用于光学显微镜研究的塑料半薄切片

本文介绍了以环氧树脂为包埋介质的用于光学显微镜的塑料半薄切片的制备技术和部分实验结果。叙述了固定、脱水、渗透、包埋、聚合、切片、染色及封片各程序。作为对石蜡切片技术的补充和发展。塑料半薄切片能充分发挥光学显微镜的分辨能力,能观察到许多在石蜡切片上看不清或看不到的细胞内部结构,如:花粉的外粉壁,萌发孔;细胞的微核,液泡和液泡问的原生质丝等。可用同一包埋材料在半薄切片基础上进行超薄切片,所以半薄切片技术是一种把光学显微镜水平的研究和电子显微镜水平的研究联系在一起的一种过渡性技术。因此,它无论对植物学工作者或其它生物学工作者都是很有用的一项技术。     

塑料薄切片技术

光学显微镜术观察用的薄切片,可用各种塑料包埋剂,如乙二醇甲基丙烯酸酯(glycolmethacrylate)和环氧树脂类(epoxy resins)包埋。这些塑料包埋剂经凝固后,很容易被切成1—2微米的薄切片,比传统的石蜡切片要薄得多;而且染色时无需经过脱蜡手续,便可     

一种简单而快捷的半薄切片脱树脂新方法

目前,在HE染色、特殊染色或免疫组织化学染色研究方面多采用普通石蜡包埋切片,其切片厚度可薄达4μm,若更薄的切片,切割有一定的难度.对于各种染色而言,越薄的切片,细胞与组织结构越清晰,染色效果越好.环氧树脂(Epon)包埋的组织块不仅用于透射电子显微镜超薄切片的制备,也可用于光镜半薄切片的制备[1].经典的脱树脂的方法是将半薄切片置于氢氧化钠的无水乙醇饱和溶液中浸泡24h,然后再充分水洗.该法耗时长,容易脱片,本实验中摸索出一种简单而快捷的脱树脂的方法,现介绍如下.     

不同组织在石蜡包埋中的方法和体会

在石蜡切片制作过程中,组织包埋是一重要环节,不同组织和病变的包埋则有所不同,包埋位置直接影响切片和对病变的观察,现将我们在工作中的包埋方法和体会介绍如下：     

碱性磷酸酶钙-钴法染色的不同包埋方法比较

目的探讨石蜡切片、冰冻切片及碳蜡(聚乙二醇)包埋切片在碱性磷酸酶染色中的应用,综合分析几种组织处理方法的优缺点,以便在病理诊断及科研工作中能找到更适合的碱性磷酸酶染色方法。方法取新鲜乳腺组织及肝组织,每份标本各取3块组织,根据包埋方法的不同,分为3组:石蜡切片碱性磷酸酶染色、冰冻切片碱性磷酸酶染色、碳蜡包埋切片碱性磷酸酶染色。结果 3组切片均可见黑色碱性磷酸酶的存在,其中肝组织内显示碱性磷酸酶呈黑色,沿胆小管分布;乳腺组织内显示碱性磷酸酶呈黑色沉淀弥漫分布于乳腺间质中。结论碳蜡包埋切片在碱性磷酸酶染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,并弥补了常规冰冻切片和石蜡切片染色的缺点和局限性,在病理诊断及科研工作中具有一定的应用价值。     

用照相膠底板代替火棉膠作组织切片

火棉膠(Celloidin),它的商品名称许多,又叫Colloidin,是一种爆炸性易燃物质。除了在军火上用它制成烈性炸药外,在组织胚胎学、神经解剖学、病理组织学、生物学等教研组及一些研究部门常用它作包埋组织切片之用。火棉膠包埋组织制成的切片,可使组织细胞不扭转收缩,保持组织的原形,更适宜于大塊及多空隙与较软或较硬的组织切片(如结缔组织、内耳、牙、眼球等组织切片),一般神经组织切片多用火棉膠包埋,为研究工作及教学实验制作标本不可缺少之物质。市上出售者多系很淡之液体、固体及半固体的,因帝国主义禁运以至未有进口货,价钱也很贵,1两约50—70元。近来市上尚难以买到,这样对我们的工作和研究与教学用的标本制作是有些影响的。为了减少外匯和节约以及更好的开展工作,我们研究利用了已使用过的发照相膠底     

三种不同脂肪染色方法的比较

目的探讨碳蜡(聚乙二醇)包埋技术、冰冻切片及饿酸染色在脂肪染色中的应用,综合比较几种方法的优缺点,以便在病理工作及科研工作中能找到更适合的脂肪染色方法。方法取新鲜脂肪组织及肝组织,每份标本各取3块组织,分为A、B、C三组:A组和B组标本分别进行碳蜡包埋切片和常规冰冻切片,油红O法染色;C组以饿酸浸染组织块后进行石蜡包埋切片及眦复染。结果 A组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;B组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;C组切片脂肪滴呈黑色。结论饿酸染色和碳蜡包埋技术在脂肪染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,弥补了常规冰冻切片脂肪染色的缺点和局限性,在病理检验及科研中具有一定应用价值。     

微小组织石蜡切片制作体会

目的探讨提高微小组织石蜡制片质量的方法,明确微小组织的内涵。方法针对微小组织石蜡切片制作过程中常常出现组织遗漏、切完和多粒组织切片不全等问题,通过伊红标记、预包埋等方法来精心制作切片。结果伊红标记可避免微小组织遗漏,预包埋可以使多粒微小组织处于同一水平面来防止切不全或切完组织的情况发生,整个制片过程中仔细操作也是必不可少的条件。结论伊红标记和预包埋等方法能够很好地解决微小组织切片制作中的遗漏、切完和"切不全"等问题,并进一步明确了微小组织的内涵。     

火棉胶包埋组织切片及冰冻切片的连续切片与染色

近年来为了教学和研究所用之切片标本,曾广泛使用火棉胶包埋组织切片和冰冻切片法,这两种方法虽然它是有比石腊包埋组织切片稍厚一点,但它的优点是远超过了缺点。组织用石腊包埋,在组织经过不同浓度酒精脱水后,须用氯仿或二甲苯透明,再置于58℃温箱石腊中几个小时。以上透明剂具有使组织收缩变小,在经过这样高温之下,组织增加它由收缩而扭转和变形,纤维曲折,细胞及所含物质缩小,折光率增强,组织内所含之尖脂脂亦易于被以上透明剂所溶解,致染色不佳。作为观察和研究组织形态是不够美满的。因为石腊包埋组织制作切片有以上之缺点,     

一种用于DAPI染色的方法--Steedman's wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedman's wax 包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法.Steedman's wax 作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5 μm的连续切片.Steedman's wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色.与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedman's wax 包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能.     

一种用于DAPI染色的方法Steedman＇s wax包埋切片法

以植物的胚珠和子房为实验材料,介绍一种用Steedrnan‘s wax包埋对组织切片中的细胞核进行DAPI染色的方法。Steedrnan‘s wax作为一种低熔点多酯蜡,具有与石蜡相似的性质,切片方法同常规石蜡切片,适合于切成厚度大于5μm的连续切片。Steedrnan‘s wax包埋的切片能成功地进行DAPI染色。与用压片法和Technovit 7100或GMA包埋切片法进行的DAPI染色相比,用Steedrnan‘s wax包埋切片法进行的DAPI染色具有廉价、操作简便、可进行连续切片、图象清晰等优点,特别在植物细胞程序化死亡(PCD)的研究中及细胞核DNA含量测定方面,有着较大的应用价值和潜能。     

品制备对超薄切片的影响

电镜超薄切片的质量与组织块的硬度,组织的固定,清洗、脱水、浸透、包埋、包埋块的修整形状,切片机、玻璃刀、架刀角度和收集槽液面等因素都有密切的关系,标准的超薄切片应是厚度适中、均匀、平整、无刀痕、无颤纹和皱折。要想获得理想的超薄切片,作者认为     

不同厚度细胞薄切片对 AFM 图像反差的影响

利用原子力显微镜（ AFM ）观察超薄切片的表面,探索表面形貌与切片厚度、朝向等因素的关系以及对图像反差的影响 . 选择三种不同类型的细胞,培养后按电镜超薄切片法固定、包埋并切片后,将不同厚度的切片区分上下表面转移到云母上, AFM 在空气中以接触模式进行观察 . 结果发现,切片表面细胞相对包埋介质的凸起与凹陷与切片本身的厚度密切相关,并随切片厚度的不同呈现有规律的变化 . 实验统计结果显示这种现象可能具有普遍性 .     

黄梁木维管组织细胞激光显微切割技术体系建立

黄梁木是华南地区重要的速生用材树种,其快速的次生生长主要取决于包括形成层细胞在内的维管组织细胞的发育进程。为了精准获取维管组织形成层细胞与高质量RNA,该研究以黄梁木幼苗为材料,通过石蜡切片与激光显微切割(LMD)结合的方法,成功获得形成层、木质部和韧皮部细胞。结果表明:优化石蜡切片流程,以卡诺/丙酮作为固定剂(丙酮浓度10%~50%),100%正丁醇作为脱水剂和透明剂,之后经过梯度渗蜡、包埋、切片、脱蜡后可获得形态完整的组织切片且保证了组织细胞RNA的完整性。调试LMD参数,放大倍数为10×~20×;激光能量为42~44;切割孔径为4~13;切割速度为16~25;最终获得的这3种细胞的RNA完整性(RIN)均大于5.0,即形成层细胞RIN=5.0,韧皮部细胞RIN=6.6和木质部细胞RIN=7.9,满足后续RNA-seq分析。该研究通过优化石蜡切片和LMD参数,成功建立了黄梁木幼苗茎段维管组织细胞的激光显微切割技术体系,为进一步揭示林木树种维管组织分裂与分化的调控机制奠定基础。     

保持培养细胞原位、原形的超薄切片制备法

本文介绍先用环氧树脂Epon812包埋剂制成丘状膜,再在膜上培养细胞,直接将膜与细胞一起包埋,制备超薄切片。此种方法不仅能克服以往培养细胞需要离心成团,容易造成细胞破碎、变形的缺点;还能避免琼脂预包埋法悬浮细胞造成的抗原封闭;并能得到为数较多的连续超薄切片。它操作简便,较好地保持了培养细胞生长的原来位置及原有形状,为培养细胞进行免疫电镜的操作和提高制备培养细胞超薄切片的数量和质量提供了一种有效的途径。     

植物样品制备的两种定向包埋方法

用作电镜观察的植物样品的制备,一般只能将植物样品平放在胶囊底部包埋。如果需要观察植物组织一定部位的细微结构,例如观察叶片或根的横断面的组织超微结构等,则一般包埋方法就不适用,即或在粘稠的环氧树脂中植物样品也是不易直立的,这只有采用定向包埋方法。     

FISH检测宫颈脱落细胞与宫颈组织中hTERC基因制片方法的研究

目的:探讨FISH实验中用直接涂片法、盐水制片法、TCT制片法、低渗滴片法制片法和宫颈切片组织取材方法对于FISH成功率的影响.方法:收集2008年3月至2009年3月青岛大学医学院附属医院妇科162例宫颈脱落细胞标本及2008年5月至2009年3月手术切除或活检的宫颈组织63例,用荧光原位杂交(FISH)方法检测hTERC基因.结果:直接涂片法、盐水制片法、生理盐水法、TCT制片法和石蜡包埋组织切片法hTERC基因杂交成功率分别为58.3%,65%,55%,87.1%,85.7%,TCT制片高于其它四组;低渗滴片法背景干净度、细胞形态、裸核数量满意度最高;TCT制片法细胞数量满意率最高;石蜡包埋组织切片法荧光信号满意率最高.结论:在检测hTERC基因的宫颈癌筛查中,TCT制片法明显优于其他方法,而在指导宫颈病变及宫颈癌的治疗中,石蜡包埋组织切片法的染色体破坏最小,实际意义更大.     

不同因素对包埋质量的影响

目的 改良包埋操作细节,以期提升包埋质量。方法 比较采用不同包埋模具温度、不同第一次注蜡量、冷台添加水与否、不同加盖包埋底盒方式、不同二次注蜡角度在组织包埋合格率、撬出蜡块甲级率、HE切片组织结构完整性、细胞显示效果、免疫组织化学染色效果的差异。结果 通过预热包埋模具至70℃、减少第一次注蜡量、在冷台上加入少量的水、待模具侧壁的石蜡稍凝固后再加盖包埋底盒、二次注蜡时将包埋模具连同包埋盒倾斜10°～25°等条件可显著提高包埋合格率、蜡块质量甲级率、切片组织结构完整性、细胞显示效果和免疫组化染色优良率。结论 通过在包埋过程中延缓或加速石蜡凝固,控制注蜡量、调整注蜡角度等可显著提升包埋质量。     

不同处理方式及试剂盒对石蜡包埋组织提取DNA影响

目的:比较石蜡包埋组织三种不同的前处理方式用不同试剂盒提取DNA效果,以期达到能根据各自实验室条件差异,选择合适的样本处理方式及相应的试剂盒,获得高质量DNA。方法:在提取DNA前,对石蜡块包埋的组织分别进行三种前处理,形成三种组织形式:切片机连续切片,手动刮取石蜡组织块后获得手刮片和切片后烤片制成的玻片,用Qiagen和Tiangen试剂盒提取DNA,并用琼脂糖电泳,PCR扩增和测序进行鉴定。结论:如果样本是玻片形式的石蜡包埋组织,可以选择改良过的Qiagen试剂盒提取DNA;样本如果是石蜡块包埋的组织,有切片机的,切片之后用Tiangen试剂盒提取DNA;而没有切片机的实验室可以选择用刀片刮取石蜡块组织,用Tiangen试剂盒提取DNA。     

微波快速石蜡切片法观察谷子幼嫩叶片组织技术的优化

C4植物发育的研究是近年植物学研究的一个热点,对于探明C4高光效机理及培育C4水稻至关重要。而C4幼嫩叶片的细胞形态学观察是研究C4发育的基本手段之一。谷子是研究C4光合发育的模式植物之一,且作为禾本科植物,谷子幼嫩叶片硅质含量高,组织硅质化,固定液透过表皮进入组织困难。同时幼嫩叶片细胞含水量高,如利用常规方法短时间内脱水剂不容易将细胞组织液彻底替换,这就给谷子幼叶发育的组织学观察带来一定的难度。微波是一种高频电磁波,可以使试剂液体与组织细胞间渗透和交换效率显著提高。本试验以谷子幼嫩叶片为材料,对以往的微波快速石蜡切片法进行优化,将微波快速石蜡切片法与梯度酒精脱水法相结合,并使用叔丁醇代替二甲苯作为脱水剂和透明剂,改变脱水时间,摸索出一套制备完整的谷子幼嫩叶片组织切片的快捷、有效的方法。