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以对硝基苯糖苷基为底物,测定了慈菇的12种糖苷酶,其中α-甘露糖苷酶、α-和β-半乳糖苷酶活力较高;经硫酸铵分级沉淀,SephadexG-150分子筛层析,ConASepharose4B亲和层析,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换层析,从慈菇抽提液纯化了α-半乳糖苷酶。纯化酶的比活提高1072倍,活力回收15.6%,在圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-PAGE上均显示1条蛋白质带,在α-半乳糖苷酶浓度为150mU/ml的溶液中测不到其他糖苷酶的活力。慈菇α-半乳糖苷酶的分子量用SephadexG-100凝胶过滤柱测定或在SDS-PAGE上测定均为60kD,酶反应的最适pH在5.8附近,最适温度为60℃。该酶分解对硝基苯基-α-半乳糖苷的K_m值为3.7×10 ̄(-4)mol/L,V_m值为2.1×10 ̄(-4)mol/L。银离子、汞离子显著抑制酶活力,D-半乳糖和密二糖均竞争性地抑制该酶水解对硝基苯基α-D-半乳糖苷的活力,根据Dixon作图求得其K_i值分别为0.92×10 ̄(-3)mol/L和1.98×10 ̄(-3)mol/L。2-脱氧-D-半乳糖和L-岩藻糖为酶活力的非竞争性抑制剂。化学修饰 相似文献
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乳酶克鲁维酵母β—半乳糖苷酶的分离纯化及性质研究 总被引:2,自引:0,他引:2
乳酸克鲁维酵母经高压破壁后的粗提液,其β-半乳糖苷酶比活力为5.56u/mg.经硫酸铵沉淀,丙酮沉淀,PAPMA-Aepharose 4B柱层析后,乳糖酶比活力达370u/mg,纯化了66.2倍,SDS-PAGE鉴定为一条带,分子量85000Da。酶作用的最适pH在6.4-6.8之间,最适温度40℃,50℃保温15min酶活丧失90%,以邻硝基苯-β-半乳糖苷为底物的米氏常数为2.78mmol/L 相似文献
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蚕豆β—半乳糖苷酶的纯化及性质研究 总被引:2,自引:0,他引:2
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大肠杆菌中与抗原K(?)s ab基因相连锁的棉子糖操纵子(raf)编码的α-D-半乳糖苷酶经硫酸铵沉淀,Sepharose 4B和DEAE纤维素等提纯步骤获纯化品,其在PAGE上呈单一电泳区带,分子量80000。粗酶品经Sepharose 4B后呈现为两个酶活性峰。该酶特性与染色体编码的同功酶有明显差异。最适温度为35—37℃,最适pH 7.5。以PNPG、蜜二糖、棉子糖为底物,其米氏常数分别为0.11,2.1和136mmol/L。Mn~2 离子影响酶稳定性,然而可以被巯基试剂消除。双扩散免疫实验初步表明,产H_2S基因连锁的raf操纵子编码的α-D-半乳糖苷酶与该酶可能具有相同抗原性。 相似文献
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利用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析(DEAE-22)、SephadexG-75凝胶过滤从嗜热脂肪芽孢杆菌胞内提纯得B半乳糖甘酶。研究表明,该酶最适表观反应曙度和最适PH分别为60OCT6.4D50OC该酶具有良好的热稳定性.碱金属和碱土金属盐对酶有激活作用,重金属Zn 相似文献
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健康或系统感染TMV的番茄叶片胞外都存在高比活可溶性β-半乳糖苷酶。系统感染TMV的番匣叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩-20℃丙酮沉淀、CM-SephadexC-25阳离子交换层析、DEAE-SephadexA-25阴离子交换层析和SephadexG-150凝胶层析纯化,获得PAGE和SDS-PAGE均一的β-半乳糖苷酶。该酶的分子量为74kD,酶蛋白带能被过碘酸-Schiff试剂染成档红色,属糖蛋白 相似文献
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α-半乳糖苷酶 总被引:3,自引:0,他引:3
最近各种媒体不断报道红血球类型可以通过酶处理进行转换 ,这对于输血和开拓血源有十分重要的意义 ,所用的酶是α 半乳糖苷酶。α 半乳糖苷酶 (α galactosidase ,α D galactosidegalactohydrolase ,EC 3.2 .1 .2 2 )能专一地催化α 半乳糖苷键的水解。它广泛存在于各种植物和动物体内 ,许多微生物如双歧杆菌 (Bifidobacterium)、黑曲霉菌 (Aspergillusniger) [1] 、大肠杆菌 (Escherichiacoli)K 1 2 1 [2 ]的抽提液中也发现有α 半乳糖苷酶的… 相似文献
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通过过聚乙二醇6000-磷酸钾缓冲液双相分离、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、羟基磷灰石层析及SephadexG-100凝胶过滤等提纯步骤,从海枣曲霉(Aspergillus phoenicis)麦麸培养物抽提液中提纯得到凝胶电泳均一的β-半乳糖苷酶。该酶的最适pH为3.5—4.0,最适温度为60℃(反应15分钟),在pH5.0—8.5之间及60℃以下稳定。在65℃和70℃保温时失活50%的时间分别为27和2分钟。用SDS凝胶电泳法和梯度凝胶电泳法分别测得该酶的分子量为115,000和118,000。薄层凝胶等电聚焦法测得其等电点为pH4.6。 相似文献
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大肠杆菌棉子糖操纵子α—半乳糖苷酶表达的调节控制 总被引:3,自引:0,他引:3
The alpha-galactosidase, coded for by the first structural gene rafA in the plasmid determined raf operon was an inducible enzyme. In contrast to lac or mel operon, raf operon has more strict structural specificity for inducers. The enzyme can be induced by melibiose and raffinose, or weakly by D-galactose, but not by structurally related sugars such as lactose, PNPG etc.. The alpha-galactosidase forming capacity as function of growth curve reached a single peak at the end of the logarithmic phase of the growth. The structure and regulation of raf operon is similar to those of lac operon. The repressormor-mediated negative control plays a major role in the regulation of raf operon, and cAMP-CAP mediated positive control is also involved in the regulation. When 0.4% glucose was added into the medium with other carbon sources, the expression of the enzyme was repressed by 2-3 fold. Transient catabolite repression has been observed neither in inducible nor constitutive alpha-galactosidase expression. Based on alpha-galactosidase assay, in mutant strains CA8306(cya) and CA8445 (cya, crp) the expression level of raf operon was only 9% and 2.5% of that in wild type strain respectively. The glucose effect or the repression in cya mutant can be abolished by 1-5 mmol cAMP. The constitutive alpha-galactosidase expression in cya and cry double mutant (CA8445) remains repressible by glucose, but irreversible by cAMP, suggesting cAMP-CAP complex is not the exclusive mediator of the catablite repression.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS) 相似文献
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介绍一种快速、简便鉴定α-半乳糖苷酶凝胶电泳带的坚固蓝B活性染色方法。采用此方法可直接将粗酶制品上样进行凝胶电泳。电泳完成人需将凝胶放在反应液中浸泡5min,然后再在pH为7.8,温度为4℃的条件下染色1min,即可将凝胶中的酶分子定位带显示出来。这种坚固蓝B的活性染色方法与孝马斯亮蓝染色相比,节省了大量时间。 相似文献
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健康或系统感染TMV的番茄叶片胞外都存在高比活可溶性β-半乳糖苷酶。系统感染TMV的番茄叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩、-20℃丙酮沉淀、CM-SephadexC-25阳离子交换层析、DEAE-SephadexA-25阴离子交换层析和SephadexG-150凝胶层析纯化.获得PAGE和SDS-PAGE均一的β-半乳糖苷酶。该酶的分子量为74kD.酶蛋白带能被过碘酸-Schiff试剂染成桃红色,属糖蛋白。β-半乳精苷酶无论在健康或系统感染TMV的番茄叶中,均为主要的胞外蛋白组分之一。 相似文献
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微生物源a—半乳糖苷酶的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
介绍了微生物源a-半乳糖苷酶的生理生化特性、合成调控机制的研究进展情况及其在食品、饲料、医药工业等领域的一些应用。a-半乳糖苷酶均是糖蛋白,不同来源的a-半乳糖苷酶的作用基质特异性差别较大,作用基质特异性差别是由蛋白质部分N-末端氨基酸序列决定的。不同微生物来源的a-半乳糖苷酶其最佳作用条件、pH稳定性及耐热性差异较大。微生物a-半乳糖苷酶是一种诱导酶,其合成受多个基因的调控,高浓度的葡萄糖能抑制其合成。 相似文献
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一种来源于青霉的新的α-半乳糖苷酶的分离纯化及其酶学性质 总被引:1,自引:0,他引:1
从丝状真菌中筛选到一株产α-半乳糖苷酶的菌株F63,对该菌株进行了形态观察和18SrDNA序列分析,该菌株属于青霉属。采用硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和分子筛层析等方法分离纯化了该菌株的一种α-半乳糖苷酶。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳,此酶蛋白的分子量约为82kDa。该α-半乳糖苷酶反应的最适pH为5.0,最适温度为45℃。此α-半乳糖苷酶的热稳定性在40℃以下,pH稳定性为pH5.0-6.0。与已报道的α-半乳糖苷酶的活性都受到Ag 的强烈抑制不同的是,该α-半乳糖苷酶受Ag 的抑制作用不显著。以pNPG为底物的Km值为1.4mmol/L和Vmax=1.556mmol/L.min-1.mg-1。该酶可以有效降解蜜二糖、棉子糖和水苏糖,但不能降解末端含α-半乳糖苷键的多糖。通过利用质谱技术对纯化的α-半乳糖苷酶进行鉴定以及内肽的N端测序证明该蛋白为一种新的α-半乳糖苷酶。 相似文献