棉铃虫幼虫抗菌肽的初步研究*

棉铃虫(Heliothisarmigera)五龄幼虫经大肠杆菌、金黄色葡萄球菌混合菌诱导后,产生抗菌肽,经100℃热处理15min后活性不变,通过琼脂糖孔穴扩散法测定,对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌以及真菌都具有很强的抑菌活性。CM-Sepharose离子交换层析粗纯化产物经SDS-PAGE测定,其分子量约3kD。     

家蝇幼虫分泌物抗菌肽的生化特性初步研究

研究了不同温度、蛋白酶及反复冻溶对家蝇 Musca domestica 幼虫活体浸泡法获得的分泌物抗菌肽抗菌活性的影响;并检测其凝血效应;试管稀释法测定其最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）;SDS-PAGE分析其分子量范围。结果表明,该抗菌肽具有较强的热稳定性、酶稳定性及较强抗菌活性的特性,无凝血作用。对大肠埃希菌的最低抑菌浓度为37 μg/mL、最低杀菌浓度为75 μg/mL;分子量约10 kD。     

一组人工合成抗菌肽的研究

Cecropin A1是一种从惜古比天蚕(Hyalophora cecropia)中提取的由37个氨基酸组成的一种α-螺旋抗菌肽,其杀菌活性较弱。本文采用了cecropin A1的N端1-8序列KWKLFKKI,另加一段标准的α-螺旋结构序列,然后用一个铰链结构GIG相连,合成了15条抗菌肽。经过试验证明部分含有核心标准螺旋结构的序列,对革兰氏阳性菌和阴性菌的最小抑菌浓度仅是原有cecropin A1抗菌肽的1/100左右。该类抗菌肽有希望进一步开发为新的抗感染药物。该类抗菌肽已经申请专利,专利号为PCT/CN 03/00522。     

抗菌肽CMIV变体的制备及对临床耐药致病菌作用的初步研究

应用新的融合方法制备抗菌肽ＣＭＩＶ变体;了解重组型抗菌肽变体对几株临床耐药菌的抗性。通过基因工程的手段,将合成的抗菌肽ＣＭＩＶ的ｃＤＮＡ与根据金黄色葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ）的ＩｇＧ结合结构域设计并合成的ＺＺ结构域基因融合,在大肠杆菌细胞中表达;用制备的ＣＭＩＶ变体进行抑菌圈试验和液相试验。结果表明５ｕｌ（１０ｕｍｏｌ／Ｌ）抗菌肽可在大肠杆菌Ｋ１２Ｄ３１平板上产生直径１５ｍｍ的抑菌圈;抑制５０％大肠杆菌生长的抗菌肽浓度约０．２ｕｍｏｌ／Ｌ。６种青霉素抗性的革蓝氏阴性菌的抑菌圈直径在６～１３ｍｍ之间;而同样的条件下,对革蓝氏阳性菌——金黄色葡萄球菌的作用很弱。用新的融合方法可通过大肠杆菌体系制备有活性的抗菌肽变体,重组型抗菌肽有可能成为新一代的抗菌素     

家蝇抗菌肽的抑菌动力学研究及其机理初探

利用鼠伤寒沙门氏菌针刺诱导家蝇幼虫表达抗菌肽,对抗菌肽的抑菌动力学进行研究,并通过抗菌肽样品对不同细菌动力学特性的研究出发对抗菌肽抑菌作用机制进行探讨。研究发现抗菌肽样品的活性与作用时间有关,24h内出现一到两个活性峰,同一抗菌肽样品对不同细菌的抑菌动力学有差异,抗菌肽的抑菌动力学机制应该与它的的抑菌作用机制有关。通过电镜观测、细胞磷代谢、紫外吸收物测定以及抗菌肽与细菌DNA相互作用结果可知,微生物诱导家蝇表达的抗菌肽样品不仅能够造成细菌细胞的快速坍塌破裂而且能够破坏细胞核心,与DNA结合作用。抗菌肽抑菌动力学的解释：微生物诱导产物中含有两类抗菌肽,一类抗菌肽能造成细胞膜的快速坍塌破裂形成第一个活性峰;另一类抗菌肽可进入细胞,破坏细胞核心,造成紫外吸收物大量外泄形成第二个活性峰。     

Cu2+胁迫对黑水虻幼虫抗菌肽组分及抑菌活性的影响

研究不同浓度Cu~(2+)胁迫对黑水虻5龄幼虫抗菌肽分离纯化组分及抑菌活性影响,为黑水虻无害化处理粪便技术的有效实施提供有力的理论依据,为其副产品在饲料、食品及医药研发中的应用提供有价值的实验数据。本文在人工饲料中添加不同浓度Cu~(2+)(0、150、1 200 mg/kg)以饲喂黑水虻幼虫,采用金黄色葡萄球菌针刺法诱导5龄幼虫,断头收集血淋巴,高速冷冻离心结合超滤离心制备抗菌肽粗提物;利用RP-HPLC对三组抗菌肽粗提物进行分离纯化,收集各纯化峰对应组分,采用纸片琼脂扩散法测定各纯化峰对应组分的抑菌效果,以阐述Cu~(2+)胁迫对黑水虻抗菌肽的影响。结果表明,经Cu~(2+)胁迫,抗菌肽粗提物分离纯化后各组分的出峰时间及峰面积所占比例均不同,不同处理浓度下各分离组分第2峰面积均大于第1峰面积,其中150-2峰面积最大,为73.31%;分离纯化后所得6个组分对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及白色念珠菌均有抑菌活性,对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的抑菌活性显著高于对大肠杆菌抑菌活性,但其对金黄色葡萄球菌及白色念珠菌的抑菌活性未见显著差异;与其他5个组分相比,组分150-2对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌及大肠杆菌抑菌活性最强,抑菌直径分别为27.85±0.74 mm、28.34±0.76 mm、21.97±0.54 mm。由此可见,不同浓度的Cu~(2+)胁迫对黑水虻幼虫抗菌肽组分及抑菌活性均产生显著影响,其中组分150-2抑菌活性最强,具有很好的开发潜能。     

贵阳地区烟草田烟青虫和棉铃虫幼虫天敌的初步观察

烤烟上的烟青虫Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａａｓｓｕｌｔａ、棉铃虫Ｈ .ａｒｍｉｇｅｒａ是烤烟生长期的主要食叶害虫。分布贵州各烟区。每年 5月上旬末开始在烟地混发 ,取食烤烟心叶、嫩叶 ,严重影响烤烟的生长及产量和质量。关于两害虫幼虫的天敌种类 ,贵州仅有的记录是棉铃虫齿唇姬峰Ｃａｍｐｏ ｌｅｔｉｓｃｈｌｏｒｉｄｅａｅ。作者于 1 999年烤烟生长季节 ,在贵州大学教学实验分场及贵阳地区的开阳县、息烽县、清镇市、修文县的烟地里采集到两种害虫的幼虫于室内饲养 ,以了解其天敌种类 ,结果如下。1　材料与方法1 1　材料1 1 1　饲养…     

抗菌肽活性及天然抗菌肽的改造

抗菌肽具有抗菌谱广、热稳定性强、分子量小及免疫原性小等特点,其杀菌机制独特,病原菌不易产生耐药性,有望开发成新一代肽类抗生素。本文主要综述了影响抗菌肽生物活性的生化性质,即螺旋度、疏水性、两亲性、正电荷数等,并从结构的角度论述了其对抗菌肽抑菌活性的影响。部分抗菌肽具有空间结构不稳定、溶血活性等缺点,限制了其临床应用。因此,对天然抗菌肽的改造也成为目前抗菌肽的研究热点,本文还综述了天然抗菌肽的改造方法。     

棉铃虫幼虫感染棉铃虫微孢子虫后的组织病理变化

1997年田间调查时发现一种寄生于棉铃虫Helicoverpa armigera（Hübner）的微孢子虫Nosema sp.,它对棉铃虫有较强的致病力并可经卵垂直传播。利用透射电镜对棉铃虫幼虫感染该微孢子虫后的组织病理变化进行了初步观察。结果表明：该微孢子虫可侵染棉铃虫的中肠、马氏管、脂肪体、神经等组织;侵染后可导致寄主中肠的微绒毛脱落,线粒体内脊排列方向发生变化,线粒体整体发生变形并最终瓦解;内质网发生断裂;细胞核体积变小并变形,但该微孢子虫并不入侵细胞核;马氏管膨大,边缘向外突出隆起;神经细胞的细胞核变成长条形,细胞界线模糊;在神经细胞内也发现了微孢子虫孢子,证明该微孢子虫也入侵寄主神经细胞。     

绵羊抗菌肽研究进展

抗菌肽是动植物先天性免疫系统的组成部分。概述了绵羊抗菌肽Defensin、Cathelicidins、SAAPs的研究进展和应用前景,并分析了在绵羊抗菌肽研究中存在的问题。     

中国棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒多角体蛋白基因的序列分析

以AcMNPV的多角体蛋白基因为探针,定位了中国棉铃虫单粒包理核型多角体病毒（HaSNPV）的多用体蛋白基因。序列测定表明,HaSNPV的多角体蛋白基因编码区为738个核苷酸,编码246个氨基酸,预计蛋白质分子量为29kDa。同源性分析表明,HaSNPV与美洲棉铃虫单粒包理核型多角体病毒（HzSNPV）具有最高的同源性,在整个阅读框架中只有4个碱基的差异,其中第179位碱基的变化导致唯一的氨基酸变化,这种变化并未导致其二级结构的改变。此外,两种病毒该基因的启动子结构也完全一样。HaSNPV与其它的SNPV和MNPV的同源性明显要低。结果预示HaSNPV与HzSNPV可能为同种病毒的不同变种。     

棉铃虫、斜纹夜蛾无公害药剂防效筛选试验

室内和田间药效试验结果均表明,辛硫磷、病毒杀虫剂、氟虫脲、除尽和高氯·辛乳油对棉铃虫和斜纹夜蛾具有良好的防治效果,适于在瓜菜上使用,可在目前海南瓜菜生产中大量推广应用。     

人精液凝固蛋白Ⅰ衍生合成肽的抗菌活性

SgI-29是作者最新发现的有抗菌活性的人精液凝固蛋白I衍生抗菌肽。以SgI-29为模板,合成4种不同肽链长度的SgI-29衍生小肽,利用理化性质分析软件及螺旋轮作图法对SgI-29及其衍生物进行了理化性质及结构的预测,结合琼脂糖弥散法抗菌试验得到的不同合成肽段对大肠杆菌标准菌株(Escherichia coli ATCC 25922)以及绿脓杆菌标准株(Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853)的抗菌活性实验结果,探讨了SgI-29及其衍生物的结构-功能关系。结果表明：SgI-22在所有的SgI-29及其衍生物中有最好的抗菌活性,是进行进一步结构优化的良好模板。     

中国棉铃虫核型多角体病毒VHA 273毒株多角体蛋白质某些理化特性的研究

从VHA273病毒感染中国棉铃虫的典型病虫尸抽提纯化多角体。经碱解释放的多角体蛋白,用超速离心,Sepharose 6B柱层析纯化,多种方法鉴定其纯度。SDS-PAGE测出多角体蛋白亚基分子量MW=28,000±500d。等电聚焦电泳测出7条电泳带,其主带p15.78±0.02,次带p15.3S-6.25。氨基酸组成分析表明富含酸性氨基酸。Niles兰染脂蛋白、甲苯胺兰染糖蛋白结果均呈阳性。     

中红侧沟茧蜂寄主——二龄棉铃虫幼虫血淋巴成分的初步分析

对二龄棉铃虫Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａ（Ｈüｂｎｅｒ）幼虫血淋巴的二种样品（去血细胞和未去血细胞）中的干物重、含水量、灰分、蛋白质、总糖、还原糖、总脂、胆固醇、维生素Ｃ的含量,分别进行了定量分析,对未去血细胞的血淋巴进行了氨基酸测定;同时,对蛋白质组份、脂类组份也进行了定性分析     

中国棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因的定位与克隆

以α３２ＰｄＡＴＰ标记含ＣｆＭＮＰＶ几丁质酶基因的重组质粒为探针,在６８℃条件下对棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,将ＨａＳＮＰＶ的几丁质酶基因分别定位在ＢａｍＨＩＥ、ＢｇｌⅡＥ、ＥｃｏＲＩＧ、ＨｉｎｄⅢＦ、ＸｂａＩＨ、ＢａｍＨＩ＋ＨｉｎｄＩＩＭ和ＢａｍＨＩ＋ＸｂａＩＨ,并以ｐＴＺ１９Ｒ为载体获得了ＸｂａＩＨ片段克隆。