双歧杆菌对人大肠癌HT_(29)细胞谷胱甘肽巯基转移酶基因的诱导表达

应用北杂交技术研究双歧杆菌对大肠癌HT29细胞谷胱甘肽巯基转移酶基因的诱导表达发现:双歧杆菌及其发酵过滤液在作用HT29细胞2小时后,谷胱甘肽巯基转移酶基因的mRNA分别提高1.4倍和1.3倍,提示诱导谷胱甘肽巯基转移酶基因的高效表达,阻断外来致癌物的亲核攻击可能是双歧杆菌抗肿瘤的一个分子机制。     

双歧杆菌对实验性大肠癌凋亡促进基因表达的影响

目的：探讨青春型双歧杆菌体内诱导大肠癌裸鼠移植瘤细胞凋亡的具体途径。方法：以免疫组化法检测大肠癌移植瘤细胞凋亡促进基因bad和Caspase-3基因的蛋白表达率和阳性细胞密度。结果：双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤细胞凋亡促进基因bad和Caspase-3基因的蛋白表达率以及阳性细胞密度均显著于肿瘤对照组。结论：双歧杆菌可通过促进bad和Caspase-3基因的表达,最终诱导大肠癌的凋亡。     

Caspase信号通路在双歧杆菌脂磷壁酸诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的探讨Caspase信号通路在双歧杆菌脂磷壁酸（LTA）诱导结肠癌细胞凋亡中的作用。方法RT-PCR检测经双歧杆菌LTA处理后,结肠癌Lovo细胞中MyD88和FADD mRNA的表达变化;AnnexinV检测经Caspase通用抑制剂（Z-Val-Ala-Asp-FMK）预先处理后,双歧杆菌LTA诱导结肠癌Lovo细胞凋亡率的变化;荧光法检测经双歧杆菌LTA处理后,Lovo细胞中Caspase-8活性的变化。结果经双歧杆菌LTA处理后,Lovo细胞中MyD88的mRNA表达明显升高（P〈0．05）,而FADD信号分子的mRNA表达无明显变化;双歧杆菌LTA能够增强Lovo细胞中Caspase-8的活性（P〈0．05）,且其诱导Lovo细胞凋亡的作用能够被Caspase抑制剂所抑制（P〈0．05）。结论MyD88信号分子在双歧杆菌LTA诱导Lovo细胞凋亡中可能起着承接上游分子TLRs与下游信号分子FADD的作用;而Caspase信号通路可能是双歧杆菌LTA诱导结肠癌Lovo细胞凋亡的主要信号传导途径。     

植物谷胱甘肽转移酶

植物谷胱甘肽转移酶廖祥儒,万怡震,朱新产（西北农业大学园艺系,陕西杨陵７１２１００）关键词谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓ－ｆｅｒａｓｅ,ＧＳＴ,ＥＣ２．５．１．１８）专一催化谷胱甘肽（ＧＳＨ）巯基与其他化合物的亲电...     

人T细胞白血病病霉Ⅰ型env基因的克隆与表达

本文通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）,从整合有人Ｔ细胞白血病病毒Ⅰ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）的ＭＴ－２细胞株中,扩增出ＨＴＬＶ－Ｉ外膜蛋白（ｅｎｖ）的全基因（１．４５ｋｂ）,并成功地克隆入ｐＵＣ１９载体,构建成ｅｎｖ基因克隆ｅｎｖ／ｐＵＣ１９．利用原核高效表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ,在大肠杆菌中有效地表达了与谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）融合的ｅｎｖ羧基末端抗原的重组蛋白,融合基因的转录由ｔａｃ启动子调控。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明,有一约５２ｋＤ的目的蛋白带,表达量占菌体总蛋白的１０％;ＷｅｓｔｅｒＮｂｌｏｔｔ及ＥＬＩＳＡ结果显示,表达产物能与ＨＴＬＶ－Ｉ多抗血清结合。本研究为研制ＨＴＬＶ－Ｉ的诊断试剂及进一步了解ｅｎｖ的免疫学和生物学性质打下了基础。     

Toll样受体在双歧杆菌脂磷壁酸诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的探讨双歧杆菌脂磷壁酸（LTA）对Toll样受体（TLRs）表达的影响及其与诱导结肠癌细胞凋亡之间的关系。方法用AnnexinV检测在双歧杆菌LTA处理前后结肠癌Lovo细胞凋亡的变化;流式细胞术检测Lovo细胞表面TLRs的表达,并用相应的TLRs封闭抗体作用后,AnnexinV检测经双歧杆菌LTA诱导的Lovo细胞凋亡的变化。结果经双歧杆菌LTA处理后,结肠癌Lovo细胞发生了明显的凋亡,并有一定的时间和剂量依赖关系;结肠癌Lovo细胞有TLR受体的基础表达,经双歧杆菌LTA处理后,TLR2和TLR4在Lovo细胞上的表达增加,其中尤以TLR2增加更为明显;用相应的TLRs抗体封闭作用后,双歧杆菌LTA诱导Lovo细胞凋亡的能力下降。结论双歧杆菌LTA能诱导肿瘤细胞凋亡,并且TLRs特别是TLR2在LTA诱导肿瘤细胞凋亡中可能发挥着主要作用,TLR4可能仅起着协同作用。     

水稻中一个谷胱甘肽转移酶基因的克隆、表达和酶活性分析

OsGSTL1是位于水稻3号染色体上的一个λ类谷胱甘肽转移酶基因,由8个内含子和9个外显子组成,编码一个由243个氨基酸组成的多肽链。将OsGSTL1克隆到酵母表达载体pYTV上,转化大肠杆菌,然后再转化酵母菌PEP4。Western印迹分析表明外源OsGSTL1基因在转基因酵母中表达,分析半乳糖诱导表达的酵母粗提液的谷胱甘肽转移酶活性表明:转基因酵母的谷胱甘肽转移酶较非转基因酵母和未诱导的酵母高,说明OsGSTL1在转基因酵母中受半乳糖的诱导表达,具有谷胱甘肽转移酶活性。     

长双歧杆菌分泌型表达载体的构建及Tum-5基因的表达

摘要：目的 构建能在双歧杆菌内稳定存在并高效分泌表达外源基因的长双歧杆菌质粒表达载体。方法 以质粒pBAD/glll为基础,以双歧杆菌内源性阿拉伯糖苷酶的分泌性信号肽取代质粒原有的分泌性信号肽,并将双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因克隆入载体中,构建表达载体pBBADs。将人Tum-5基因克隆入载体中,构建质粒pBBADs-Tum-5,电转化长双歧杆菌NCC2705,L-阿拉伯糖诱导表达后,Western Blot鉴定基因表达。结果 成功的构建了长双歧杆菌分泌型质粒表达载体,Tum-5基因在双歧杆菌内可以表达。结论 构建的表达载体为双歧杆菌用于肿瘤靶向基因治疗奠定了基础。     

大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体的构建及内皮抑素基因的表达

目的:构建大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭表达载体,并通过此载体使人内皮抑素基因在大肠杆菌和长双歧杆菌中得到表达。方法:以质粒pDG7、pBCSK( )、pET-9C为基础,构建大肠杆菌-长双歧杆菌穿梭表达载体pET-1128,并将人内皮抑素基因插入到新构建的表达载体中,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和长双歧杆菌NQ-1501。诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和WesternBlot鉴定。结果:成功构建了大肠杆菌-双歧杆菌穿梭载体,人内皮抑素基因在大肠杆菌和长双歧杆菌中均可表达。结论:构建的穿梭载体为今后用双歧杆菌作为生理菌载体进行肿瘤的基因治疗奠定了基础。     

大肠埃希菌—双歧杆菌穿梭表达载体的构建及白介素-10基因的表达

目的构建能够在大肠埃希菌和双歧杆菌中穿梭表达目的基因的载体,并用此载体在大肠埃希菌和双歧杆菌中表达人白介素-10基因（hIL-10）的蛋白产物;为hIL-10基因重组双歧杆菌治疗炎症性肠病做前期准备。方法以质粒pDG7为模板扩增pMB1片段,构建表达质粒pET28B1。用PCR法扩增hIL-10基因,将此目的基因以及pET28B1经酶切后用连接酶连接,形成重组质粒pET28B1-hIL10。pET28B1-IL10转染大肠埃希菌BL21和长双歧杆菌。最后用Western blot检测hIL-10基因在大肠埃希菌和长双歧杆菌中的表达情况。结果pET28B1-hIL10阳性克隆扩增后提取质粒并进行基因测序,结果显示插入片段为hIL-10,序列正确且无突变。hIL-10基因在大肠埃希菌、长双歧杆菌中的诱导表达产物通过Western blot检测验证为IL-10蛋白,显示该hIL-10表达载体在大肠埃希菌阳性克隆中经诱导可高量表达,在长双歧杆菌体中有少量表达。结论成功构建质粒pET28B1,该质粒能够在大肠埃希菌和双歧杆菌中穿梭表达目的基因hIL-10。