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苏云金芽孢杆菌无晶体突变株的逐级升温筛选及其转化性能 总被引:22,自引:7,他引:15
逐级从42 ℃到44 ℃和46 ℃升温培养、并用0-05 % SDS 处理苏云金芽孢杆菌YBT1463 ,获得了一系列内生质粒被部分或完全消除的无晶体(Cry -) 突变株,对4 种Cry - 突变株的转化性能及导入的外源质粒的稳定性进行了研究。用限量培养基和42 ℃培养筛选到Cry - 突变株后,升温至44 ℃,从Cry - 突变株得到内生质粒被进一步消除的突变株;然后升温至46 ℃来培养其中突变株BMB170 ,并用0-05 % 的SDS进行处理,最终筛选到1 株无质粒突变株BMB171 。用pHT3101 、pBMB1736 、pBTL1 和pHV1249 等4 种外源质粒进行的转化及稳定性研究表明,转化频率的大小及导入质粒的稳定性与用作受体菌的Cry - 突变株携有的内生质粒数之间呈现一定的相关性,Cry- 突变株的转化频率显著高于出发菌株,其中BMB171 的转化频率最高达107 转化子/μg DNA,且所导入的外源质粒的稳定性也高于其它Cry - 突变株及出发菌株YBT1463 。 相似文献
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利用淀粉产生碱性蛋白酶工程菌的构建 总被引:8,自引:0,他引:8
以不能利用淀粉为碳源、抗pp系列噬菌体和pL1噬菌体、产碱性蛋白酶(9400-9800u/ml)的BacilluspumilusC172-60为受体株,采用原生质体转化技术将携带糖化型小淀粉酶基因(Amv)、Cmr基因、Kmr基因的pBX96质粒导入到受体株内,经两次利福平抗性筛选,获得一株能直接利用淀粉为发酵碳源、保留噬菌体抗性、产碱性蛋白酶的工程菌C172-306(pBX96)。菌体增殖96.5代质粒丢失率为0.77%,摇瓶发酵蛋白酶活力140 相似文献
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铜绿假单胞菌PIC-N萘降解基因的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)PIC-N对萘、邻苯二甲酸、水杨酸等有较强的氧化能力。发现该菌株以禁为底物可诱导产生芳香烃分解酶系。菌株中存在一个57.4kb的质粒,经限制性内切酶HindⅢ处理可产生7个片段,用限制性内切酶EcoRⅠ处理可产生8个片段。将以限制性内切酶HindⅢ部分酶切的片段克隆至大肠杆菌质粒pMFY43上,获得29个克隆株。通过对含有菌株PIC-N质粒HindⅢ片段的7个重组质粒进行限制酶分析,绘出了该质粒HindⅢ内切酶7个切点的酶切图谱。 相似文献
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利用Tn5定位诱变筛选紫云英根瘤菌Exo^—变种 总被引:1,自引:0,他引:1
利用Tn5定位诱变方法,对质粒pJBB5进行Tn5插入诱变,得到10个Tn5在59kbB5外源片段上有不同插入位点的质粒TN11,TN112,TN22,TN23,TN31,TN41,TN91,TN101,TN131,TN141。将Tn11等分别转移到已经含有不相容质粒pPH1JI的紫云英根瘤菌107菌株中,使之发生同源变换。通过抗性选择及表型鉴别,筛选到3株菌落表型干燥(Muc-)的酸性胞外多糖(EPS)合成缺陷菌株(Exo-)107(TN22),107(TN101),107(TN131)。Southern杂交分析证明这3株变种的Tn5插入确实是同源交换而不是转座产生,表明经过适当改良的Tn5定位诱变法可以应用于紫云英根瘤菌Exo-变种的筛选。 相似文献