制备高纯度、高产率总RNA的简易方法1)

异硫氰酸呱和氯化物为最有效的蛋白质变 性剂w10 Cox首先用肌盐氯化物提取RNA['10 Chirgwin用强变性齐U和异硫氰酸呱从富含RNuse 的组织细饱中提取完整RNA [410 Han等 人证明异硫氰酸肌在低温下提取RNA是有效 的，并省去了超速离心['1o Feramisco提出了结 合呱盐与热酚来分离RNA的方法［[61。本文报 道的是一种新的、快速有效的、结合了异硫氰酸 狐、氯仿和酚提取RNA 的方法。它不同于 Feramisc。的肌剖：热酚法的地方是采用了一次 性抽捉，在4小时内制备出高纯度、高产率而未 降解的RNA，由于省略了肌盐一Cscl超速离心 步骤，此方法既适合于从大样本（30g）组织也 适合从微量样本（3mg组织或106个细胞）中分 离RNA     

三七总RNA提取方法的对比研究

比较利用改进的异硫氰酸胍一步法、异硫氰酸胍高盐法、CTAB法和Thomas’RNA提取法等4种方法提取三七根茎2个部位总RNA的可行性。结果表明,改进的异硫氰酸胍一步法和异硫氰酸胍高盐法能有效地抑制酚类物质、多糖及皂苷等次级代谢产物对总RNA的影响,可从三七根茎中获得质量高、完整性好的总RNA。RT—PCR分析显示提取的总RNA具有反转录活性。这2种方法具有快速、简单、有效的特点。     

一种改良的RNA超离心制备方法

RNA制备是分子生物学中常用的实 验技术之一。RNA的常用制备方法包括蛋白酶K/SDS法、异硫氰酸胍或盐酸肌超离心法以及热酚法等。我们在制备非洲爪赡(XenopusLaevis)早期胚胎RNA的过程中,通过对不同实验方法的比较,摸索出一种RNA制备方法(改良法),提高了起离心的效率,简要介绍如下。     

檀香心材总RNA提取方法的比较研究

为筛选檀香心材总RNA提取方法,对5种提取方法进行比较研究,包括Trizol法、改良CTAB法、SDS酸酚法、异硫氰酸胍-CTAB法、异硫氰酸胍-SDS法。结果表明,Trizol法和异硫氰酸胍-CTAB法不能提取出檀香心材总RNA,而SDS酸酚法、改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法均能提取檀香心材总RNA。SDS酸酚法的A260 nm/A230 nm小于2.0,且RNA产率低,仅为(27.94±1.06)μg g–1,不能满足后续实验要求。而改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法提取的总RNA带型清晰,完整性好,A260 nm/A280 nm为1.8~2.0,A260 nm/A230 nm大于2.0,RNA产率分别为(79.06±4.22)和(107.00±1.36)μg g–1。分别以改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法提取的总RNA为模板,通过RT-PCR反应,扩增檀香Actin基因片段,结果二者扩增产物大小相同且条带单一,说明改良CTAB法与异硫氰酸胍-SDS法为檀香心材总RNA提取的较好方法。     

草坪草总RNA几种提取方法的比较

分别采用DEPC水法、TRIzol法、CTAB-LiCl沉淀法、SDS-酚法、SDS提取液抽提法以及异硫氰酸胍法等6种方法提取草坪草总RNA,通过检测对各种方法的提取效果进行比较分析。结果表明,DEPC水法是最经济、操作最简单的一种方法,并且提取的RNA质量较好、可靠性高、易于大量制备,是提取草坪草RNA比较理想的方法之一,建议使用该方法。利用TRIzol法提取到的28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,效果较好,操作简单,符合分子生物学实验要求。CTAB-LiCl沉淀法、SDS-酚法、SDS提取液抽提法也获得较高质量的RNA,但存在不同程度的DNA污染。异硫氰酸胍法提取RNA有明显的蛋白质污染,且RNA部分降解,此种方法不予采用。     

简便、快速提取高质量的RNA分子

MethodsforHandy,RapidIsolationofHighQualityRNAbyGuanadiumThioeyauateDuJianYuanYanhuaMaShenglinDongZhiwei(BeijingInstituteforCancerResearchBeijing100034)硫氰胍是一种有效的蛋白变性剂。早在1979年,Chirgwin等就利用氯化铯／硫氰胍超离心技术成功地从RNA酶富集的胰脏组织中提取出未降解的RNA分子[2],从而使它成为抑制RNA酶的首选药物并得到广泛使用,但受到超速离心设备的限制。1983年,Cathala报道了氯化锂／硫氰胍RNA提取法[1]。该方法操作简便,获得的RNA质量很高,但所需时间较长。为了能在短时间内更快…     

枣不同器官和组织RNA提取方法的研究

以田间幼嫩叶片为试材,建立枣RNA改良CTAB提取法,改良之处包括利用巯基乙醇和PVP联合去除多酚、CTAB与异硫酸氰胍联合促进RNA释放及加入糖原提高产率等.改良CTAB法提取液组成:2% CTAB,4mol/L异硫酸氰胍,100mmol/L Tris-HCl(pH8.0),20mmol/L EDTA(pH8.0),2% PVP,4% β-巯基乙醇,250μg/ml糖原.进而采用Trizol试剂法、改良CTAB法、改进SDS-酚法、热硼酸法和异硫氰酸胍法5种方法分别对枣组培苗、幼叶、幼嫩枝皮、根皮和枣果5种器官和组织进行了总RNA提取.结果表明,组培苗RNA提取以Trizol试剂法为最佳,田间幼叶和成熟果实宜采用改良CTAB法,幼嫩枝皮和根皮宜采用改良CTAB法或改进SDS-酚法;本研究建立的改良CTAB法可作为枣不同器官和组织RNA提取的通用方法;根据季节可从不同器官和组织中获得高质量RNA;枣组织RNA含量相差较大,以幼嫩叶片含量最高,其次为组培苗、枝皮、枣果和根皮.     

几种提取RNA的方法

以肝脏组织和NDV感染的鸡胚尿囊液为例,简单介绍了几种提取细胞或组织液中总RNA及mRNA的方法－SOD－蛋白酶K法、异硫氰酸胍法、loigo(dT）纤维素亲和层析法。SDS－蛋白酶K法提取RNA经济可靠,但纯度稍低;异硫氰酸胍法适于提取细胞中的总RNA,纯度较高;利用ligo(dT)能与mRNA poly（A^ )尾结合的特性提取组织细胞中的mRNA.     

快速提取棉花蕾期高质量RNA的改良方法

棉花组织中因富含棉酚、多糖和单宁等次生代谢物,RNA难分离,易降解,导致现有RNA快速提取试剂盒提取的棉花RNA产率低、质量差,无法应用于实验操作。针对棉花组织次生代谢物多的特点,以酸酚法为基础,结合RNA吸附柱,通过对幼苗期和蕾期棉花叶片RNA提取,总结出一种快速提取棉花组织RNA的方法。与热硼酸法、酸酚法及试剂盒法相比,所述方法具有步骤少、产率高、质量好等特点,操作简单、整个实验在1h内完成,可开发出提取多糖多酚类生物组织RNA试剂盒。     

从棉铃虫体中提取总RNA的一种有效方法

昆虫组织细胞中含有大量的RNA酶 ,在提取其RNA时 ,防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键。目前提取动物组织细胞总RNA的方法主要采用“异硫氰酸胍 酚 氯仿抽提”一步法操作 ,但从昆虫组织细胞中提取RNA尚无明确的方法。本实验根据昆虫组织细胞中RNA的分子结合其它蛋白等次生物质的特性不同 ,适当的调整该方法 ,从棉铃虫中提取到了完整、无降解、纯度高的RNA ,适用于Northern杂交和cDNA合成等分子生物学操作     

茶树叶片总RNA提取方法的比较研究

针对茶树叶片中富含多酚类物质的特点,以陕西地方茶树代表种质紫阳槠叶种的叶片为材料,比较了Trizol法、异硫氰酸胍法和改良SDS-酸酚法三种不同的总RNA提取方法。结果表明改良SDS-酸酚法能够从新鲜叶片、冷冻叶片和干燥叶片中提取到质量高、完整性好的总RNA,经检测28SrRNA亮度为18SrRNA的2倍,A260/A280值介于1.83～2.01之间。以鲜叶、冻叶和干燥叶片的总RNA为材料,进一步用于DDRT-PCR分析,均可获得清晰稳定的多态性结果。说明改良的SDS-酸酚法能抑制茶树叶片中多酚类物质对总RNA提取的影响,是一种适于茶树叶片总RNA提取的有效方法。     

非洲菊花瓣RNA提取方法的改进

利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒（RNeasy Plant Mini Kit）提取非洲菊（Gerbera hybrida）花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步叶提取总RNA,在RNA沉淀后,再次加入适量变性液,冻融2次,再加热至45℃使RNA完全溶解;试剂盒提取时,适当延长各提取步骤的离心时间,并增加DEPC H2O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。     

提取高质量人参RNA的方法研究

针对人参组织多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的CTAB法和改良的Trizol法等3种不同的RNA提取方法.3种改良的方法均能从人参组织中提取到总RNA.其中改良的Trizol法能有效地抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的叶片中获得高质量、完整性好的总RNA,每克新鲜组织RNA产量在90～120!g之间,电泳分析,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间.用改良的Trizol法分离的RNA,已成功进行了RT-PCR及人参叶cDNA文库构建等研究.     

非洲菊花瓣总RNA提取方法的改进

利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒（RNeasy Plant Mini Kit）提取非洲菊（Gerbera hybrida）花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步法提取总RNA,在RNA沉淀后,再次加入适量变性液,冻融2次,再加热至45 ℃使RNA完全溶解;试剂盒提取时,适当延长各提取步骤的离心时间,并增加DEPC H2O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。     

3种破壁方法提取念珠菌总RNA效果的比较

念珠菌是最主要的致病性真菌之一。随着医学分子生物学的发展,有关对念珠菌的致病基因及其表达的研究越来越广泛,进行这些研究的一个关键步骤就是RNA的提取。主要由几丁质组成的真菌的细胞壁厚且坚韧,因此破壁是提取念珠菌RNA的关键。常用破壁方法包括:热酸性酚裂解法破壁酶、液氮破壁、酸洗玻璃珠破壁、微波破壁等[1,2]。酶与细胞的孵育会影响RNA的质量[3],热酸性酚裂解法RNA提取效率不高[4],超声波破壁对实验室设备要求较高。本实验我们设计了国内外常用的液氮研磨、酸洗玻璃珠破壁法来提取RNA。另外,考虑到温度对RNA的影响,还加…     

山药组织总RNA提取方法的比较与分析

采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较.结果表明,Trizoi法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适合于富含多糖类物质的山药组织总RNA的提取;CTAB-LiCl法提取叶片和块茎组织总RNA质量高、完整性好、成功率高,可作为山药类植物总RNA提取的首选方法.     

条斑紫菜丝状体总RNA提取方法比较

目的:为了获得质量较高的条斑紫菜丝状体总RNA,对几种常用提取方法进行研究。方法:以条斑紫菜自由丝状体为材料,比较了用异硫氰酸胍法、CTAB法、SDS/酚法、TRIzol法、RNAplant法提取的RNA的质量和纯度。结果:异硫氰酸胍法提取RNA的成本低,但纯度不高;CTAB法产率较小,且不能完全去除多糖或蛋白质;SDS/酚法未能获得完整的RNA;TRIzol法未能见到5SrRNA条带,且带有杂带;而RNAplant法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高,其D260nm/D280nm值为1.836,经逆转录得到的双链cDNA扩增产物长度在200bp以上。结论:实验结果表明RNAplant法更适于条斑紫菜丝状体总RNA的提取。     

百合花瓣总RNA提取方法的研究

以亚洲百合品种Pollyanna和东方百合品种Sorbonne为试材,在比较异硫氰酸胍法、SDS/酚法与CTAB-L i Cl法提取总RNA效果的基础上,针对百合组织中富含多糖的特点,在Sorbonne提取RNA中加入特殊除多糖步骤,改进了CTAB- L i Cl法.结果表明,改进CTAB- L i Cl法能有效去除多糖,提取到的RNA2 8S r RNA亮度约为18S r RNA的2倍,A2 6 0 / 2 80介于1.8～2 .0之间,A2 6 0 / 2 30为2 .0 ,Pollyanna RNA产率为36 .3μL·g- 1 ,Sor-bonne RNA产率为10 .2 μL·g- 1 ,经RT- PCR获得了特异性条带,说明用改进CTAB- L i Cl法从百合花瓣中提取到的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于进一步的分子生物学研究.     

槟榔黄化病组织RNA提取方法的比较

为了从发生黄化病的槟榔茎、叶、花中提取到完整的RNA,采用了CTAB法、Trizol法和异硫氰酸胍法提取槟榔黄化病组织RNA。从RNA的完整性、产率和纯度方面对这几种方法进行了比较,结果表明,异硫氰酸胍法所得RNA完整性较好,条带清晰无明显降解,OD260/OD280介于1.8-2.0之间,RNA得率较高,为120μg/g以上,并能成功进行反转录制备cDNA,表明该RNA可以进行后续分子生物学操作。     

东亚砂藓(Rhacomitrum canescens)RNA提取方法的比较和改进

方法:以东亚砂藓为材料,用CTAB法、热硼酸盐法和改良的SDS/酸酚法提取东亚砂藓总RNA,并采用3种方法进行沉淀,从提取RNA的纯度、完整性、产量、耗时和RT-PCR效果等分析确定适用于东亚砂藓总RNA提取的方法。结果:研究表明:CTAB法提取的RNA 28S rRNA明显缺失,泳道模糊不清,杂质多,热硼酸法和改良的SDS/酸酚法提取RNA 28S rRNA,18S rRNA条带清晰,OD260/OD280都在1.7以上,纯度高,但热硼酸法提取出的RNA有DNA污染,RNA的含量(15.68~35.2μg.g-1)低于SDS/酸酚法提取RNA的含量(46.5~51.9μg.g-1)3种沉淀方法比较认为无水乙醇配合LiCl沉淀RNA节省时间,反转录和RT-PCR效果好。结论:改良的SDS/酸酚法适合东亚砂藓RNA的提取。