达载体,并将这两种表达载体转入MDCK细胞中,24 h后用H1N1型流感病毒感染转染后的MDCK (Madin dardy canine kidney) 细胞,接种72 h后,检测流感病毒的复制情况,研究miR26a和miR939对H1N1型流感病毒在MDCK细胞内复制的影响。【结果】实验结果表明,miRNAs的表达载体可以在细胞内高效表达miRNAs,不同的miRNAs对流感病毒在MDCK细胞中复制的调控作用不同, miR26a可以有效抑制流感病毒在MDCK细胞中的复制,而miR939则促进流感病毒在MDCK细胞中的复制的作用。【结论】细胞内miRNAs可以调控H1N1型流感病毒在宿主细胞中的复制过程,本文首次报导miR26a和miR939在流感病毒复制过程中的调控作用。     

鼠痘病毒的分离鉴定及感染性研究

分别从自然感染死亡的小鼠不同病理组织内分离到一种大小为250～300nm×160～190nm的卵圆型病毒粒子。以腹腔注射的方式将纯化的病毒粒子回复接种到小鼠体内,能引起小鼠死亡,从不同的病理组织内分离到与接种病毒粒子相同的病毒粒子。病理组织的超薄切片电镜观察结果表明在肝、肺、脾、肠等组织的细胞质内均能观察到病毒粒子的存在,表明病毒的复制和装配是在细胞质内完成的,该病毒应归类于痘病毒科。     

流感病毒RNA聚合酶的分离与纯化

流感病毒的RNA词是由3个亚基组成的复合物,这3个亚基统称为3P蛋白,分别由2个碱性亚基PBI、PBZ和1个酸性亚基PA组成。在病毒体内,3P与IUqA形成较紧密的3P－RNA复合物,该复合物又往往与NP形成核蛋白体（ribonu－cleoProteinRNP）。3P与RNA及3P－RNA与NP之间结合都比较紧密,三者之间不易被分离。本文用不同介质组合的分步密度梯度超速离心法成功地将3P与RNA及NP分离开来,获得了较纯的3P蛋白,为进一步研究流感病毒RNA铜的结构和功能奠定了基础。1材料与方法1．亚病零培养及病毒粒子分离4k．xH验所用病毒为甲型流感病…