疫苗

910844 用甲基营养的多形汉森酵母合成和分泌乙型肝炎中表面抗原[英]/Shen,s.H.…// Gene.-1989,84(2).-303～309[译自DBA,1990,9(15),90-08731]应用甲基营养的多形汉森酵母(Hansenula polymorpa)作生产和分泌异源蛋白的寄主,克隆了乙肝病毒中表面抗原(preS2-HBsAg)基因,该基因在甲醇氧化酶基因的甲醇调节启动子控制下表达.     

用于异源基因表达的毕赤酵母启动子研究进展

甲醇营养型毕赤酵母是一个广泛使用的蛋白表达宿主系统,易于高密度发酵、具有真核细胞翻译后加工修饰特点,适于异源蛋白分泌表达。转录调控是控制蛋白高效表达的关键环节,启动子是其中重要的元件。毕赤酵母表达系统中应用最为广泛的是甲醇诱导型AOX1启动子和组成型的GAP启动子,已成功用于一些异源蛋白的表达。近年来,发现了其他一些可供利用的启动子,包括来自管家基因的启动子如TEF、PGK1,以及具有特殊调控机制的启动子如FLD、PHO89等。此外,通过对启动子进行序列改造,构建启动子文库,实现了对启动子的精细调控。不同的启动子具有各自独特的调控机制与特点,就毕赤酵母启动子在异源蛋白表达应用中的相关研究进展进行综述。     

疫苗

881180感染性重组病毒,含有所述猫白血病病毒疫苗及其生产方法〔专,英〕/Nunbe-rg,J .H.…1 European Patent Appl.EP 0216564.Pub.01 .04 .87.Appl.US.774040,filed 09.09.86〔译自CBA,1957, (6),2576〕 含有一个嵌合猫白血病病毒(FeLV)外壳基因的感染性重组病毒可用作猫白血病疫苗。用病毒DNA和一个插人性载体转染易感的哺乳动物细胞来制备病毒。该载体带有由在细胞内具活性的启动子、翻译起始密码子和为FeLV病毒外壳蛋白编码的一个DNA片段组成的嵌合基因。编码蛋白的DNA受控干启动子。用这种感染性重组病毒和一个衍生载体或…     

第13届国际生物奥林匹克竞赛(2002)实验试题答案

(续 2 0 0 3年第 38卷第 6期第 5 7页 )实验 动物系统学和形态学Q1.　 (5分 )A B C D E F G H I J0 1 0 1 0 2 0 4 0 1 0 1 0 1 0 1 0 5 0 3Q2　 (5分 )A B C D E F G H I J0 1 0 2 0 4 0 5 0 1 0 6 0 3 0 70 80 9Q3　 (10分 )A B C D E F G H I JK + + +L +M ++ +N +O +P +R ++S ++T ++ +++ +Q4 A　 (4分 ) 　□　□　　 　□　□Q4 B　 (1分 )　　□Q5　 (5分 )A B C D E F G H I J0 3 0 1 0 2 0 2 0 3 0 3 0 1 0 1 0 3 0 2Q6　 (10分 )　　 A.Gammaruspulex(钩虾 )　 B.Anopheles sp.(疟　蚊 )　 C.H irudo …     

猪瘟病毒E2蛋白A/D抗原区基因在酵母中的分泌表达与鉴定

基于猪瘟病毒主要保护性抗原E2囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位-B/C抗原区和A/D抗原区,设计一对特异性的引物扩增猪瘟病毒E2蛋白的A/D抗原区基因,并将PCR产物克隆入含有强启动子PAox1和α-MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZαC中,构建成重组质粒pPICZα-AD,酶切线性化后电穿孔导入巴斯德毕赤酵母X33菌中,经ZeocinTM筛选得到5株高拷贝转化子,甲醇诱导表达.SDS-PAGE和Westernblot试验表明酵母培养上清液中含有具有良好反应原性的E2蛋白,蛋白表达量达175.8μg/mL.N-糖基化分析显示该表达蛋白在分泌过程中发生糖基化.该研究为研制防治猪瘟的亚单位疫苗与诊断试剂盒奠定基础.     

疫苗

<正> 852831单克隆抗体识别的抗原决定簇定位方法:猫白血病病毒外壳蛋白上的病毒中和定簇的定位[英]/Nunberg,J.H.…/Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.-1984,81(12).-3675～3679[译自D B A,1984,3(19),     

组蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用检测

目的:构建组蛋白 H2A、H2B、H3、H4的酵母双杂交诱饵载体,检测其在酵母细胞中的表达和自激活活性,为应用酵母双杂交系统筛选与组蛋白相互作用的蛋白奠定基础.方法:扩增 H2A、H2B、H3、H4蛋白基编码区 cDNA序列,克隆至酵母表达载体 pGBK-T7中,再将其转化至酵母细胞 AH109中,提取酵母总蛋白,检测各种组蛋白的表达,并检测表达的组蛋白在酵母细胞中对报告基有无自激活作用.结果:将 H2A、H2B、H3、H4基的 cDNA 克隆至酵母表达载体 pGBK-T7中,其中组蛋白 H4得到正确表达,且对报告基 LacZ、HIS3、Ade 无激活作用.结论:可以利用酵母双杂交系统筛选与 H4相互作用的蛋白质.     

基因库构建

930474从一个六体肽裘位文库中得到的一组伴刀豆蛋白A结合肽[英]/Scott,J.K.…,Proc.Natl..Acad.Sci.U.S.A.-1992,89(12).一5398一~5402E译自DBA,1992.11(15),92-08994] 凝集素伴刀豆聋自一A(ConA)能与寡糖非还原端上的口一D一甘露吡喃糖苷(MeaMan)及口一D一甘露糖基结合。从一个建于fd噬菌体载体(分随基六肽)的表位文库中分离到能模拟Mea]Via.与ConA结合的配基肽。在亲和纯化的噬菌体中鉴定出一个同感序列,Co.A能与携有该序列的噬曹体结合。含有该序列的噬菌体与相近的D一甘露糖结合凝集素只能锻弱结合,表明ConA的结合是有高…     

c-myb基因启动子表观遗传修饰对该基因表达的影响

已有研究表明c-myb基因在白血病等癌症中发挥重要的作用,但是目前关于c-myb基因的调控机制尚不清楚。为了探究c-myb基因启动子区域表观修饰对该基因表达调控的作用,我们利用CRISPR-dCas9系统,在融合了p300和DNMT3A蛋白后,分别和靶向c-myb启动子的引导RNA (guide RNA, gRNA)共转染到小鼠急性髓系白血病M1细胞(mouse myeloid leukemia, M1)中,ChIP-qPCR结果显示dCas9-p300和dCas9-DNMT3A分别成功结合到c-myb基因启动子区域,并伴随有启动子区域组蛋白修饰H3K27乙酰化或DNA甲基化5-mC的显著增高。Western blotting及RT-qPCR结果表明d Cas9-p300使M1细胞中c-myb表达明显上调(p0.001),而d Cas9-DNMT3A使c-myb表达明显下调(p0.05)。进一步研究证明dCas9-p300可以对抗白细胞介素6 (interleukelin-6, IL-6)引起的c-myb基因表达下调。本研究结果证明c-myb基因启动子的表观遗传修饰可以影响该基因的表达,为研究白血病等癌症提供了新的治疗思路和方案。     

猪瘟病毒E2蛋白A／D抗原区基因在酵母中的分泌表达与鉴定

基于猪瘟病毒主要保护性抗原E2囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位-B／C抗原区和A／D抗原区,设计一对特异性的引物扩增猪瘟病毒E2蛋白的A／D抗原区基因,并将PCR产物克隆入含有强启动子PAOX1和α-MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZαC中,构建成重组质粒pPICZα-AD,酶切线性化后电穿孔导入巴斯德毕赤酵母X33菌中,经Zeocin^TM筛选得到5株高拷贝转化子,甲醇诱导表达。SDS-PAGE和Western blot试验表明酵母培养上清液中含有具有良好反应原性的E2蛋白,蛋白表达量达175．8μg／mL。N-糖基化分析显示该表达蛋白在分泌过程中发生糖基化。该研究为研制防治猪瘟的亚单位疫苗与诊断试剂盒奠定基础。     

动物细胞培养及单克隆抗体

.,J一,J沪.J”‘舌尹.刁7.’试J、~宁.护理J.合忠‘J产奋「下,924392用杆状病毒表达载体生产分离的异型户半乳箱普酶多肚仁英〕/Lieari,P.…/Biotechnol.B ioeng一1092,39(9)一932~944〔译自DBA,1992,11(11),92一06397〕 在草地夜蛾连续细胞系IPL一Sfg中表达首藉银纹夜蛾核多角体病毒(AcMNPV),生产分离的异型户半乳糖普酶蛋白。在pol了hedrin启动子调控下,重组AeMNPV编码 polyhedrin一BG的融合蛋白。该启动子由转移载体质粒pAo36。和设计的360-lac构建。病毒侵染细胞后培养96小时,培养物经BG免疫沉淀放射自显影显示,有几条比B…     

苏云金芽胞杆菌高效表达载体的构建

[目的]通过比较cry1A、cry3A、cry4A和cry8E四个基因的启动子转录活性,筛选出一个强启动子,利用强启动子构建一个苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)高效表达载体.[方法]利用启动子融合lacZ技术检测了4种启动子的转录活性.通过扫描电子显微镜观察晶体、SDS-PAGE、蛋白定量和生物活性测定等方法对新建高效表达载体进行功能验证.[结果]构建了Pcry1A、Pcry3A、Pcry4A和Pcry8E4个启动子融合报告基因lacZ的表达载体,经β-半乳糖苷酶活性分析得知,启动子活性从高到低依次为Pcry8E＞Pcry1A＞Pcry4A＞Pcry3A.选取cry8E启动子,以pHT315作为基础载体构建苏云金芽胞杆菌高效表达载体pHT315-8E21b,将cry1Ac基因连接到pHT315-8E21b和广泛应用的cry3A启动子指导的pSXY-422b上,分别转入无晶体突变株HD-73-,获得菌株HD-8E1Ac和HD-422-1Ac.扫描电子显微镜观察显示,HD-8E1Ac菌株可以形成菱形晶体,说明正确表达了cry1Ac基因.SDS-PAGE分析结合蛋白定量实验表明pHT315-8E21b表达效率高于pSXY-422b.对小菜蛾(Plutella xylostella)的生物活性测定表明HD-8E1Ac菌株对小菜蛾有生物活性,且菌株活性高于HD-422-1Ac.[结论]利用强启动子Pcry8E构建了一个能在Bt中高效表达的穿梭载体pHT315-8E21b,该载体可正确表达cry1Ac基因,其表达效率高于被广泛应用的pSXY422b.     

毕赤酵母中外源蛋白表达量的提升策略

利用异源重组表达系统表达外源蛋白是基因工程研究的重点。巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是一种甲基营养型酵母,由于其易于遗传操作、高水平分泌外源蛋白、翻译后修饰等特点,已成为工业应用中蛋白质生产的重要菌株,常被用于酶制剂的生产。然而,部分外源蛋白在毕赤酵母系统中的表达水平较低,仍有待提升的空间。因此,进一步探索提升毕赤酵母中外源蛋白表达量的原理和方法,将对降低毕赤酵母表达系统工业化生产成本,提高经济效益,具有重要的意义。本文主要从基因水平、转录水平、翻译水平、折叠分泌水平、抗逆水平、发酵工艺六个方面归纳总结了近年来毕赤酵母提高外源蛋白表达的优化策略的研究进展,旨在为提高外源蛋白在毕赤酵母表达系统中的表达水平提供有益参考。     

食品上的应用

880397辅助底物概念的理论基础及其在生物技术工艺中的实用结果〔德〕/Babel,W.了Aeta Bioteehnol一1986,6(4)一313一323〔译自CBA,1987,(4),1631) 辅助底物概念在改进单细胞蛋白产量和J倪物合成方面是有应用价值的。采用一种底物,它在培养混合物系统中仅起到能量供体的作用。该系统的碳转换效率可达到碳代谢所决定的_L限。(王家玉)880398含脂酵母连续培养生产脂肪过程的数学模拟〔英〕/Ykema,A.…了Antoni“van Leeuwenhoek一1986,52(6)一491一506[译自CBA,1987,(4),1632〕 提出了一个数学模型,该模型可以描述碳氮比对含脂酵母生产…     

解脂耶氏酵母表达系统研究进展

解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）是非常规酵母中具代表性的一种,它底物广泛,尤其能利用有机酸（柠檬酸、异柠檬酸）,蛋白类（蛋白酶、脂肪酸、酯酶、磷酸酶、α-甘露糖苷酶、RNase）。烷烃类廉价物质作为底物分泌大量的代谢产物,自上世纪40年代被发现以来,越来越受到研究者的重视,并于上世纪90年代被开发成为一种新的酵母表达系统,用于42种异源蛋白的高效表达。综述了解脂耶氏酵母表达系统及其特点,有利于研究者从转录和翻译的水平研究异源蛋白在此菌中的表达分泌路径以及寻找到调控型启动子。     

芽殖酵母和裂殖酵母中异染色质形成机制

芽殖酵母(Saccharomyces cerevisiae)和裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)是用来研究异染色质形成、细胞周期、DNA复制等重要细胞功能的理想单细胞真核生物.本文主要介绍这2种酵母中异染色质形成的机制.异染色质是一种抑制基因转录和DNA重组的特殊染色质结构.尽管在芽殖酵母和裂殖酵母中异染色质形成都需要组蛋白修饰,但异染色质建立的机制不同.在芽殖酵母中参与异染色质形成的主要蛋白是Sir1-4蛋白（其中Sir2为组蛋白H3去乙酰化酶）,而组蛋白H3赖氨酸9甲基化酶Clr4和异染色质蛋白Swi6在裂殖酵母异染色质形成中起关键的作用.在这两个酵母中,参与异染色质形成的组蛋白修饰蛋白由DNA结合蛋白招募到异染色质.此外,裂殖酵母也利用RNA干扰系统招募组蛋白修饰蛋白.     

苏云金芽胞杆菌Sigma H对芽胞形成的影响

【目的】检测苏云金芽胞杆菌HD73中的转录调控因子Sigma H(σ~H)对spo0A基因转录的调控作用;异源表达纯化Sigma H蛋白,验证其对spo0A基因启动子的直接结合;检测sigH基因的缺失对苏云金芽胞杆菌HD73芽胞形成和晶体蛋白产生的影响。【方法】通过测定spo0A基因启动子指导的β-半乳糖苷酶活性评价spo0A基因在苏云金芽胞杆菌HD73野生型和sigH缺失突变体中的转录水平;通过PCR扩增苏云金芽胞杆菌HD73的sigH基因并插入到表达载体pET21b上,将质粒转入到表达菌株BL21(DE3)中,得到重组菌株BL21 (pETsigH);利用镍柱亲和纯化和阴离子交换纯化得到纯化的Sigma H蛋白;通过凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证Sigma H蛋白与spo0A基因启动子的直接结合;通过显微镜观察、活芽胞计数的方法对突变株HDΔsigH进行表型特征分析。【结果】sigH缺失后,spo0A基因转录活性降低;在大肠杆菌中正确表达并纯化出大小约为28kDa的Sigma H-His蛋白;EMSA结果表明纯化后的Sigma H-His蛋白可与spo0A基因启动子结合;镜检和活芽胞计数结果表明突变株HDΔsigH无法产生芽胞和蛋白晶体。【结论】Sigma H蛋白通过与spo0A基因启动子结合直接调控spo0A基因的表达且sigH基因的缺失阻断了苏云金芽胞杆菌中芽胞和晶体蛋白的产生。     

乳酸克鲁维酵母表达外源蛋白研究进展

乳酸克鲁维酵母已成功地应用于多种异源蛋白的表达生产之中。与其他酵母相比，乳酸克鲁维酵母具有许多优点，如超强的分泌能力，良好的大规模发酵特性、食品安全的级别及整合表达能力等，其作为宿主系统表达药用蛋白也已显示出巨大的潜力。从不同的菌属、遗传工程和分子生物学技术（如启动子、表达载体）等方面简要综述了乳酸克鲁维酵母作为蛋白表达宿主系统的优势。     

农业其它

861653 酵母中自主复制的玉米染色体DNA顺序[会,英]/Berlani,R.E.…∥J.CellBiochem.-1985,suppl 9C.-251[译自DBA,1985,4(15),85-07591]用在酵母(Saccharomyces cerevisiae)     

基因工程

950714在Acetobacter methanoIicus B58中表达异源基因的广寄主范围质粒的构建[英]/FoelIner,C.G.…/Acta Biotechn01.1994,14(2).一141~151[译自DBA,1994,13(16),94—090093 在广寄主范围质粒RSFlolO复制子基础上构建了质粒,以此在嗜酸性甲基营养型A.raetkaaol-icus B58中有效表达异源基因。用启动子:探针载体质粒pRS201鉴别并分离出醋杆菌噬菌体AcmlDNA的含启动子序列。将此质粒与大肠杆菌启动子tac和pr相连,分别构成表达载体质粒pRS201tac和pRS201pr。将氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因插入到克隆的启动子下游之后,测定了大肠杆…