肺孢子菌肺外感染的临床表现和诊治研究进展CSCD

肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia,PCP)是HIV患者最常见的机会性感染,临床上肺外组织肺孢子菌感染少见且容易误诊,多为个案报道。本文通过文献检索和分析,总结宿主肺外感染肺孢子菌的临床表现及诊治结果。结果表明肺外孢子菌感染的临床表现多不典型,但可以累及单个或多个系统,PCR技术及宏基因检测可有助于早期诊断并提高重症患者救治的成功率。治疗上仍以复方磺胺甲噁唑治疗为首选,尽早识别肺孢子菌肺外感染和提高多系统受累患者的救治受到临床关注。     

非HIV人群感染耶氏肺孢子菌肺炎的诊治研究进展CSCD

耶氏肺孢子菌肺炎(Pneumocystis jirovecii pneumonia,PJP)是由耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,PJ)引起的急性或亚急性肺炎,最初可能表现为呼吸困难,发热,干咳,严重时导致死亡[1]。它是一种机会性感染,发生于免疫功能缺陷或低下的宿主,是人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)最常见的并发症之一,也常发生于血液系统恶性肿瘤、实体肿瘤、实体器官或造血干细胞移植、自身免疫性疾病、炎症性疾病及治疗使用免疫抑制剂、化疗药物、生物制剂的非HIV免疫低下人群。     

免疫抑制大鼠肺孢子菌合并呼吸道细菌感染的研究

目的 探讨免疫抑制兼肺孢子菌感染大鼠下呼吸道合并细菌感染的菌群种类及其影响因素.方法 用腹膜内注射地塞米松的方法建立免疫抑制大鼠并诱导肺孢子菌感染模型.免疫抑制的实验组动物再分为经呼吸道吸入乙醚麻醉组和不实施乙醚麻醉组,以了解乙醚对呼吸道感染的影响.此外,设不经任何处理的正常对照组.免疫抑制剂注射8周后处死大鼠,取肺组织制成肺印片,染色后进行肺孢子菌感染的病原学鉴定,同时取气管末端进行细菌培养和鉴定.结果 成功地建立了免疫抑制和肺孢子菌感染大鼠模型.乙醚麻醉组肺孢子菌感染率和菌体负荷均高于非乙醚麻醉组(P＜0.05).感染的菌种主要为双歧杆菌、大肠埃希菌、流感嗜血杆菌、丙酸丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌、纤维单胞菌、放线菌及肺炎克雷伯杆菌.其中,麻醉组和非麻醉组下呼吸道细菌感染率有差异的是大肠埃希菌、流感嗜血杆菌、丙酸丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌(P＜0.05).结论 用乙醚麻醉方法建立大鼠肺孢子菌模型能有效提高大鼠感染肺孢子菌感染率和感染度,下呼吸道感染细菌多为混合感染且受乙醚麻醉影响.     

呼吸道疾病发作期患者肺孢子菌寄植状况与肺疾病相关性研究

目的调查呼吸系统疾病急性发作期患者肺孢子菌定植或感染状况,探讨肺孢子菌寄植与呼吸系统疾病的相关性。方法构建检测肺孢子菌线粒体大亚基核糖体核糖核酸基因的mtLSU巢式PCR反应体系,鉴定其敏感性和特异性。利用新建立的巢式PCR检测呼吸系统疾病急性发作期患者痰液中肺孢子菌基因,分析肺孢子菌在呼吸系统疾病患者中的定植率及其与呼吸系统疾病的相关性。结果新建立的mtLSU巢式PCR扩增的肺孢子菌基因序列与GenBank中人源肺孢子菌基因序列同源性为100%,且与其他8种呼吸道病原体无交叉反应。敏感性检验结果表明,扩增基因的最小量为366 fg。对98例呼吸疾病急性发作期患者的103份标本检测的结果显示,肺孢子菌基因检出率为62.14%（64/103）。结论本研究建立的mtLSU巢式PCR方法具有较高的敏感性和特异性,适用于无创性呼吸道标本肺孢子菌基因检测;肺孢子菌在呼吸系统疾病患者中有较高的定植和感染率。     

免疫抑制沙鼠源肺孢子菌的分类地位

肺孢子菌能够感染多种哺乳动物的肺脏, 并在免疫受抑制的个体引起肺孢子菌肺炎. 研究表明, 肺孢子菌分离株在系统进化树上分为两大枝, 二者所含菌株分别来源于灵长类和啮齿类. 基于宿主特异性以及DNA序列和形态学差异, 每一分枝内的菌株又可分为不同的种. 本研究采用地塞米松免疫抑制法, 导致沙鼠(28/35)肺组织感染. 对18S, 5.8S rRNA和rRNA内转录间隔区基因序列, 以及线粒体核糖体大亚基基因的部分序列分析表明, 本实验沙鼠源肺孢子菌与啮齿类动物来源的同属一枝, 但明显区别于其他啮齿类动物来源的菌株, 应考虑是一个独立的菌种.     

以ITS1-5.8S rDNA-ITS2序列为标记的肺孢子菌分子系统发育研究

为了阐明肺孢子菌的系统发育及种内分类状况, 本实验对源于大鼠、长爪沙鼠和人的肺孢子菌5.8S核糖体RNA(rRNA)基因和rRNA内转录间隔区(the internal transcribed spacer, ITS)序列进行了扩增、克隆和序列测定. 分析了6种肺孢子菌的属内进化距离并与外囊菌属和酵母菌属比较. 研究结果表明, 肺孢子菌属含有包括长爪沙鼠源肺孢子菌在内的多个菌种. 构建的系统发育树也表明, 人和猴来源的肺孢子菌聚成1组, 4种鼠源肺孢子菌聚成另1组, 而4种鼠源肺孢子菌中, 大鼠源肺孢子菌Pneumocystis wakefieldiae与小鼠源肺孢子菌P. murina及另一大鼠源肺孢子菌P. carinii亲缘关系最近, 与长爪沙鼠源肺孢子菌关系最远.     

肺孢子菌肺炎辅助诊断方法研究进展

肺孢子菌肺炎是AIDS、器官移植受者、抗肿瘤放、化疗等各类继发或原发性免疫机能低下人群最常见的机会感染性疾病。通过显微镜检发现肺孢子菌是诊断肺孢子菌肺炎的金标准。但是,由于肺孢子菌主要寄生于肺泡腔内,目前临床采用的病原学检测方法或受到创伤性取材方法的限制或受病原体检出率极低的困惑。而目前盛行的基因检测方法因其操作过程的复杂及昂贵的费用难以适应临床应用。探索和建立敏感、特异的、可以从非创伤性标本中诊断肺孢子菌肺炎的快速诊断方法为临床之急需。学者们对肺孢子菌的主要表面糖蛋白及葡聚糖等菌体组分及其抗体等的检测方法进行了不断的探索,取得了一定进展。我们就该领域的研究进展及其在肺孢子菌肺炎辅助诊断方面的意义进行了综述。     

血液病患者合并阿萨希毛孢子菌菌血症3例并文献回顾

毛孢子菌属是一类有“念珠菌样”特征,在自然界广泛存在的一类条件致病真菌。该类菌可以引起人类皮肤浅部感染、过敏性肺炎,在免疫损伤患者中可引起侵袭性感染,其中阿萨希毛孢子菌在毛孢子菌属中最为常见[1]。恶性血液病患者由于免疫功能受损,长期接受化疗药物并易行静脉置管,是真菌感染的好发人群,有文献报道,毛孢子菌是引起恶性血液病患者播散性感染的除念珠菌属外第二位的酵母菌[2],死亡率可高达75%以上[3]。     

CD40L启动CD4^＋T细胞缺乏小鼠免疫反应的研究

随着HIV感染者及各类医疗措施导致的免疫受损者的增多,探讨一种适合免疫缺陷人群的预防机会感染的策略越来越受到重视。研究表明,CD4^＋T细胞是抵抗肺孢子菌等机会感染的最主要因素,但不是唯一的因素。其中CD40配体（CD40L）被认为是一种可以启动B细胞和CD8^＋T细胞反应的关键因子。为探讨CD4^＋L是否能在缺乏CD4^＋T细胞的小鼠体内启动免疫反应,本文研究了用卵白蛋白（OVA）作为模型抗原,联合应用CD40L引起的免疫反应。结果显示,同时应用OVA和CD40L,可使CD4^＋T细胞耗竭小鼠体内抗OVA IgG抗体和抗原特异性IFN明显增多,提示在CD4^＋T细胞缺乏的宿主体内,CIMOL可以启动B细胞和CD8^＋T细胞类免疫反应。该结果为抗肺孢子菌等机会性感染的免疫预防研究提供可贵的资料。     

巨噬细胞对马尔尼菲篮状菌免疫作用机制研究进展

马尔尼菲篮状菌(Talaromyces marneffei),旧称为马尔尼菲青霉菌(Penicillium marneffei),流行于东南亚和中国南部。法国Capponi等[1]在1956年从竹鼠体内分离的青霉菌属温控双相条件致病菌,室温25℃条件下表现为菌丝相,37℃环境下表现为酵母相,酵母相菌体具有致病性。马尔尼菲篮状菌病主要集中于免疫力低下人群,尤其HIV患者,若得不到有效的治疗,病死率极高[2,3]。近年来,感染T.marneffei发病率上升趋势明显[4],其传播途径最常见是经呼吸道吸入T.marneffei孢子导致感染。     

艾滋病合并卡氏肺孢子菌肺炎的诊断方法研究进展

卡氏肺孢子菌肺炎是由卡氏肺孢子菌引起的一种呼吸系统机会性感染,作为AIDS、器官移植、肿瘤、化疗等免疫功能低下患者的并发症越来越突出,对其做出正确、及时的诊断也越来越重要。该文就卡氏肺孢子菌的病原学及PCP的实验诊断、影像学诊断方法的研究概况和进展作一综述。     

侵袭性毛孢子菌感染的诊断和治疗

侵袭性毛孢子菌感染主要包括真菌血症、单个器官感染和播散性毛孢子菌病,常发生于免疫低下人群,尤其因患有血液病或化疗而出现中性粒细胞减少的患者,诊断需结合临床表现、组织病理活检和血培养等。由于毛孢子菌属种间鉴定的困难和标准化体外药敏试验的缺乏,毛孢子菌病的最佳治疗方案尚未确定,应根据体外药敏试验制定个体化治疗方案。     

实时荧光PCR检测巴西孢子丝菌的实验方法的建立

目的建立一种快速、特异、灵敏的荧光PCR方法检测巴西孢子丝菌。方法比对NCBI数据库中所有巴西孢子丝菌内转录间隔区(internal transcribed spacer, ITS)序列,在保守区域设计并合成特异性引物和探针,建立并优化荧光PCR检测方法。对优化后的方法使用标准浓度核酸进行扩增效率、灵敏度及特异度评价。通过巴西孢子丝菌小鼠感染模型,与组织培养比较,对本研究中的方法进行评价。结果建立的实时荧光PCR方法对巴西孢子丝菌的检测限为100fg。该方法对申克孢子丝菌、球形孢子丝菌、其他常见致病真菌28种、常见细菌3种以及人类基因组和小鼠基因组扩增结果均为阴性,特异度为100%。对巴西孢子丝菌感染小鼠脑、肝、肺、脾、肾及淋巴结检测与培养结果相一致。结论本研究建立的荧光PCR方法可快速、灵敏、特异地鉴定巴西孢子丝菌,并能够有效的对感染小鼠模型标本进行检测,有助于孢子丝菌病的早期特异性病原学诊断。     

肺孢子菌肺炎小鼠模型建立及免疫学评价

目的 构建肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia, PCP)小鼠模型并进行免疫学评价。方法 采用重度联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency, SCID)小鼠气管滴注肺孢子菌构建PCP模型,通过实时荧光定量PCR及肺组织六胺银染色进行病原学鉴定,通过苏木素-伊红染色评估肺组织损伤程度,通过免疫荧光染色和流式细胞术进行免疫学评价。结果 模型组小鼠感染6周后,肺组织肺孢子菌rRNA拷贝数显著高于假手术组,六胺银染色可见肺孢子菌滋养体和包囊,肺组织肺泡壁增厚,肺间质增宽,大量Gr-1⁺中性粒细胞CD68⁺巨噬细胞浸润,中性粒细胞活化标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)和巨噬细胞活化标志物一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)活化水平显著升高,肺内及肺泡灌洗液的中性粒细胞和单核细胞数量及比例显著高于对照组和假手术组。结论 采用SCID小鼠进行气管滴注肺孢子菌能构建稳定的PCP小鼠模型,该模型表现出与临床相似的免疫学特...     

特殊人群甲真菌病的流行病学研究现状

甲真菌病在特殊人群中发病特点各不相同.在年长人群中,发病率随年龄增大而增高.老年人中,指、趾甲同时受累多、TDO型多、混和性真菌感染多;中青年中,常见是DLSO和WSO,WSO随年龄增大而增多,皮肤癣菌感染多见,但年龄越大念珠菌、霉菌感染越多;在穿高跟鞋女性人群中,年穿高跟鞋时间与甲真菌病发病机会、严重程度呈正相关,以DLSO多见,小趾、拇趾多发;在糖尿病人群中,发病率是17%,以Ⅱ型糖尿病为甚,常见类型是DLSO,指甲念珠菌分离率极高,患病时间是严重程度的影响预后因素;在银屑病人群中,甲改变患者培养阳性率是18%,常见类型是TDO,分离真菌最多的是霉菌,以关节病型银屑病真菌感染最多;在肾移植人群中,发病率是12.7%,常见类型是PWSO,分离真菌常见是红色毛癣菌和须癣毛癣菌;HIV人群中,发病率是23.2%,PWSO是HIV感染的早期临床征象,甲真菌病出现概率和CD4细胞计数呈负相关;慢性病毒性肝炎人群的流行特点未有报道.     

HIV感染和非HIV感染人群抗耶氏肺孢子菌主要表面糖蛋白的IgG和IgM抗体水平调查

目的对北京地区HIV和非HIV人群抗耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii,Pj)主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,Msg)IgG、IgM抗体滴度水平进行调查,探索其在流行病学调查中的价值。方法利用重组Msg融合蛋白作为抗原建立酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),用阴性标准血清等比例稀释样本血清建立相对定量抗体检测方法,对176例HIV感染者和226例非HIV人群血清样本进行抗Pj Msg IgG和IgM抗体定量水平调查,所有入选患者临床均不诊断肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia,PCP)。结果抗Pj Msg IgG抗体在非HIV人群中阳性率为42.5%(113/266),113例阳性标本中1∶100、1∶200、1∶400和1∶800滴度分别为77例(68.1%)、15例(13.3%)、6例(5.3%)和15例(13.3%);抗Pj Msg IgG抗体在HIV感染者中阳性率为24.4%(43/176),43例阳性标本中1∶100、1∶200、1∶400和1∶800滴度分别为28例(65.1%)、10例(23.3%)、3例(7.0%)和2例(4.7%),与非HIV组相比差异无统计学意义(χ~2=4.254,P=0.235)。抗Pj Msg IgM抗体在非HIV人群中阳性率为41.7%(111/266),111例阳性标本中1∶100、1∶200、1∶400和1∶800滴度分别为57例(51.4%)、21例(18.9%)、19例(7.1%)和14例(12.6%);抗Pj Msg IgM抗体在HIV感染者中阳性率为12.5%(22/176),22例阳性标本中1∶100、1∶200、1∶400和1∶800滴度分别为10例(45.5%)、2例(9.1%)、4例(18.2%)和6例(27.3%),与非HIV组相比差异无统计学意义(χ~2=3.788,P=0.285)。结论非PCP人群中抗Pj Msg IgG抗体定量水平主要集中在1∶100和1∶200低滴度水平区间,抗Pj Msg抗体水平的定量检测方法及其临床意义值得进一步研究。     

NF-κB启动的炎症反应在小鼠侵袭性肺曲霉病肺损伤中的作用

为了探讨NF-κB启动的炎症反应在小鼠侵袭性肺曲霉病肺损伤中的作用,将小鼠分3组:正常组、正常 烟曲霉菌接种组、IPA模型组,小鼠鼻吸入烟曲霉菌第4天处死,取肺组织,肺组织切片经HE染色观察病理损伤;比色法测定肺组织MPO活性;免疫组化法评价肺组织NF-κBp65蛋白的活化:RT-PCR法检测肺组织TNF-α、IFN-γ和β-tublin mRNA的表达. 结果显示,正常健康组小鼠肺组织结构正常,未见炎症发生;正常 烟曲霉菌接种组小鼠肺组织有炎症细胞浸润,未见孢子萌芽;IPA模型组小鼠的肺组织病理损伤严重,可见炎症细胞浸润,孢子萌芽生成菌丝.正常 烟曲霉菌接种组和IPA模型组小鼠肺组织的TNF-α和IFN-γ mRNA的相对表达水平、NF-κB p65免疫组化评分和MPO活性均高于正常组小鼠(P<0.05):并且IPA模型组小鼠肺组织NF-κB p65免疫组化评分值和MPO活性均高于正常 烟曲霉菌接种组(P<0.05).结果提示,烟曲霉菌感染可激活小鼠肺组织NF-κB介导的炎症信号通路,诱导下游TNF-α和IFN-γ的表达,募集大量的中性粒细胞于感染组织,是导致IPA小鼠肺组织严重病理损伤的因素之一.     

犬小孢子菌引起皮肤感染6例误诊分析

正犬小孢子菌是亲动物性皮肤癣菌,常存在于猫、犬的皮毛上,人接触被感染的动物后可引起自身毛发或皮肤感染。因近年饲养宠物人群日益扩大,感染亦呈逐年上升趋势~[1]。由于犬小孢子菌引起的皮肤真菌感染皮损范围广,单个皮损面积小,炎症反应剧烈,与最常见的亲人性真菌引起的皮损有所不同,所以容易误诊~[2]。我院自2017年1月至2018年6月共收集到6例在院内外误诊的犬小孢子菌引起的皮肤真菌感染,现报告如下。1 临床资料1.1 一般资料共6例     

继发型肺结核患者下呼吸道内赛多孢子菌定植初探

目的初步了解赛多孢子菌(Scedosporium)在继发型肺结核患者下呼吸道内感染或定植状况。方法收集101例继发型肺结核患者的支气管肺泡灌洗液,分别使用真菌镜检、选择培养基培养及扩增部分β-微管蛋白基因的聚合酶链式反应-反转线状点杂交(PCR-RLB)方法,检测常见的5种赛多孢子菌病的致病菌,即S.apiospermum、S.boydii、S.minutispora、S.aurantiacum及S.dehoogii。结果 101份受检标本均未检测到上述5种赛多孢子菌。结论在继发型肺结核患者中未见常见5种赛多孢子菌呼吸道感染或定植,提示继发型肺结核患者并发赛多孢子菌病的可能性不大。     

设计性实验课中卡氏肺孢子菌的动物模型建立与教学改革之探讨

目的探索设计性实验课在病原生物学实验教学改革中的模式。方法通过卡氏肺孢子菌的动物模型建立,设计免疫功能低下的小鼠感染卡氏肺孢子菌及相关免疫低下指标的检测,使学生通过课堂指导,课后自己查找资料设计相关实验。结果拓展学生知识面,提高分析问题、解决问题的能力,激发学生创新意识。结论该设计性实验为病原生物学实验的教学改革做出了初步探索。