HGV RNA基因组感染HepG2细胞的研究

为了观察HGV RNA基因组在HepG2细胞中的复制和表达并建立HGV感染的细胞模型,体外转录制备HGV RNA基因组,Lipfectamin介导转染HepG2细胞。取HGV RNA阳性培养上清液传代感染HepG2细胞,采用RT-PCR、免疫组化和Western blot等技术检测HGV在HepG2细胞中的复制和表达。HepG2细胞地转染后24h便可在培养上清液中检测到HGV负链RNA,传代感染的细胞及培养上清液中可检测到HGV正、负链RNA。在90d内传代20余次,均能检测到HGV的复制。免疫组化和Western blot可检测到 HGV E2蛋白在感染细胞中的表达。HGV感染细胞经冻存后复苏,仍能检测到HGV RNA。故HGV RNA基因组能够在HepG2细胞中复制和表达,此细胞模型有可能用于HGV的复制与感染防治的研究。     

蚕豆萎焉病毒2感染豌豆叶细胞后引起的线粒体增生和聚集

应用超薄切片和免疫金标记电镜技术,结合体视学分析研究了受蚕豆萎焉病毒2(BBWV 2) 中国分离物B935侵染的豌豆(Pisum sativum)叶细胞中线粒体的异常变化。结果表明,感病细胞线粒体增生并聚集于细胞质的膜增生区周围,体积增大,形状畸变,一些线粒体内含有类结晶包涵体。病叶细胞与健康对照之间线粒体的体积密度(VV)、表面积密度(SV)、数密度(NV)等参数存在显著差异(P<0.01),而形状因子(PE)、周长指数(CI)、比表面积(RSV)等参数随不同病变阶段而有变化。在线粒体周围及线粒体之间的网格结构可被BBWV 2金标记抗体特异性标记．推断为正在组装的病毒粒子。子代病毒形成结晶体和管状体,有高密度的免疫金颗粒标记。上述研究结果提示BBWV 2 引起的细胞线粒体异常变化与病毒复制组装有关,聚集线粒体的外膜粘连面可能是病毒粒子组装部位,一些线粒体内的类结晶包涵体可能代表了某种蛋白质异常积累。     

蚕豆萎焉病毒2感染豌豆叶细胞后引起的线粒体增生和聚集

应用超薄切片和免疫金标记电镜技术,结合体视学分析研究了受蚕豆萎焉病毒2（BBWV2）中国分离物B935侵染的豌豆（Pisumsativum）叶细胞中线粒体的异常变化。结果表明,感病细胞线粒体增生并聚集于细胞质的膜增生区周围。体积增大,形状畸变,一些线粒体内含有类结晶包涵体。病叶细胞与健康对照之间线粒体的体积密度（Vv）、表面积密度（Sv）、数密度（Nv）等参数存在显著差异（P〈0．01）,而形状因子（PE）、周长指数（CI）、比表面积（Rsv）等参数随不同病变阶段而有变化。在线粒体周围及线粒体之间的网格结构可被BBWV2金标记抗体特异性标记。推断为正在组装的病毒粒子。子代病毒形成结晶体和管状体,有高密度的免疫金颗粒标记。上述研究结果提示BBWV2引起的细胞线粒体异常变化与病毒复制组装有关。聚集线粒体的外膜粘连面可能是病毒粒子组装部位。一些线粒体内的类结晶包涵体可能代表了某种蛋白质异常积累。     

ELECTRON MICROSCOPY OF CYTOPLASMIC INCLUSIONS IN CELLS INFECTED WITH ROD-SHAPED VIRUSES

Thin sections of leaf tissue infected with 12 rod-shaped viruses varying from 180 mμ to 750 mμ in length were examined in the electron microscope. Neither intranuclear nor cytoplasmic inclusions occurred in healthy tissue. Intranuclear inclusions were observed only in material infected with tobacco etch virus. Several types of cytoplasmic inclusions were induced by the group of viruses varying in length from 730 mμ to 750 mμ; however, only one type of inclusion was common to all seven viruses of this group. It is proposed that this inclusion, which appears as a pin-wheel in cross section and as a bundle in longitudinal section, is diagnostic for infection with viruses of the potato Y group, i.e., rod-shaped viruses whose lengths vary from 730 mμ to 750 mμ.     

重组腺病毒介导的白细胞介素—12（IL—12）在肝癌细胞中的表达

利用腺病毒表达系统在肝癌细胞中成功地表达了有生物活性的白细胞介素－１２（ＩＬ－１２）。ＩＬ－１２的Ｐ３５和Ｐ４０ ｃＤＮＡ分别克隆到腺病毒载体ｐＡＣＣＭＶ．ｐＬｐＡ,构建ｐＡＣ／Ｐ３５和ｐＡＣ／Ｐ４０表面质粒。与腺病毒重组质粒ｐＪＭ１７共转染２９３细胞,通过基因重组产生ＩＬ－１２Ｐ３５和Ｐ４０重组腺病毒。用重组腺病毒感染肝癌细胞株ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１,经ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ检测证明,     

利用5型腺病毒晚期启动子在真核细胞中表达乙型肝炎病毒表面抗原

近年来,随着基因工程研究工作的迅速发展,病毒载体越来越受到重视。用腺病毒(AdV)做载体也早已有人研究。Carl Thummel等构建了AdV-SV40重组体,在AdV晚期启动子控制下表达SV40T抗原。我们用AdV5晚期启动子(LLP)构建了一个新的质粒。用SV40启动neo基因做为真核细胞筛选标志,用AdV5 LLP在Vero细胞内表达HBsAg。并单独用AdV5LLP代替SV40早期启动子,在Vero细胞内表达neo基因。     

脊髓灰质炎病毒感染赤麂细胞株的实验研究

脊髓灰质炎病毒的敏感细胞范围一直局限于灵长类动物细胞。用该病毒感染处理非灵长类的赤麂肺二倍体细胞(KIZ-7901),可诱导9.0—14.7%的细胞出现染色体畸变,除见有染色体或单体断裂外,还见有断片、双着丝粒、环、互换、易位和缺失等。也可引致姐妹染色单体交换率(SCE)的显著提高。脊髓灰质炎病毒感染赤麂细胞后,不产生特异的CPE,不明显影响细胞群体的增殖。应用病毒滴定、包涵体检查,间接免疫荧光试验和电镜检查,都可查见细胞内有病毒或其抗原物质存在。这提示脊髓灰质炎病毒在非灵长类的赤麂细胞内呈现非杀细胞性感染。     

Ⅱ型糖尿病患者红细胞膜葡萄糖运输特性研究

红细胞葡萄糖运输的温度依赖性研究结果表明,Ⅱ型糖尿病患者的葡萄９糖输入的活化能比正常增大约３０％,这和患者葡萄糖输入速率减小的结果相一致。但葡萄糖跨膜输出的活化能没有显著变化。驿在红细胞葡萄糖转运蛋白（ＧＬＵＴ１）内侧特异结合的细胞松弛素Ｂ（ＣＢ）的抑制效应研究结果表明,糖尿病人的ＣＢ抑制常数无明显变化。结合以产用根互素抑制剂的实验,表明２型糖尿病患者红细胞膜上ＧＬＵＴ１很可能发生了结构的变化。发     

直接逆转录原位PCR检测实验性汉坦病毒感染乳鼠脑组织中病毒RNA及其与原位分子杂交的比较

出生后２～３ｄ的昆明种乳鼠,经腹腔接种１００个半数致死量的陈株汉坦病毒,每只０．０５ｍｌ,于接种后１、２、４、６、８、１０、１２、１４ｄ处死动物,每个时间点３～６只不等,取其脑组织固定于４％的多聚甲醛中,石蜡包埋制备５μｍ的连续组织切片,每时间点取１～２例组织切片,用逆转录原位ＰＣＲ（ＲＴ－ＩＳＰＣＲ）方法检测组织中病毒Ｓ片段ＲＮＡ,组织脱蜡后,经ＤＮａｓｅ、蛋白酶Ｋ、消化等予处理,用汉坦病毒ＲＮＡＳ片段特异的一对引物,在组织切片上进行病毒ＲＮＡ的逆转录和ＰＣＲ过程,直接将ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ掺入到扩增产物中,经过３０个ＰＣＲ循环后,用碱性磷酸酶标记的抗ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ抗体免疫组化检测扩增产物,连续组织切片用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的汉坦病毒Ｍ片段Ｇ２编码区ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物的和Ｓ片段特异性探针进行原位分子杂交并与ＲＴ－ＩＳＰＣＲ结果进行比较,另外应用免疫组化检测该基因表达产物病毒核抗原（ＮＰ）,结果,ＲＴ－ＩＳＰＣＲ在病毒感染１ｄ的乳鼠脑组织中检测到病毒ＲＮＡ扩增产物,扩增产物定位于神经细胞胞浆内,而原位分子杂交和免疫组化检测阴性。在病毒感染２ｄ及２ｄ以后的乳鼠脑组织中ＲＴ－Ｉ     

感染病毒的小麦全蚀菌的超微结构

将感染病毒的小麦全蚀菌山东烟台株培养 20天的菌体细胞,进行超微结构的研究。于电镜下观察到球状病毒颗粒,平均直径23—30nm,多是无规则松散的分布于胞质中;或紧密聚集于液泡、线粒体周围;或排列成线状;或7—8个颗粒排列成环状。病毒仅分布于细胞质中,细胞核、脂肪体内均未见病毒颗粒。病毒浓度在较老的菌体内有增加的趋势。全蚀菌的菌丝细胞壁有三层,外层电子致密内含纤维状物,内层电子较为透明,中层为一电子致密度很深的狭窄夹层。壁的厚度不均,外缘不规则;在菌丝体产生隔膜的早期阶段,于隔膜附近有1—3个外被膜结构的沃罗宁体 Woronin body,隔膜形成的后期,见电子致密物质沉积在核膜孔上,形成中的隔膜顶端为尖状突起向基部逐渐增宽略成金字塔形。     

重组含HSV-TK基因腺病毒的构建及对肿瘤细胞的杀伤作用

构建含CMV启动子和HSV-TK基因的复制缺陷型重组腺病毒载体(AdCMVTK),用PCR及Southern杂交筛选鉴定阳性空斑,证实AdCMVTK含HSV-TK基因。纯化的Ad-CMVTK滴度达10~(12)pfu/ml。GCV对经Ad-CMVTK感染(M.O.I.=100)的HeLa等3种肿瘤细胞的IC50<4μmol/L,同时观察到明显的旁杀伤效应。AdCMVTK/GCV系统的建立为肿瘤基因治疗的研究提供了新的手段。     

TRANSPORT OF MICROTUBULAR PROTEIN IN AXONS OF RETINAL GANGLION CELLS

Abstract— Following intraocular injection of [³H]leucine, microtubular protein was isolated by two different methods from the optic pathway of the rabbit. It was found that most of this protein was transported at a slow rate in the axons of retinal ganglion cells. After arrival at the nerve terminals in the lateral geniculate body, the microtubular protein decayed with a half-life of 9 days.     

CYTOLOGICAL AND CYTOCHEMICAL STUDIES OF GREEN MONKEY KIDNEY CELLS INFECTED IN VITRO WITH SIMIAN VIRUS 40

Cytological and cytochemical studies of green monkey kidney cells infected with SV40 virus indicated that the type of lesion produced was influenced by the multiplicity of infection and that the lesions appeared later and progressed more slowly when the inoculum was diluted. The earliest change consisted of enlargement of ribonucleoprotein-containing spherules in the nucleolus (nucleolini). This was followed by rarefaction, with or without condensation, of the chromatin and the appearance of one or more homogeneous masses of inclusion material containing DNA, RNA, and non-histone protein which eventually filled the nucleus. In some instances the chromatin appeared to be directly transformed into inclusion material. In the later stages of infection, the ribonucleoprotein of the nucleolini was no longer stainable and material resembling the nucleoprotein of the intranuclear inclusions was found in the nucleolar vacuoles and in the cytoplasm. The nucleic acids in the inclusions were stained by toluidine blue, toluidine blue-molybdate, the Feulgen stain, and by methyl green. The stainable material was extractable by nuclease digestion or by hot trichloroacetic acid. Green or yellowish green staining by acridine orange was apparently due to binding of dye by protein and not by nucleic acids since the staining reaction was not reduced by extraction of nucleic acids by hot trichloroacetic acid. Extraction with pepsin in combination with ribonuclease or deoxyribonuclease removed practically all the inclusions from the cells; consequently they could not be stained with acridine orange. The cytochemical studies suggest that the use of pepsin together with nuclease is not a meaningful technique.     

侵染细胞中一种内含物的组化研究

在大豆根瘤中有一种非常特殊的细胞质内含物,只存在于侵染细胞中,一个细胞通常只有一个,一般位于细胞的外周部分,常常靠近胞间隙。这种内含物通常为圆形,其直径在1—2μm之间,主要由颗粒状物质、管状和泡状成分组成。它经甲苯胺蓝O染色后呈深蓝色,苏丹黑B染色后呈深黑色,考马斯蓝染色后呈蓝色,因此它不是类聚核糖核蛋白体,也不是一般的蛋白体和脂滴或脂质体,而可能是一种蛋白质和脂的复合物。其作用可能与共生固氮中的能量转换和供应有关。