BRCA1在人类肿瘤细胞中的表达

人类乳癌易感基因1（BRCA1）是乳癌,卵巢癌和前列腺癌的危险因素之一,而且表现出许多的生物功能,采用Western Blotting和半定量RT－PCR的方法,我们检测了内源性BRCA1蛋白质和mRNA在从十一种人类肿瘤组织中建立的四十三种肿瘤细胞系的表达水平。在不同的肿瘤细胞中BRCA1的表达水平是各不一样的。而且并没有发现BRCA1的表达和细胞的内源性p53基因状况有明显的相关性。通过采用细胞转染乳头状瘤病毒－E6致癌基因或采用畸变的p53基因（143Ala→Val)而导致的p53基因功能失活并不对内源性BRCA1本底表达水平产生任何的影响,胆两种与p53功能有关p21(-/-)和Gadd45基因剔除则轻微地增加BRCA1蛋白质的表达。因此,虽然我们目前还不清楚BRCA1在人类肿瘤细胞中不同表达的功能意义,但本文的结果为进一步研究BRCA1在不同种瘤细胞系的生物功能提供了有价值的背景资料。     

乳腺癌与卵巢癌易感基因BRCA1和BRCA2

BRCA1和BRCA2是近年来发现的遗传性乳腺癌和卵巢癌易感基因,分别位于第17号和第13号染色体上。目前所知,两者与细胞周期调控、胚胎生 长发育、DNA损伤修复和转录调控等生命活动有关。随着BRCA1和BRCA2研究的不断深入和其确切生物学功能的阐明,将在临床上帮助早期诊断和有效治疗乳腺癌和卵巢癌患者。     

BRCA1基因在人食管癌中的表达

目的本研究利用组织芯片检测BRCA1基因在人食管癌中的表达与食管癌的生长、分化和转移等临床特征的关系,期望找到BRCA1与食管癌发生、发展的关系。方法收集48例食管癌患者标本,分别取其肿瘤组织、癌前病变组织及正常组织制成组织微阵列,免疫组织化学SP法检测BRCA1蛋白的表达,分析BRCA1在各种组织的表达特点及其与肿瘤的关系。选择其中10例患者的上述组织的新鲜标本,采用Western blot检测BRCA1蛋白的表达。结果免疫组织化学结果显示,BRCA1在肿瘤组织阳性占70.50%,癌前组织阳性占43.10%,正常组织阳性占39.00%,食管癌组织与癌前病变组织、食管癌组织与正常组织相比BRCA1的表达均存在显著差异（P〈0.01）。BRCA1的表达与食管癌的病理分化有统计学上的差异（P〈0.05）。Western blot显示,BRCA1在食管癌肿瘤组织、癌前病变组织及正常组织中表达量依次降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）;BRCA1在高、中、低分化程度的食管癌组织中表达量依次降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论BRCA1与食管癌发生发展有关,BRCA1的表达与食管癌的分化呈正相关。     

肿瘤易感基因BRCA1

ＢＲＣＡ１为一新的肿瘤易感基因，定位在１７ｑ２１，其ｃＤＮＡ可转录７．８ｋｂｍＲＮＡ，编码含１８６３个氨基酸残基的长多态，在遣传性乳腺卵巢癌中有高频率的ＢＲＣＡ１基因杂合性丢失，同时有多形式多位点的基因突变，符合肿瘤抑制基因特点。     

RADS1和BRCA1在结直肠癌中的表达及临床意义

目的观察结直肠癌中RAD51和BRCA1基因的表达,探讨二者与结直肠癌发生发展及治疗的关系。方法收集结直肠癌癌灶及癌旁正常组织各42例,采用免疫组织化学法及逆转录一聚合酶链反应（reverse transeription-PCR,RTPCR）检测标本组织中RAD51、BRCA1蛋白和mRNA的表达水平。分析RAD51、BRCA1在结直肠癌中的表达水平与临床病理特征的关系以及二者之间的相互关系。结果在结直肠癌组织中RAD51（33例,78．6％）、BRCA1（30例,71．4％）的表达较癌旁正常组织RAD51（7例,16．7％）、BRCA1（18例,42．9％）高（P〈0．05）;结直肠癌中RAD51mRNA（0．51±0．26）和BRCA1 mRNA（O．70±0．96）的值较两者在正常组织中mRNA（0．10±0．22）高（P〈0．01）;两者蛋白及mRNA的表达水平与性别、年龄、分化程度、TNM分期等均无统计学差异（P〉0．05）;BRCA1与RAD51在结直肠癌中的表达水平成明显正相关（蛋白：r=0．731,P〈0．01mRNA：r=0．572,P〈0．01）。结论BRCA1与RAD51在结直肠癌组织中高表达,且二者的表达水平呈明显正相关;BRCAl与RAD51的表达异常可能与结直肠癌的发生发展有关。     

BRCA1基因结构及其在乳腺癌中的表达

利用ＭＰＣＲ技术从乳腺组织分离到抑癌基因ＢＲＣＡ１的ｃＤＮＡ片段,将此９１４ｂｐ的片段克隆进质粒ｐＵＣ１１８,并经全序列测定证实。序列分析表明,ＢＲＣＡＩｃＤＮＡ编码的肽链ＮＮ２－末端有一锌指结构,抑癌基因ＢＲＣＡＩ的产物可能是ＤＮＡ结合蛋白,ｃＤＮＡ序列存在两个变异位点：一个是第４０９位的Ｃ→Ａ（Ａｓｐ→Ｇｌｕ）：另一个是第８７９位的Ａ→Ｔ（ＭＩａ同义突变）。以该片段为探针,检测６例乳腺癌组织中ＢＲＣＡＩｍＩＭＡ表达,一例表达明显下降,一例没检测到表达的ｍＩＭＡ产物,说明一些乳腺癌组织的ＢＲＣＡ１基因转录水平降低     

p53基因mdm2基因在肿瘤细胞中的相互调控作用

ｍｄｍ２（ｍｕｒｉｎｅ－ｄｏｕｂｌｅ ｍｉｎｕｔｅ２）最初是在一种可致瘤的小鼠在纤维细胞中发现的。该基因编码一种锌指蛋白,可与Ｐ５３蛋白酸性活化区结合,抑制Ｐ５３介导的转录活性阻止Ｐ５３诱导凋亡的作用。Ｐ５３基因是一种重要的抑癌基因,该基因编码一种ＤＮＡ结合磷蛋白,在调节细胞增殖和促进细胞凋亡过程中起着重要的作用。Ｐ５３也可调节ｍｄｍ２基因的表达。ｐ５３蛋白水平的升高级相应剌激ＭＤＭ２蛋白水平的升     

卵巢癌中HMGB1、BRCA1和p62蛋白的表达与其化疗敏感性的相关性

为了探讨卵巢癌中HMGB1、BRCA1和p62蛋白的表达与化疗敏感性的相关性,培养卵巢癌顺铂化疗耐药细胞ES-2和敏感细胞SKVO3,顺铂100 mg/m2环境培养5 d,分别采用Western blotting法和RT-PCR方法检测两种细胞中的HMGB1、BRCA1和p62蛋白表达情况,采用流式细胞术测算细胞凋亡率。敏感组细胞SKOV3和耐药组细胞ES-2中,BRCA1蛋白表达率分别为(38.08±22.56)%和(45.65±22.42)%,HMGB1蛋白表达率分别为(75.13±16.45)%和(83.08±24.22)%,p62蛋白表达率分别为(52.31±25.13)%和(37.26±21.09)%;顺铂处理后,敏感组SKOV3细胞中BRCA1蛋白表达量显著提高(p0.05),耐药组ES-2细胞中p62蛋白相对表达量高于敏感组SKOV3细胞(p0.01)。卵巢癌化疗后HMGB1下调与BRCA1、p62上调共存;卵巢癌中BRCA1蛋白的不同表达与化疗敏感性相关,其水平变化有可能作为一种新的肿瘤标志物,动态观察卵巢癌病情进展,为临床治疗提供客观指标。     

p53蛋白多肽片段在大肠杆菌中的表达

在所有研究过的人体肿瘤组织或细胞中,ｐ５３似乎是突变频率最高的一个基因,研究和检测ｐ５３基因及其编码产物的变化将具有重要的意义。我们将野生型ｐ５３基因编码区３’端７０３ｂｐ的ｃＤ－ＮＡ片段插入到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０中,得到了一个重组体表达质粒ｐＲＲ３３,经热诱导表达,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实ｐ５３蛋白多肽在大肠杆菌中得到了表达,它不仅可用于抗ｐ５３蛋白抗体的制备,而且也可用于对ｐ５３蛋白羧基端多肽功能的研究。     

BRCA1和BRCA2与DNA损伤修复及转录调控

乳腺癌和卵巢癌敏感基因BRCA1和BRCA2与同源重组,DNA损伤修复,胚胎生长,转录调控及遍在蛋白化有关,其中,BRCA1和BRCA2在DNA损伤修复和转录调控中功能的确定,将有助于探讨和阐明两者的肿瘤抑制功能及其机理,作者将综述近年来有关BRCA1和BRCA2在DNA损伤修复和转录调控中功能研究的最新进展。     

二甲基苯并蒽对肺肿瘤细胞P1-450基因表达的调节

人肺肿瘤细胞(ChaGo)经二甲基苯并蒽(DMBA)处理,刺激了p 1-450基因的高水平表达,用亚致死剂量内的DMBA 处理细胞,检出了p 1-450基因的mRNA 水平随DMBA浓度和处理时间而增加;p 1-450基因的主要编码区和3’末端区“—CCGG—”序列的甲基化型式不受DMBA 处理的影响,但DMBA 处理细胞影响到基因5’末端和侧翼区的“—CC-GG—”中“—C—”残基的位点特异的低甲基化效应,这种低甲基化效应,可能关系到p 1-450基因的异常高水平表达,也可能同时存在着别的分子调节机制。     

A BRCA1-interacting lncRNA regulates homologous recombination

Long non-coding RNAs (lncRNAs) are important players in diverse biological processes. Upon DNA damage, cells activate a complex signaling cascade referred to as the DNA damage response (DDR). Using a microarray screen, we identify here a novel lncRNA, DDSR1 (DNA damage-sensitive RNA1), which is induced upon DNA damage. DDSR1 induction is triggered in an ATM-NF-κB pathway-dependent manner by several DNA double-strand break (DSB) agents. Loss of DDSR1 impairs cell proliferation and DDR signaling and reduces DNA repair capacity by homologous recombination (HR). The HR defect in the absence of DDSR1 is marked by aberrant accumulation of BRCA1 and RAP80 at DSB sites. In line with a role in regulating HR, DDSR1 interacts with BRCA1 and hnRNPUL1, an RNA-binding protein involved in DNA end resection. Our results suggest a role for the lncRNA DDSR1 in modulating DNA repair by HR.     

人肝细胞癌中抑癌基因PTEN/MMAC1/TEP1的突变分析

PTEN／MMAC1／TEP1(PTEN)是新近分离到的抑癌基因,在多种肿瘤中存在突变。我们检测了34例人肝细胞癌中PTEN基因第5外显子和第8外显子的突变。采用聚合酶链方法以内含子引物扩增第5和第8外显子,继之以单链构象多态性和测序技术分析PTEN基因突变。有4例肝细胞癌SSCP显示异常条带并经测序证实存在突变。2例发生于第4内含子,突变位点相同;另两例发生于第8外显子,其中1例碱基颠换导致PTEN蛋白产物304位半胱氨酸突变为甘氨酸。     

人肝癌细胞p53基因的表达及其对细小病毒H-1的敏感性

本文利用单链构象多态性分析,17号染色体短臂等位基因杂合性分析,Northern印迹,免疫沉淀,p53基因第7外显子酶切等技术检测了两个中国人肝癌细胞系SMMC-7721,YY-8103和一个自发转化的人肝细胞系L-02的p53基因结构与表达。实验表明,这三个细胞系中没有出现17号染色体短臂等位基因杂合性缺失,第4—9外显子也没发生突变,但其mRNA和蛋白表达水平很低。利用MTT比色分析法研究了这三个细胞系和其他已知p53基因背景的八个人肝癌细胞系(QGY-7703、PLC/PRF/5、Huh-7、Hep3B、FOCUS、Tong/ HCC、SK-Hep-1、HepG2)对自主性细小病毒H-1的敏感性。除HepG2细胞外,其他十个细胞系p53基因的结构和/或表达都不正常。经H-1感染(moi=20)后,其敏感性均高于HepG2细胞。本研究初步表明了p53基因结构或表达的不正常可能导致人肝癌或转化细胞对H-1的敏感性的提高。     

Primary structure-based function characterization of BRCT domain replicates in BRCA1

BRCA1 is a large protein that exhibits a multiplicity of functions in its apparent role in DNA repair. Certain mutations of BRCA1 are known to have exceptionally high penetrance with respect to familial breast and ovarian cancers. The structures of the N-terminus and C-terminus of the protein have been determined. The C-terminus unit consists of two alpha-beta-alpha domains designated BRCT. We predicated two homologous BRCT regions in the BRCA1 internal region, and subsequently produced and purified these protein domains. Both recombinant domains show significant self-association capabilities as well as a preferential tendency to interact with each other. These results suggest a possible regulatory mechanism for BRCA1 function. We have demonstrated p53-binding activity by an additional region, and confirmed previous results showing that two regions of BRCA1 protein bind p53 in vitro. Based on sequence analysis, we predict five p53-binding sites. Our comparison of binding by wild-type and mutant domains indicates the sequence specificity of BRCA1-p53 interaction.     

重组人pLXSN-CD80逆转录病毒载体的构建及在CHO和PA317细胞中的表达

CD80是表达于抗原提呈细胞表面的分化抗原,它提供T细胞活化的协同刺激信号,并在抗肿瘤免疫应答中起着重要作用。我们在克隆了CD80全长。cDNA的基础上,将其与逆转录病毒pLXSN表达载体连接,构建成表达质粒,并用磷酸钙沉淀法将其转染PA317和CHO细胞,经G_(418)筛选获得抗G_(418)的PA317和CHO细胞克隆。以RIA,FACs和Westernblot检测CD80分子在PA317和CHO细胞上的表达、分布和分子量,结果显示,pLXSN-CD80转染的CHO细胞可表达较高丰度的CD80分子,其表观分子量为40kD。pLXSN-CD80转染的PA317和CHO细胞经5个月连续传代培养,无论存在G_(418)的选择压力与否,仍然持续表达CD80分子,表明我们构建的pLXSN-CD80表达载体具有应用于试验性治疗的潜能。