超微铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道微生物及酶活的影响

目的探讨超微铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道微生物及酶活性的影响。方法采用灌胃番泻叶水煎液7 d后控制饮食,饥饱失常8 d,进行小鼠脾虚便秘造模。设模型组、正常组和治疗组,模型组和正常组灌胃无菌水,治疗组分别灌胃给药铁皮石斛传统汤剂、超微全量汤剂、超微50%量汤剂和超微25%量汤剂,共7 d,然后采集肠道内容物分析肠道菌群及酶活。结果模型组五类可培养微生物（细菌总数、大肠埃希菌、乳酸菌、双歧杆菌和真菌）数量与正常组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;铁皮石斛传统汤剂组大肠埃希菌数,铁皮石斛超微50%量汤剂组细菌总数、大肠埃希菌和真菌数,超微25%量汤剂组细菌总数和大肠埃希菌数均达到正常组水平（P〉0.05）;铁皮石斛超微全量汤剂组和超微50%量汤剂组对纤维素酶的影响作用相当,均达到正常组水平（P〉0.05）,铁皮石斛三种不同剂量的超微汤剂对木聚糖酶活性的影响作用相当（P〉0.05）,铁皮石斛超微全量汤剂组淀粉酶活性与正常组相当（P〉0.05）。结论铁皮石斛传统汤剂、超微全量汤剂和超微50%量汤剂对脾虚便秘均有很好的疗效,能够调控肠道微生态平衡及肠道酶活性。     

四磨汤口服液对脾虚便秘小鼠肠道微生物及酶活性的影响

目的探讨四磨汤对脾虚便秘疗效、肠道微生物和酶活性的影响。方法将18只实验小鼠随机分成模型组、正常对照组和治疗组,每组6只。对模型组和治疗组采用灌胃番泻叶水煎液7 d后控制饮食,饥饱失常8 d,进行小鼠脾虚便秘造模。造模结束后,模型组和正常对照组均用无菌水灌胃,治疗组用四磨汤口服液灌胃,共7 d,然后采集肠道内容物,分析肠道菌群及酶活性。结果模型组自然恢复后,肠道微生物(细菌总数、大肠埃希菌、乳酸菌、双歧杆菌和真菌)、纤维素酶活性、木聚糖酶活性、淀粉酶活性和蛋白酶活性与正常对照组比较差异有统计学意义(P0.01或P0.05)。治疗组大肠埃希菌数和真菌数与正常对照组比较差异无统计学意义(P0.05),达到正常对照组水平。细菌总数显著增加(P0.01),乳酸菌显著减少(P0.05),双歧杆菌数目显著增加(P0.01),治疗组纤维素酶和木聚糖酶活性极显著低于正常对照组(P0.01),淀粉酶活性极显著高于正常对照组(P0.01),蛋白酶活性与正常对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论四磨汤通过调控肠道菌群平衡,调整肠道酶活性来治疗脾虚便秘。     

小鼠脾虚便秘造模对肠道微生物及酶活性的影响

目的研究小鼠脾虚便秘造模对肠道微生物及酶活性的影响,为脾虚便秘的治疗提供基础。方法采用灌胃番泻叶水煎液7 d,然后控制饮食,饥饱失常;正常组灌胃等量的无菌水7 d后正常喂养,共15 d,制备小鼠脾虚便秘模型。分析小鼠体重、肠道菌群和酶活性的变化情况。结果模型组小鼠体重、体重变化率均显著小于正常组(P<0.05或P<0.01);肠道细菌总数显著小于正常组(P<0.01),大肠埃希菌、乳酸菌、双歧杆菌数和真菌均显著大于正常组(P<0.05或P<0.01);肠道淀粉酶和蛋白酶活性显著低于正常组(P<0.05或P<0.01),木聚糖酶和纤维素酶则显著高于正常组(P<0.01)。结论小鼠脾虚便秘造模影响小鼠的体重,破坏了肠道微生物的平衡,并影响肠道酶活性。     

番泻叶造模对小鼠肠道微生物及酶活性的影响

目的 探讨灌胃番泻叶脾虚腹泻造模方法对小鼠肠道微生物及酶活性的影响。方法 采用灌胃番泻叶水煎液进行小鼠脾虚造模。12只小鼠随机分为模型组和正常组,模型组灌胃番泻叶水煎液,正常组灌胃等量无菌水,期间观察小鼠的一般情况变化。灌胃7 d后称重、无菌采集肠道内容物,分析肠道菌群及酶活性。结果 与正常组相比,模型组小鼠肠道内容物的淀粉酶活性升高极显著（t=-53.0671,P=0.0000）,纤维素酶活性和木聚糖酶活性下降显著（t=23.1230,P=0.0000;t=12.3900,P=0.0410）,而蛋白酶活性变化不明显（t=1.3120,P=0.0521）;模型组小鼠细菌总数显著减少（t=73.1601,P=0.0000）,而大肠埃希菌、乳杆菌、双歧杆菌和真菌总数变化均不明显（t=2.3580,P=0.1432;t=2.2089,P=0.1127;t=2.2813,P=0.1037;t=9.3210,P=0.0510）。结论 脾虚造模会使细菌总数减少,纤维素酶和木聚糖酶活性下降,淀粉酶活性升高。     

针刺应激对小鼠肠道微生物、酶活性及血常规的影响

目的探究针刺应激对小鼠肠道微生物、酶活性及血常规的影响。方法设正常组和针刺组,针刺组用银针扎小鼠尾部,使其疼痛、紧张,共21d;所有小鼠均自由采食饮水。分析小鼠肠道菌群、酶活性及血常规的变化情况。结果针刺组小鼠肠道木聚糖酶和纤维素酶活性显著低于正常组(t=17.8470,P=0.0000;t=67.3900,P=0.0000),淀粉酶和蛋白酶则显著高于正常组(t=-33.4280,P=0.0000;t=-6.9810,P=0.0020)。针刺组四类可培养微生物(细菌总数、乳酸菌、大肠埃希菌和双歧杆菌)(t=2.3580,P=0.1420;t=-0.4350,P=0.6860;t=-0.5300,P=0.6470;t=-1.3640,P=0.3040)以及血常规各项指标与正常组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 21d的针刺应激能显著提高肠道淀粉酶和蛋白酶的活性,降低木聚糖酶和纤维素酶的活性,而对小鼠肠道微生物和血常规无明显影响。     

铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道菌群多样性的影响

探讨铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道菌群的影响,为铁皮石斛对脾虚便秘的疗效机制及临床组方提供依据。

选取12只SPF级昆明小鼠随机分为正常组、模型组、铁皮石斛组和枳术汤组,每组3只。造模阶段正常组灌胃无菌水,模型组和治疗组采用番泻叶水煎液灌胃7 d后,限制饮食饮水8 d,建立脾虚便秘模型。造模成功后,正常组和模型组灌胃无菌水,治疗组分别以铁皮石斛和枳术汤水煎液干预5 d。治疗结束后,收集各组小鼠盲肠内容物样本进行16S rDNA高通量测序。

脾虚便秘小鼠排便量减少,粪便细小,干燥,质硬,呈黄色。铁皮石斛和枳术汤分别治疗后,小鼠排便量增加,粪便软硬适中,呈黑褐色。测序分析发现,正常组与铁皮石斛组的共有OTU数最多,与枳术汤组的共有OTU数最少。α−多样性指数与PCA结果表明,铁皮石斛组菌属结构较其余两组更接近正常组小鼠。物种相对丰度及组成结果表明,铁皮石斛增加了脾虚便秘小鼠双歧杆菌属相对丰度,抑制了乳杆菌属、拟杆菌属相对丰度,但对菌群丰度的调节作用不及枳术汤;LEfSe分析与随机森林分析鉴定出布劳特菌属和活泼瘤胃球菌是铁皮石斛组与其他组别的差异菌群。

铁皮石斛能恢复脾虚便秘小鼠肠道菌群的多样性,可调节肠道菌群相对丰度,布劳特菌属和活泼瘤胃球菌可能是铁皮石斛干预脾虚便秘小鼠的肠道关键指示菌。

     

超微铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道乳酸杆菌多样性的影响

【目的】探讨超微铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道乳酸杆菌多样性的影响,为疗效提供依据。【方法】制备小鼠脾虚便秘模型,灌胃铁皮石斛传统汤剂、超微50%量汤剂治疗,采集肠道内容物提取肠道微生物宏基因组DNA,用乳酸杆菌特异引物PCR后进行ARDRA分析。【结果】结果显示,正常组、铁皮石斛传统汤剂组和超微50%量汤剂组的OTUs、Shannon指数和Brillouin指数相同,且均大于模型组;铁皮石斛超微50%量汤剂组与正常组乳酸杆菌群落结构的相似性系数最大,为0.333 3,其次是模型组为0.181 8,传统汤剂组最小,为0.166 7;聚类分析和主成分分析结果显示,小鼠肠道乳酸杆菌多样性受脾虚便秘造模影响,发生改变,铁皮石斛两种汤剂通过不同的途径对其进行调控作用。【结论】铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道乳酸杆菌多样性的调整作用明显,且超微50%量汤剂组小鼠肠道乳酸杆菌多样性更接近正常组,疗效更优。     

保和丸对食积小鼠的肠道微生物及酶活性的影响

目的 探究保和丸对食积小鼠肠道微生物及酶活性的影响。方法 将32只实验小鼠（雌雄各半）随机分为正常组（n=12）、食积组（n=10）和治疗组（n=10）。其中正常组喂食正常饲料,其余组喂食特制饲料。待食积组和治疗组中小鼠出现粪便干结,腹部膨隆胀满后,立即对治疗组按6.67 g/(kg·d)剂量灌胃0.28 g/mL的保和丸汤剂,正常组与食积组灌胃等量的蒸馏水。每天2次,每次0.35 mL,持续4 d。比较分析小鼠肠道微生物及肠道酶活性。结果 肠道微生物方面,食积组能显著增加细菌、乳酸菌、双歧杆菌和大肠埃希菌的数目,与正常组相比差异有统计学意义（均P0.05）。结论 保和丸能降低食积小鼠的细菌、乳酸菌以及大肠埃希菌的数目,同时能降低木聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶和蔗糖酶等的活性。     

芦笋对高脂饮食小鼠肠道微生物及酶活性的影响

目的 探明芦笋对高脂饮食小鼠肠道微生物及酶活性的影响情况,为芦笋的应用提供依据。方法 将实验动物随机分为正常组、高脂饮食组、高脂饮食低剂量芦笋组、高脂饮食中剂量芦笋组、高脂饮食高剂量芦笋组和高脂饮食阳性对照组。其中正常组喂食正常饲料,其余组喂食高脂饲料。分别灌胃蒸馏水（正常组、高脂饮食组）、芦笋1.05 g/（kg•d）（高脂饮食低剂量芦笋组）、芦笋2.10 g/（kg•d）（高脂饮食中剂量芦笋组）、芦笋4.20 g/（kg•d）（高脂饮食高剂量芦笋组）和降脂理肝汤1.19 g/（kg•d）（高脂饮食阳性对照组）,每天2次,每次0.35 mL。比较分析小鼠肠道微生物及肠道酶活性。结果 酶活方面,高脂饮食低剂量芦笋组、高脂饮食中剂量芦笋组、高脂饮食高剂量芦笋组能明显降低淀粉酶、木聚糖酶以及蛋白酶的活性,与高脂饮食组相比差异具有统计学意义（Ps<0.01）。肠道微生物方面,高脂饮食低剂量芦笋组、高脂饮食中剂量芦笋组、高脂饮食高剂量芦笋组能显著降低细菌、乳杆菌和双歧杆菌的数量。与高脂饮食组相比差异具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论 芦笋能降低高脂饮食小鼠的肠道内细菌、乳杆菌和双歧杆菌的数量,并且可以显著降低高脂饮食小鼠淀粉酶、木聚糖酶和蛋白酶等肠道酶的活性。     

绿茶摄入量对小鼠肠道微生物及酶活性的影响

目的从肠道微生态角度研究绿茶摄入量对小鼠肠道微生物和酶活性的影响,探析饮茶(绿茶)有益健康的机制,为饮茶做出科学指导。方法将SPF级实验小鼠随机分为正常对照组、低浓度绿茶摄入组、中浓度绿茶摄入组和高浓度绿茶摄入组。低、中、高浓度绿茶摄入组分别给予10%、20%和30%(g/g)的茶水溶液,连续灌胃1个月后采集空肠至回肠段内容物进行微生物和酶活性分析,同时观察实验动物体质量变化情况。结果各实验组小鼠体质量增长与对照组相比无明显差异;与对照组相比,低浓度绿茶摄入组小鼠肠道乳酸菌数降低而细菌数升高,中浓度摄入组乳酸菌数、细菌以及双歧杆菌数显著降低,高浓度摄入组细菌数、双歧杆菌数升高而乳酸菌数显降低著,且中浓度摄入组乳酸菌数和细菌数均极显著地低于低浓度摄入组;由酶活性分析可看出,与对照组小鼠相比,各实验组小鼠肠道淀粉酶和蛋白酶活性均升高而木聚糖酶活性显著降低。结论摄入一定量的绿茶对肠道微生物有一定的调节作用,可提高淀粉酶和蛋白酶活性而益于机体健康。     

铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道黏膜结构的影响

目的 研究铁皮石斛对脾虚便秘小鼠肠道黏膜的保护作用。 方法 将18只SPF级KM小鼠随机分为正常组和脾虚便秘组,其中正常组6只,脾虚便秘组12只。脾虚便秘组小鼠灌胃1 g/mL番泻叶水煎液(0.8 mL/d,分2次灌胃),持续7 d;从第8天开始,脾虚便秘组小鼠停止使用番泻叶,改为隔天喂低纤维饲料生大米4～8 g,每天自由饮水1次,每次0.5 h,控制饮食持续8 d,致小鼠脾虚便秘。当造模成功之后,将脾虚便秘小鼠随机分为自然恢复组和铁皮石斛治疗组(每组6只)。铁皮石斛治疗组按3.5 g/(kg·d)灌胃0.1 g/mL铁皮石斛汤剂,每天2次,每次0.35 mL,共5 d。正常组和脾虚便秘自然恢复组灌胃等量的无菌水。 结果 铁皮石斛能改善因造模造成的小肠黏膜炎症细胞浸润,增加回肠、盲肠的杯状细胞数目。 结论 铁皮石斛能有效改善脾虚便秘小鼠肠道的黏膜结构。     

四君子汤对实验性脾虚小鼠肠道菌群的影响

本文报道了四君子汤对脾虚小鼠肠道内与人类关系密切的主要菌群的影响。用大量大黄水煎液灌胃给予小鼠,造成实验性脾虚模型,引起小鼠肠道内菌群紊乱,其中双歧杆菌、乳杆菌菌量均下降,与对照组小鼠相比具有显著性差异。当小鼠服用四君子汤后,双歧杆菌,乳杆菌均上升至正常值水平。四君子汤对拟杆菌数量也有一定的影响。本研究表明,四君子汤对小鼠肠道菌群的失调具有调节功能,对脾虚小鼠的康复具有一定的促进作用。     

咖啡摄入量对小鼠肠道微生物及酶活性的影响

目的 研究摄入不同咖啡浓度对小鼠酶活性、肠道微生物、体重的影响,从分析肠道四种微生物变化和四种酶的活性变化来讨论摄入咖啡对健康的影响。方法 SPF级昆明小鼠随机分为4组,即低、中、高咖啡浓度组和正常对照组,所有实验组小鼠日常给予蒸馏水饮用,实验低、中、高浓度组每天2次分别灌胃给予0.0045 g/mL、0.0090 g/mL、0.0180 g/mL的咖啡溶液0.4 mL/（只•次）,对照组给予蒸馏水灌胃,实验时间为1个月,测小鼠体重、肠道微生物和酶活性等指标并进行分析。结果 与对照组相比,低浓度咖啡摄入组乳杆菌、双歧杆菌、大肠埃希菌数显著增加（P＜0.01或P＜0.05）,需氧和厌氧细菌数显著降低（P＜0.01）;中浓度咖啡摄入组乳杆菌、双歧杆菌数显著低于对照组和低浓度组（P＜0.01）,大肠埃希菌显著高于对照组（P＜0.05）;高浓度咖啡摄入组乳杆菌和大肠埃希菌总数显著低于对照组（P＜0.01或P＜0.05）;低浓度摄入组的木聚糖酶、纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶的活性均显著高于（Ps＜0.01）对照组和中浓度咖啡摄入组;各组小鼠体重差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 适当摄入咖啡小鼠肠道双歧杆菌和乳杆菌等益生菌数量增加显著,小鼠肠道中具有代表性的淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶、木聚糖酶的活性均显著增加,但咖啡摄入对小鼠体重影响不显著。     

基于肠道菌群研究枳术丸治疗脾虚证慢传输型便秘的作用机制

观察枳术丸对脾虚证慢传输型便秘（slow transit constipation,STC）小鼠肠道菌群、短链脂肪酸（SCFAs）、5-羟色胺（5-HT）和肠道传输功能的影响,探讨枳术丸治疗STC的机制。

将50只健康的KM小鼠按随机数字表法分为正常组（15只）和造模组（35只）,正常组小鼠基础饲料喂养,造模组小鼠以番泻叶灌胃和限制饮食饮水方法制作脾虚证STC小鼠模型。造模成功后,将造模组小鼠分为模型组、莫沙必利组和枳术丸组,每组10只,对应给药治疗7 d。治疗结束后分别采用16S rRNA基因测序技术分析小鼠粪便菌群多样性和菌群结构,气相色谱/质谱法检测粪便中SCFAs水平,HE染色观察各组小鼠结肠组织病理形态改变,使用ELISA法检测小鼠脑组织、结肠组织中5-HT水平。

造模后,各造模组小鼠体质量显著低于正常组（均P＜0.01）;治疗结束后,模型组小鼠体质量和肠道推进率显著低于正常组（均P＜0.01）;与模型组比较,莫沙必利组和枳术丸组小鼠体质量和肠道推进率升高（均P＜0.05）。小鼠结肠组织HE病理显示模型组腺体排列不齐,结肠黏膜轻微水肿、充血,轻度炎症浸润。与正常组比较,模型组小鼠肠道菌群丰富度和多样性皆降低,枳术丸组和莫沙必利组小鼠肠道菌群多样性和丰富度更趋近于正常组。在门分类水平上,与正常组比较,模型组小鼠厚壁菌门、疣微菌门相对丰度降低,拟杆菌门、变形菌门相对丰度增加;与模型组比较,枳术丸组小鼠疣微菌门相对丰度增加,拟杆菌门相对丰度降低。在属分类水平上,与正常组比较,模型组小鼠拟杆菌属、乳杆菌属相对丰度增加,异形藻属、梭菌属、另枝菌属相对丰度降低;与模型组比较,枳术丸组小鼠拟杆菌属相对丰度降低,异形藻属、梭菌属相对丰度增加。与正常组比较,模型组小鼠粪便乙酸、丙酸水平降低（均P＜0.05）,结肠组织、脑组织5-HT水平降低（均P＜0.05）;与模型组小鼠比较,枳术丸组小鼠粪便乙酸、丙酸水平显著升高（均P＜0.01）,结肠组织、脑组织5-HT水平升高（均P＜0.05）。

枳术丸可通过调节肠道菌群的平衡,促进SCFAs的分泌和5-HT的分泌释放,提高推进率,促进肠道蠕动治疗脾虚证STC。