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金黄色葡萄球菌是引起食物中毒常见的病原菌之一,其传统检测方法(选择性培养、生化鉴定)步骤多,操作复杂,耗时长、灵敏性不高。近年来以抗原抗体反应为基础的免疫学方法和以DNA为基础的分子生物学技术以其快速性、准确性已经成为微生物检测方法的发展方向。 相似文献
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用改良的MTT法测定rhG-CSF活性 总被引:1,自引:1,他引:1
MTT测定法是根据线粒体脱氢酶催化MTT形成蓝色甲■的多少来检测活细胞数和功能状态的,但原始方法中存在着一些问题,如敏感性偏低、有机溶剂产生蛋白质沉淀以及产物的溶解度偏低等。为了摸索测定 rhG-CSF活性的最适条件,我们以 NFS-60细胞为对象,比较了多种溶解缓冲液,并且对细胞数、MTT浓度及保留时间、溶解液用量等条件进行了选择。结果表明,DMF-20%SDS和 20%SDS的效果最好,测定时细胞数为每孔 1000个细胞,所加 MTT浓度为 1mg/ml,保留时间为 4 h,溶解液的用量为每孔 100μl。 相似文献
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目的探讨鸡葡萄球菌的生物学特性、可能存在的毒力因子及快速检测方法。方法首先观察鸡葡萄球菌的培养特性,镜下观察菌体结构。采用自动微生物分析仪(VITEK60、VITEK-Ⅱ)和分子生物学方法(细菌的通用引物16S rRNA进行PCR扩增)进行鉴定。以金黄色葡萄球菌的5种毒力因子基因序列设计引物,采用PCR方法扩增鸡葡萄球菌相应的毒力因子,同时采用悬浮芯片技术对该菌进行快速检测。结果鸡葡萄球菌的初始菌落形态与金黄色葡萄球菌类似,48h后菌落变粗糙,颜色加深;在VITEK60上细菌不能鉴定,在VITEK—Ⅱ上鉴定为鸡葡萄球菌并且该菌的16S rRNA的PCR产物序列与标准序列同源性达99%;鸡葡萄球菌的毒力因子均为阴性,悬浮芯片技术可以在4—6h内检测出鸡葡萄球菌。结论VITEK-Ⅱ可以鉴定鸡葡萄球菌等罕见细菌,分子生物学方法可以对该菌进行快速准确鉴定;鸡葡萄球菌的致病性和毒力有限;鸡葡萄球菌可能引起新的人畜共患病,应引起足够重视。 相似文献
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免疫捕获PCR法快速检测金黄色葡萄球菌 总被引:1,自引:0,他引:1
旨在建立一种快速检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)免疫捕获PCR技术,并探讨其灵敏度和特异性。SA特异性抗体包被PCR管以富集待测样品中目标菌,之后在同一PCR管里直接进行免疫捕获PCR,并和直接PCR比较。免疫捕获PCR法可特异性检测2株SA菌株,而无法检测到其它8种常见食源性致病菌,说明该方法对SA具有良好的特异性;该方法对纯菌液而言,检测灵敏度可达到2.35×102CFU/mL,是直接PCR的100倍;对5种食品模拟带菌检测发现,无需增菌培养,其灵敏度可达到2.35×103-2.35×104CFU/mL,是直接PCR的10-100倍。免疫捕获PCR法集免疫学与分子生物学检测技术于一体,具有高特异性、高灵敏度、检测快速、易于操作、成本低廉等诸多优点,是一种适合基层实验室使用的检测技术。 相似文献
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1982年制定了一个4小时的细菌快速包埋法,获得一些成效,但实验时使用的温箱、烤箱比较多,还要采用多聚甲醛固定液,因此在一般实验室內应用时就有困难。为此我们作了改良。介绍如下: 1.取材:从平皿上用白金耳刮取菌块。 2.固定:考虑到细菌有细胞壁,固定液 相似文献
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<正> 在制作微小昆虫整体玻片标本时,其失败的原因多数出在整姿这个环节上。为此,笔者摸索出一种较为理想的方法。 标本采集与杀死固定 将蚜虫采回,放入70%的酒精中杀死固定备用。 水浴脱脂 材料装入指形管中,注入适量7%的KOH溶液水浴脱脂,水开后用文火约15分钟。腹部特别膨大者,用软毛笔轻压腹 相似文献
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在生物教学中,对草履虫的观察常因临时采不到标本而影响实验的进行,为此有必要把革履虫制成永久玻片标本。在制作过程中,因虫体对药液反应敏感而变形,失去使用价值,或因培养液中杂质多制成不洁的玻片标本,影响观察效果。如何才能制出虫体形态不变和清洁的标本呢?用麻醉法和电池诱导法,可以得到良好的效果。具体制片方法如下: 相似文献
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