三种植物花粉原生质体的大量分离与初步培养

利用花粉水合导致外壁破裂，使内壁得以酶解，分离出鸢尾（Iris tectorum Maxim),风雨花（Zephyranthes grandiflora Lindl)和萱草（Hemerocallis fulva L.)三种植物成熟花粉的原生质体。初步分离出萱草四分体至成熟花粉（单核早期除外）各时期的原生质体，经过纯化处理，获得较纯净的有生活力的原生质体群体，萱草花粉原生质体的培养实现了细胞壁再生，管状及其它多种结构的形成以及生殖核的一、二次分裂。     

萱草幼嫩花粉原生质体培养启动细胞分裂的超微结构研究

萱草(Hemerocallis fulva L.)幼嫩花粉,即后期小孢子原生质体在培养8天时进入有丝分裂或已形成二个细胞。此外,还观察到游离核分裂、无丝分裂、微核形成等现象。这显示了花粉原生质体分裂方式的多样性。在启动分裂时发生一系列变化:如细胞核移位、大液泡消失、细胞质电子密度增加、细胞器增多、质体不含淀粉等。再生的细胞壁含许多小泡,很少纤丝,表现出现有培养条件下壁的形成能力薄弱。这是今后改进培养技术需要特别注意的问题。     

甘蓝型油菜和紫菜苔花粉原生质体的大量分离

第一次由两种芸苔属作物甘蓝型油菜(Brassica napus L.)和紫菜苔(B.campestris var-purpurea)的成熟花粉中成功地分离出大量原生质体。分离率最高分别达66.7%与70.4%。绝大多数花粉原生质体是生活的。在分离技术上,改进了原来在几种单子叶植物中所用的水合与酶解同时进行的“一步法”,建立了适于油菜和紫菜苔的“二步法”,即:首先将花粉经长时间水合吸胀,脱去外壁获得仅有内壁的花粉;然后通过酶解除去内壁获得花粉原生质体。研究了影响水合与酶解两个过程的各种因素。     

烟草幼嫩花粉原生质体分离与早期离体发育

建立了两种分离烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ）幼嫩花粉原生质体的方法：一为通过花药漂浮培养释放出外壁裂开的花粉,后者转入酶液彻底脱去外壁,内壁降解而分离出原生质体（简称“花药预培养法”）;二为花粉经饥饿处理后,转入酶液释放原生质体（简称“花粉饥饿预处理法”）。对影响分离效果的主要因素作了研究。用花药预培养法分离的幼嫩花粉原生质体,在Ｋ３ 培养基中可再生细胞壁,启动１ 次细胞分裂,或萌发花粉管。表明具有孢子体发育与配子体发育的潜能。观察到花粉原生质体分裂成二细胞后,其中１ 个子细胞又长出花粉管的稀有现象,暗示其开始启动孢子体发育后又重新恢复配子体发育途径     

烟草花粉原生质体与叶肉原生质体的融合及培养早期变化

用ＰＥＧ—高Ｃａ高ＰＨ法诱导抗卡那霉素的烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ）品系Ｎ３６４＋Ｋｍ＋花粉原生质体和黄花烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｒｕｓｔｉｃａ）叶肉原生质体融合。幼嫩花粉原生质体和叶肉原生质体之间的融合体培养启动胚胎发生分裂,经卡那霉素筛选后,少数多细胞团存活并形成小愈伤组织。成熟花粉原生质体与叶肉原生质体之间的融合体则仅产生管状结构。这一结果表明,作为融合一方的花粉原生质体的发育时期对融合产物的发育途径有重要影响。     

银杏雌配子体发育及原生质体分离与培养的研究

Results of observation showed that the female gametophyte of Ginkgo biloba was at the coenocytic stage from March 30ty to May 30ty. A density of 6-8 x 10(5) protoplasts/ml with a viability of 87.3% was achieved when the female gametopytes collected from May 8th to 15th were treated with 0.5% cellulase Onzuka R-10, 0.5% Pectolyase for 4-5 hours. The thin-layer liquid Murashige and Tuker medium modified by omitting ammonium ions and supplementing with glutamine 1000 mg/L, Vc 5 mg/L, benzyladenine 1.0 mg/L and naphthaleneacetic acid 3.0 mg/L was used for the protoplast culture and multiple cell colonies were obtained.     

植物花粉培养研究进展

花粉培养又称为游离小孢子培养,指将发育到一定阶段的花粉从花药中游离出来成为分散或游离状态,通过培养使花粉粒脱分化,进而发育成完整植株的过程。花粉培养的主要目的是获得单倍体植株,进而得到双单倍体(double haploid,DH)植株,最终获得纯合系物种。本文对花粉培养形成植株的物种信息进行了收集整理,概述了国内外花粉培养的一些最新研究进展,包括影响花粉培养形成胚的因素以及提高花粉胚产量的措施,并对花粉培养的前景进行了展望。     

花粉生殖细胞的大量分离与纯化

被子植物的花粉生殖细胞是精子的前体,在生殖过程中占有重要地位。由于它被营养细胞与花粉壁包围,一般只能以花粉粒为单位进行研究。1986年以来,我们用压片法分离出花粉生殖细胞,作了有关细胞生物学研究,同时指出分离的生殖细胞用于离体培养与遗传操作的意义。作者参考了 Russell 分离精子的一步“渗透压冲击法”,建立了适于大量分离与纯化生殖细胞的“二步渗透压冲击法”(以下简称“二步法”)。此外,还作     

陆地棉胚性愈伤组织原生质体的制备,培养及植株再生

以陆地棉栽培品种“鲁棉６号”下胚轴的胚性愈伤组织为材料,制备并培养原生质体。采用继代培养７￣９ｄ、活力旺盛的胚性愈伤组织,在１％纤维素酶、１％果胶酶、０．７ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４、２．５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｃａ＾２＋、０．５ｍｏｌ／Ｌ甘露醇、ｐＨ５．８、３０℃的条件下,具活力的原生质体得率最高。经分离纯化后,原生质体在含有０．４５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的Ｋ３无机盐、ＮＴ有机物并附加０．１ｍｇ／Ｌ,２,４－     

甘蔗原生质体的植株再生

从甘蔗（Ｓａｃｃｈａｒｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍ Ｌ．）嫩叶外植体诱导愈伤组织,经继代培养后,挑选胚性愈伤组织,转入ＭＳ３ 液体培养基,进行悬浮培养。当培养物分离出小粒状的细胞团,细胞变得小而圆时,用于分离原生质体。原生质体以琼脂糖固化的培养方式培养于ＭＲＰ１ 培养基中。由原生质体再生的愈伤组织有两种类型。挑选粒状、坚实的再生愈伤组织转移到Ｎ６ 分化培养基上,“新台糖１ 号”再生的愈伤组织,在含有ＫＴ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ的培养基中,分化出绿芽并长成完整的植株。而“粤糖５７－４２３”和“ＵＳ６６－５６－９”再生的愈伤组织,在加有０．１％ 的活性炭的培养基中,前者分化出白化苗,后者分化出根     

天蓝苜蓿原生质体培养再生植株

苜蓿属（Ｍｅｄｉｃａｇｏ）植物多为优质牧草,是进行原生质体培养研究较多的一个属。至今已有１０余种苜蓿属植物进行过原生质体培养的研究,多数获得了再生植株［１～６］。天蓝苜蓿是一种优质牧草、绿肥和药用植物。关于它的体外培养已有一些报道［５,７,８］,但原生质体培养尚未能再生植株。本文以悬浮系为材料进行了原生质体的分离与培养,并经胚状体发生和器官发生两种途径获得了再生植株。１　材料和方法天蓝苜蓿（ＭｅｄｉｃａｇｏｌｕｐｕｌｉｎａＬ．）种子采集于吉林省西部草原。干种子用浓硫酸浸泡３ｍｉｎ,升汞灭菌５ｍｉ…     

水稻原生质体再生成熟植株

水稻原生质体培养一直是人们注意的问题,近年来这方面工作开始有了可喜的进展。本文简要报道用水稻种子成熟胚诱发的愈伤组织所制备的原生质体,经离体培养得到再生成熟植株的结果。     

苎麻原生质体培养及植株再生

用苎麻（Ｂｏｅｈｍ ｅｒｉａ ｎｉｖｅａ）子叶诱导愈伤组织并建立悬浮细胞系． 用４．５％ 纤维素酶、０．８％ 离析酶、０．８％ 半纤维素酶的混合酶液分离悬浮培养细胞,可得到２×１０６ 个／ｇ ｆｒ．ｗｔ的原生质体．这些原生质体以海藻酸钠包埋方式培养在附加２,４－Ｄ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ、ＫＴ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ 的ＫＭ８ｐ 培养基中,５０ ｄ 左右可形成肉眼可见的小愈伤组织．愈伤组织经过扩增,在不同的分化培养基上可诱导芽、根的形成,再生出完整植株． 子叶原生质体则仅能进行几次有限的分裂     

烟草原生质体微滴培养及细胞早期分裂的定点观察

原生质体培养的常规技术是群体培养。而建立单个(或少数)原生质体培养技术则可以跟踪每一原生质体的动态变化与研究不同类型原生质体之间的相互关系,从而使有关的细胞生物学研究更加精确深入;还可以有选择地单独培养细胞融合体、突变体、转化细胞等遗传操作     

颠茄胚囊细胞原生质体的酶法分离和观察

分离被子植物雌配子原生质体对发展植物受精工程有着重要意义。最近几年,虽然用酶法分离生活的胚囊已有一些成功的报道。但对分离组成胚囊细胞的原生质体前人还没有进行过尝试。1984年我们首次从烟草生活胚珠中分离出卵细胞、中央细胞、助细胞和反足细胞的原生质体。最近我们又用颠茄胚珠为材料,采用酶解压片技术进行分离胚囊细胞的原生质体,也取得预期的结果。获得了有活性的卵细胞、中央细胞和助细胞的原生质体。从而证明这项技术是有推广应用价值的。在观察中发现用酶法分离生活胚囊细胞的原生质体,能     

大叶紫花苜蓿愈伤组织原生质体再生植株

大叶紫花苜蓿下胚轴诱导的愈伤组织在继代培养基上生长快速,易于分散。继代第１２ｄ的愈伤组织原生质体的得率为６．５×１０７／ｇ鲜重。原生质体培养基为ＳＨ基本培养基,含有１．０ｍｇ／Ｌ２,４－０、０．５ｍｇ／ＬＢＡ、２．０ｇ／ＬＣＨ、２％蔗糖、６％葡萄糖、５ｍｍｏｌ／ＬＭＥＳ,培养密度为１．０×１０５／ｍＬ。培养至第１２ｄ时的原生质体再生细胞植板率为３．７％。由原生质体形成的小愈伤组织在含２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ的ＭＳ固体培养基上大量增殖。增殖的愈伤组织转移至２．０ｍｇ／Ｌ２－ｉｐ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ的Ｂ５培养基上,形成体细胞胚并发育成完整植株。