苯二氮草受体的内源性配体

苯二氮(?)(BDZ)类药物是临床广泛使用的抗焦虑药。大量证据表明,这类药物的效应是通过体内BDZ受体中介产生的。BDZ和吗啡均为机体的外源性物质;自从体内发现阿片受体后,又发现了阿片受体的内源性配体阿片肽及非肽类吗啡样物质。在发现BDZ受体的同时,人们就开始寻找可能存在的BDZ受体内源性配体。先后在多种组织提取物中发现嘌呤,嘌呤核苷酸、烟酰胺,以及一些肽和分子量在1500至70000的蛋白质可与BDZ受体结合,但未见它们具有与BDZ相似或相反的药理效应。1980年从人尿中分离出β-卡     

外周苯二氮(艹卓)受体激动剂Ro5-4864抑制大鼠心肌细胞线粒体通透性转换

线粒体通透性转换（mitochondrial permeability transition,MPT）导致线粒体氧化应激性损伤。近年研究认为,位于线粒体外膜的外周苯二氮节受体（peripheral benzodiazepine receptor,PBR）参与了线粒体的重要生理功能。本研究在心肌细胞线粒体水平探讨激动PBR能否抑制Ca^2＋诱发的MPT。分离Sprague—Dawley大鼠心肌细胞线粒体,将PBR激动剂Ro5-4864（50、100、200μmol／L）和线粒体孵育,利用150μmol／L Ca^2＋诱发MPT,部分线粒体在与100μmol／L Ro5-4864孵育前5min加入MPT孔道开放剂苍术苷（atractyloside,ATR）。采用分光光度法观察线粒体膨胀情况：Westernblot检测线粒体细胞色素C（cytochrome C,CytoC）释放;利用荧光探针JC-1在激光共聚集显微镜下观察线粒体膜电位的变化。50、100、200μmol／L Ro5-4864均显著抑制Ca^2＋诱发的520nm处线粒体吸光度的下降,而且抑制Ca^2＋引起的线粒体CytoC释放和线粒体膜电位下降,但ATR可阻断R05—4864的上述作用。结果提示,PBR激动剂可抑制大鼠心肌MPT,保持线粒体CytoC含量和稳定线粒体膜电位,减轻线粒体损伤。PBR的激活可能成为减轻心肌细胞应激性损伤及心肌保护的新方法。     

外周型苯二氮(艹卓)结合部位具有生理功能吗?

外周型苯二氮(艹卓)结合部位在物种进化的后期阶段才出现,它是否具有生理功能至今尚无定论。它对心肌的收缩、甲状腺瘤细胞的增殖、体液免疫反应、醛固酮分泌以及精神和行为反应等方面可能具有一定的生理或药理学意义。     

人外周型苯二氮卓受体及其突变受体cDNA克隆和序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆了三种人外周型苯二氮卓受体ＰＢＲｃＤＮＡ,测序表明,４４２ｂｐ片段与文献报道相比缺失８４ｂｐ编码序列,其转录水平高于正常ＰＢＲ．该序列编码一个与ＰＢＲ结构相关但缺失了２８个氨基酸残基的突变受体蛋白．这一异常转录本可能是通过选择性剪接方式转录产生并只存在于中国人肝癌ＢＥＬ７４０２细胞系,表明ＰＢＲ基因表达具有细胞特异性和异质性．突变受体的发现为研究ＰＢＲ的结构和功能提供了理想的分子和细胞模型     

人外周型苯二氮卓受体及其突变受体cDNA克隆和序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆了三种人外周型苯二氮卓受体ＰＢＲｃＤＮＡ,测序表明,４４２ｂｐ片段与献报道相比缺失８４ｂｐ编码序列,其转录水平高于正常ＰＢＲ,该序列编码一个与ＰＢＲ结构相关但缺失了２８个氨基酸残基的突变受体蛋白,这一异常转录本可能是通过选择性剪接方式转录产生并只存在于中国人肝癌ＢＥＬ７４０２细胞系,表明ＰＢＲ基因表达具有细胞特异和异质性,突变受体的发现为研究ＰＢＲ的结构和功能提供了理     

苯二氮和γ-氨基丁酸A/苯二氮/氯离子通道受体复合物

动植物体内广泛存在微量苯二氮(艹卓),其来源和生物学作用尚有待探讨。苯二氮(艹卓)受体可调控γ-氨基丁酸受体控制的Cl~-通道开放,从而改变跨膜Cl~-电流并影响膜电位,导致神经系统某些功能改变。苯二氮(艹卓)及其受体复合物与肝性脑病的发病机制及治疗有密切关系。     

对(艹孟)烷-3,8-二醇的合成与应用研究进展

对(艹孟)烷-3,8-二醇是一种具有生物活性的化合物,主要来源于柠檬桉精油,可直接用于香水、杀虫剂和药品等.通常采用化学和生物化学的方法合成对(艹孟)烷-3,8-二醇,以替代从柠檬桉叶油分离得到的天然产品.以香茅醛为原料通过Prins环缩合和水解,或者通过Solanum aviculare悬浮培养方式进行生物转化得到对(艹孟)烷-3,8-二醇;通过薄荷醇的氧化,或者以2-丁烯醛为原料与甲基锂、NaClO2等试剂经过较长步骤也可合成对(艹孟)烷-3,8-二醇.对(艹孟)烷-3,8-二醇可应用于制造驱虫剂、凉味剂、药物或者化妆品的添加剂以及海水防护涂料添加剂等.     

代谢性谷氨酸受体配体(s)-4C3HPG对大鼠脑缺血耐受性诱导的影响

目的：观察侧脑室注射代谢型谷氨酸受体1／5亚型（mGluR1/5)配体（s)-4C3HPG对海马脑缺血耐受（BIT）诱导的影响,以探讨mGLUR1/5在BIT诱导中的作用。方法：采用大鼠四血管闭塞全脑缺血模型（4－vessel occlusion,4VO),应用硫堇染色和GFAP免疫组化法。36只大鼠椎动脉凝闭后分为sham组、单纯缺血组、BIT组和（s)-4C3HPG组,其中（s)-4C3HPG组又按所给药物剂量不同,分为0．2、0．04和0．008mg三个亚组。所有动物均在手术后或末次缺血后7d处死取材观察。结果：（1）单纯8min缺血可使海马CA1区组织学分级升高、锥体神经元密度降低和胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性表达增加（P＜0．05vs sham）.(2)BIT组未见单纯缺血组的上述变化,表明CIP可防止后续8min缺血造成的神经元损伤。（3）CIP的这种保护作用可被（s)-4C3HPG阻断,表现为海马CA1区组织学分级升高和锥体神经元密度降低（P＜0．05 vs sham)。这种变化与（s)-4C3HPG的剂量呈现明显的相关性,即剂量越大,上述改变越明显。结论：（s)-4C3HPG可阻断CIP诱导BIT的作用,提示mGluR1/5参与BIT的诱导。     

Humanin通过内源性途径抑制Aβ_(31-35)诱导的神经元凋亡(英文)

为了探讨Humanin(HN)对Aβ31-35诱导的培养皮层神经元凋亡的影响,本研究采用不同浓度(5、10、20μmol/L)的HN预孵育体外培养的皮层神经元不同时间(0、8、16h),加入Aβ31-35(25μmol/L)24h后,应用电子显微镜观察神经元的凋亡情况;流式细胞术、TUNEL法检测神经元的凋亡率;酶标仪检测caspase活性;Westernblot检测Bax蛋白的表达。结果显示:HN(20μmol/L)预孵育16h明显抑制了Aβ31-35诱导的神经元凋亡;HN降低了Aβ31-35诱导的caspase-3、9活性的升高;HN抑制了Aβ31-35诱导的Bax从胞浆到线粒体的转位。以上结果提示,HN通过阻断内源性凋亡途径抑制Aβ31-35诱导的神经元凋亡。     

苯二氮卓化合物F89对高邮鸭增重及血清GH和IGF-1水平的影响

89属于苯二氮卓类化合物 (Ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｉｎｅｓ,ＢＺｓ) ,自七十年代发现这类化合物能够促进动物的食欲 ,并且具有剂量小、效应强、有效剂量范围宽、无副作用等优点以来 ,其促摄食作用一直备受人们的关注。以往的研究证明Ｆ89不仅具有显著的促进食欲作用 ,而且不降低消化率 ,明显提高动物的生长速度 ,但是Ｆ89的作用具有种属差异 ,即使同种属中不同品种或品系的动物也会呈现不同的效应。本研究以生长速度快的高邮鸭为对象来观察Ｆ89对其增重的影响 ,并采用外周注射Ｆ89的方法 ,与生长速度慢的绍兴鸭进行比较 ,观察Ｆ89对鸭作用是…     

A型γ-氨基丁酸受体α1亚基Cys~(166)-Leu~(296)片段的配体结合和结构性质

研究A型γ 氨基丁酸受体 (γ aminobutyricacidtypeA ,GABAAreceptor)α1亚基Cys166 Leu2 96片段的苯并二氮杂 (benzodiazepine ,BZ)结合位点及其结构特性 ,了解该片段结构与功能的关系 .利用PfuDNA多聚酶依赖的点突变技术将该片段的每一残基用丙氨酸替代 ,通过E .coli体系过表达 ,纯化得到各种突变蛋白 .运用圆二色性 (circulardichroism ,CD)技术测定突变蛋白的二级结构 ,借助荧光各向异性 (fluorescenceanisotropy ,FA)、荧光共振能量转移 (fluorescenceresonanceenergytrans fer,FRET)技术测定其与BZ荧光配基Bodipy FLRo 1986 (BFR)的结合强弱 .通过与野生型的比较 ,确定其残基是否与结构和或结合相关 .结果显示 ,突变体R191A、G2 12A、S2 13A、R2 14A及V2 79A的结合能力减弱 2～ 3倍 ,除V2 79A显著增加α螺旋外均无二级结构的改变 .E193A、S2 78A、V2 79A和P2 80A的α螺旋显著增多 ,N2 75A和R2 76A的α螺旋则显著减少 .推测Cys166 Leu2 96的Arg191,Gly2 12 ,Ser2 13 和Arg2 14 可能位于BZ的结合袋 ,其第 4个环区 (Glu2 10 Asn2 16)与结合密切相关 .Glu193 、Ser2 78和Pro2 80 参与维持β折叠结构 ,而Asn2 75和Arg2 76参与维持α螺旋结构 .Cys166 Leu2 96的第 9个环区 (Asn2 75 Pro2 80 )对其结     

重组大肠杆菌合成聚(3-巯基丙酸)和聚(3-羟基丁酸-3-巯基丙酸)的研究

利用Clostridium acetobutylicum的丁酸激酶基因 (buk) 和磷酸转丁酰基酶基因(ptb),以及Thiocapsa pfennigii的PHA合成酶基因,设计了一条能够合成多种聚羟基烷酸的代谢途径,用构建的质粒转化大肠杆菌,获得了重组大肠杆菌菌株.前期的研究表明,在合适的前体物条件下,该重组大肠杆菌能够合成包括聚羟基丁酸、聚(羟基丁酸-戊酸)等多种生物聚酯[Liu and Steinbüchel, Appl. Environ. Microbiol. 66739-743].利用该重组大肠杆菌,通过生物催化作用合成了3-巯基丙酸的同型共聚酯,同时利用该重组大肠杆菌还获得了含3-巯基丙酸单体的多种异型共聚物.实验首先研究了3-巯基丙酸对大肠杆菌生长的影响,在此基础上优化了培养过程中添加3-巯基丙酸的时机和浓度,结果表明,在实验的条件下,细胞合成聚(3-巯基丙酸)可达6.7%(占细胞干重),合成聚(3-羟基丁酸-3-巯基丙酸)(分子中3-巯基丙酸3-羟基丁酸=31)可达24.3%.实验进一步研究了同时或分别表达以上3个基因的重组大肠杆菌合成聚合物的能力,结果表明只有当3个基因同时表达时才能合成聚合物,说明3个基因对合成过程是必须的,从而表明了合成途径是按照设计的路线进行的.还通过GC/MS、GPC、IR等手段对合成的化合物进行了定性的研究.聚(3-巯基丙酸)或聚(3-羟基丁酸-3-巯基丙酸)等聚酯属于一类新型生物聚合物,它在分子骨架中含有硫酯键,不同于聚羟基烷酸酯的氧酯键,从而具有显著不同的物理、化学、光学等性质和具有重要的潜在应用价值.     

血浆(1-3)-β-D-葡聚糖诊断深部真菌感染的临床研究

目的探讨血浆(1-3)-β-D-葡聚糖对早期诊断深部真菌感染的临床价值。方法收集2009年3月～11月间在北京友谊医院感染科住院患者174例,根据侵袭性真菌感染诊断标准,将患者分为排除深部真菌组、确诊组、临床诊断组、拟诊组。应用MB-80微生物动态快速检测系统,检测各组患者血浆(1-3)-β-D-葡聚糖水平,分析比较深部真菌感染组和非深部真菌感染组血浆(1-3)-β-D-葡聚糖的水平。结果深部真菌感染组血清(1-3)-β-D-葡聚糖含量为(153.4±37.0)pg/mL,排除深部真菌感染组血清(1-3)-β-D-葡聚糖含量为(54.6±8.6)pg/mL,两组间有统计学差异(t=3.4,P<0.01);分析血浆(1-3)-β-D-葡聚糖诊断深部真菌感染,以20 pg/mL为诊断阈值,其准确率、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为70.1%、87.5%、61.9%、52.1%、91.2%。确诊病例、临床诊断病例、拟诊病例,3组间血清(1-3)-β-D-葡聚糖含量无统计学差异(P>0.05)。结论深部真菌感染组的葡聚糖水平明显高于排除深部真菌感染组的葡聚糖水平,具有统计学意义。以20 pg/mL为诊断阈值,其准确率、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为70.1%、87.5%、61.9%、52.1%、91.2%,可作为深部真菌感染的最佳诊断阈值。     

大鼠3′-甲基-4,4′-二甲基氨基偶氮苯(3′-MeDAB)诱癌过程甲胎蛋白的动态变化和免疫酶标记定位观察

本工作采用放射火箭电泳自显术和免疫酶标记定位技术,对大鼠3'-MeDAB诱癌过程血清和肝组织甲胎蛋白(AFP)的动态变化和定位情况进行了观察。发现(1)肝硬化假小叶内的少数肝细胞、嗜碱性间变再生结节细胞、少数“幸存肝细胞”及少数“过渡性细胞”,具有合成AFP的能力。未见肝内其他类型细胞合成AFP。合成AFP的细胞大多具有胞浆嗜碱性、生长活跃和形态上去分化的特点。(2)未见胆管癌细胞合成AFP。肝细胞癌分化好的癌细胞绝大多数也未见合成AFP,分化差的癌细胞合成AFP的能力,基本上与其生长活跃程度呈正相关,与分化程度呈负相关,而与癌细胞是否处于核分裂阶段关系不大。(3)肝癌组织AFP酶标的强度和范围与血清AFP水平之间基本上有平行关系。此外,本文还就什么细胞合成AFP、血清AFP“马鞍型”变化的成因及病理组织学基础等进行了讨论,并根据实验结果,对大鼠3'-MeDAB肝癌的组织发生提出了初步的设想。     

中枢去甲肾上腺素和内阿片肽系统对苯二氮受体反相激动剂DMCM致焦虑作用的影响

在大鼠条件反射性惊恐反应致焦虑模型上,中枢苯二氮(艹卓)(BZD)受体激动剂安定,可使冲突惊恐反应期(PP)的操作数目显著增加,BZD受体反相激动剂DMCM则显著减少PP的操作数目;DMCM的这一作用,可分别为中枢BZD受体拮抗剂Ro 15-1788,GABA A型受体激动剂蝇蕈醇、阿片受体拮抗剂环丙甲羟二氢吗啡酮和中枢去甲肾上腺素能(NA)突触前α_2受体激动剂可乐定所阻断。结果表明,中枢阿片肽和NA系统共同参与BZD受体反相激动剂DMCM的致焦虑作用。     

山羊胎儿肝脏3β-羟基甾体脱氢酶/△~4-△~5异构酶(3β-HSD)cDNA的克隆(英文)

3β-羟基甾体脱氢酶/△~4-△~5 异构酶(3β-HSD)是哺乳动物体内广泛存在的一类参与甾体激素代谢的氧化还原酶, 且具有异构酶活性。3β-HSD 催化3β-羟基甾体的脱氢及随后的△~5-3-甾酮产物的异构化反应, 以产生α, β-非饱和酮, 3β-HSD 在甾体激素代谢中起着重要作用。本文以胎羊肝为材料, 首次获得了山羊胎肝的3β-HSD 的cDNA, 并进行了3β-HSD在肝脏组织的表达分析。参照牛、啮齿类的3β-HSD cDNA的高同源区设计引物。 以2～3月雌性胎羊肝脏mRNA为模板, 经RT-PCR获得416 bp cDNA片段 (Fig.1), 然后以其为探针筛选胎羊肝λgt 10 cDNA文库 最后获得3'-端缺失的3β-HSD cDNA 克隆,并推导了其氨基酸序列 (Fig.2)。同源分析表明山羊胎肝3β-HSD的氨基酸序列与牛卵巢、人Ⅰ型和小鼠Ⅰ型3β-HSD的同源性分别为96%、78%和73% (Fig.3)。提取雌性胎羊、雄性胎羊及母体羊肝脏的总RNA, 同时做RT-PCR,表明3β-HSD 在不同个体肝脏中的表达存在差异,雌性胎羊和母体孕羊肝脏中都有3β-HSD的表达,而在雄性胎羊肝脏中,则未检测到表达信号(Fig.4)。     

β-二酮亚胺-铁(Ⅱ)羰基配合物的合成及其表征

β-二酮亚胺配体(ArN(R)CCH(R)NAr,R=CH_3,H,Ar=2,6-二异丙基苯胺,苯胺,2,6-二甲基苯胺等等)可与不同金属配位形成多种配合物,上述配合物因其特殊的反应性能引起了研究者的广泛关注。本文以环戊二烯氯代羰基铁与β-二酮亚胺配体(ArN (R)CCH(R)NAr,R=CH_3,Ar=2,6-二甲基苯胺)反应生成铁的金属配合物,并对其产物进行了IR,1HNMR表征。     

壳聚糖-g-N.羧甲基-二(2-苯并眯唑)-1,2-乙二醇的制备及其性能

以2-溴乙酸、壳聚糖、二（2-苯并咪唑）-1,2-乙二醇为原料,利用接枝作用将化学修饰后的小分子药物二（2-苯并咪唑）-1,2-乙二醇连接在天然高分子壳聚糖（CTS）上。并以。HNMR,IR,热分析及XRD等方法对其结构进行表征并研究接枝聚合物的理化性质。本文采用络合滴定法测定了接枝聚合物对一系列重金属离子的吸附作用;采用震荡法进行悬菌定量杀菌实验;还以经典的静态失重法研究了合成的聚合物在腐蚀介质中对N80钢片腐蚀的抑制作用。结果表明：小分子药物-（2-苯并咪唑）-1,2-乙二醇在接枝到天然高分子壳聚糖后热稳定性提高,在酸中具有良好的溶解度,对金属离子吸附能力在一个较宽温度范围内得以保持;同时增强了抑菌力,降低了最小抑菌浓度;利用BBIE与CTS韵协同作用提高了聚合物对金属腐蚀的抑制能力。