几种诱导黑麦草Loliump erenneL.内生真菌产孢的方法*

从黑麦草Lolium perenne5个栽培品种中分离、纯化得到6株形态稳定的内生真菌,它们在常规培养条件下均不产生分生孢子。通过在PDA和MEA培养基上进行预培养、扫刷营养体、近紫外光照射以及在菌丝体上放置宿主植物等诱导方法,使其中5株真菌不同程度产生了分生孢子,通过分生孢子的形态成功鉴定了黑麦草内生真菌。实验证明通过诱导内生真菌产孢的方法并借助形态学依据来鉴定无性的内生真菌是可行的。     

冬青卫矛上的叶点霉属新种

报道了分离自冬青卫矛植物叶片上的一株内生真菌。在培养基上产生分生孢子器,分生孢子具有一明显的附属物,根据形态特征鉴定为新种,命名为冬青卫矛叶点霉Phyllosticta euonymi-japonici。模式标本(IBE 0000989)保存于大连民族学院生物资源与环境研究所标本室。     

从南方山荷叶分离出一株产鬼臼毒素类似物的内生真菌

从南方山荷叶 (Diphylleiasinensis)的根、根状茎及叶柄部位共分离出 5 4株内生真菌。通过薄层层析(TLC)对 5 4株内生真菌的液体发酵培养物进行了初步分析 ,再采用高效液相色谱 (HPLC)做进一步检测 ,得到 1株产鬼臼毒素类似物的内生真菌 (SJ2 1 ) ,经鉴定为纠错青霉 (Penicilliumimplicatum)。     

产黄酮番木瓜内生真菌的筛选和鉴定

为开发植物内生真菌这一微生物资源,采用组织分离法从番木瓜植株的叶片、果实和茎中分离内生真菌。通过黄酮类化合物显色反应、薄层层析法(TLC)、紫外光谱法(UV),对番木瓜内生真菌的次生代谢产物进行初步分析,筛选出1株产黄酮类物质的内生真菌菌株,并利用分生孢子形态特征和真菌内转录间隔区序列(Internal transcribed spacer,ITS)对该菌株进行分析鉴定。结果表明,从番木瓜果实中分离获得编号为G41的内生真菌菌株可归类为青霉属橘青霉(Penicillium citrinum)。研究证实番木瓜果实中存在可产黄酮类物质的内生真菌菌株,具有进一步开发利用的潜在价值。     

小花棘豆(Oxytropis glabra DC.)内生真菌的培养与鉴定

小花棘豆(Oxytropis glabra DC.)是内蒙古草原上的重要毒草,实验结合微生物学和分子生物学手段进行了其内生真菌研究.结果表明:体外培养的小花棘豆内生真菌生长缓慢,呈圆形、隆起、边缘整齐、辐射状生长的白色菌落,后菌体分泌黑褐色的色素物质,分生孢子近圆柱形,有粗且比孢子壁厚的暗色横隔膜,隔膜数1～5个.10个菌株的5.8S rDNA/ITS序列与内生真菌Embellisia sp.L12株的序列高度相似.推测该内生真菌属于Embellisia.     

五味子根内生真菌的分离及其抑菌活性的研究

采用组织块分离方法对五味子根内生真菌进行分离鉴定,并以人参疫病病菌[Phytophthora cactorum(Leb.et Coh.)Schroet.]、人参黑斑病病菌(Alternaria panax Whetz.)为供试病原菌对分离的内生真菌进行了抑菌活性筛选。试验共分离得到74株内生真菌,根据形态特征鉴定出33株,分别隶属于半知菌亚门丛梗孢科的轮枝孢属(Verticillium)、柱隔孢属(Ramularia)和瘤座孢科的镰刀菌属(Fusarium)。通过抑菌试验筛选出5个内生真菌有抑制作用,其中3个内生真菌的发酵产物、乙醇提取液对2种病原菌均有一定的抑菌活性。     

中国树花可培养内生真菌分离、鉴定及系统发育分析

[目的]了解中国树花内生真菌的多样性及其系统发育关系。[方法]通过常规组织分离法,采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)分离培养中国树花内生真菌,对内生真菌的菌落、菌丝和孢子进行观察并结合r DNA-ITS序列的PCR扩增测序,对获得的ITS序列通过Gen Bank数据库搜索同源序列并进行分析确定其分类地位并构建系统发育树。[结果]从中国树花中分离得到可培养内生真菌51株,分属4纲、5目、7科、12属,其中青霉属(Penicillium sp.)和曲霉属(Aspergillus sp.)总相对分离率分别为47%、18%,为中国树花内生真菌优势属。[结论]首次对中国树花进行内生真菌的分离,并确定其分类地位,对分离得到的51株内生真菌进行合并相同菌落形态和显微结构,共获得18株内生真菌,通过系统发育分析发现这18株聚为5大类。     

产黄芩苷内生真菌的筛选与鉴定

从药用植物黄芩根、茎、叶和花中分离得到17株内生真菌,其发酵液对10种指示菌进行抑菌活性测定,并通过薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对所分离到的内生真菌代谢产物进行分析。结果显示,所分离到的内生真菌中12株至少对一种指示菌有抑菌活性,其中3株(G2、J4和J5)具有较广的抑菌作用。从黄芩茎和花中分离得到的2株内生真菌J1、H3可以在人工培养基中产生黄芩活性成分——黄芩苷,结合菌落形态特征、显微观察及ITS序列分析,初步鉴定这2株菌株均属于青霉菌属。     

胡蔓藤内生真菌分离鉴定及抗菌活性研究

胡蔓藤是著名的药用剧毒植物,对于胡蔓藤内生真菌的系统研究尚属空白.因此,致力于开发拓宽胡蔓藤内生真菌资源,寻找能产生抗菌物质的菌株.经菌落形态和显微形态去重后进行ITS序列分子鉴定.从胡蔓藤根、茎、叶和花中分离纯化得到内生真菌60株,通过形态及分子排重,最后鉴定出17个种,来自于7目、7科、9属,其中链格孢属和节菱孢属...     

一株具有脱胶功能大麻内生真菌的分离和鉴定

采用组织块法对大麻(Cannabis sativa)根、茎、叶等组织中的内生真菌进行分离,利用平板透明圈法筛选具有脱胶功能的菌株,对获得的脱胶菌菌株进行形态学鉴定和分子生物学鉴定。结果表明:(1)从大麻根、茎、叶的组织部位共分离得到内生真菌16株,茎部分离到9株真菌,叶部5株,根部2株。(2)编号为DM6的内生真菌具有较强的果胶分解能力,其透明圈直径为2.49cm。(3)形态学鉴定发现,内生真菌DM6不能产生孢子,菌丝较为粗壮、分支较少、有明显的隔;分子学鉴定表明,内生真菌DM6与Phoma aliena(KC311486)序列的相似性最高,为99%,并且在系统发育树上位于同一分支上。因而内生真菌DM6可以鉴定为茎点霉属一种(Phomasp.)。     

桃树根部内生真菌ZJ-4的分离鉴定及其对桃褐腐病的抑制效果

自桃树根部组织中分离能够防治桃褐腐病害的内生拮抗真菌,并从细胞学水平对其抑制机理进行了初步的探究。采用两点对峙法筛选抑制桃褐腐病菌Monilinia fructicola的内生拮抗真菌,通过菌落形态学特点观察及ITS基因测序分析,初步鉴定内生拮抗真菌的系统发育学地位;采用果实离体实验检测内生拮抗真菌的抗菌效果;使用电子显微镜观察被内生拮抗真菌抑制的桃褐腐病菌丝、孢子的形态以及细胞结构的变化。分离得到的内生真菌ZJ-4对桃褐腐病防效高且稳定,初步鉴定为篮状菌属Talaromyces;果实离体试验表明,内生真菌ZJ-4明显降低了桃褐腐病的发病率;通过电子显微镜观察到被内生真菌ZJ-4抑制的桃褐腐病菌丝及孢子表面粗糙凹陷,畸形现象严重,胞质溶胶收缩凝聚,细胞内部出现大量的空腔。本研究筛选的ZJ-4对桃褐腐病原菌的生长有明显的抑制作用,为开发应用该菌株提供参考。     

一株产黄酮类物质内生真菌的初步研究

从银杏(Ginkgo biloba L.)的不同组织部位共分离出45株内生真菌。应用显色反应、聚酰胺薄膜层析对45株内生真菌的发酵提取物进行了初步分析,再采用高效液相色谱(HPLC)做进一步检测,得到1株产黄酮类物质的内生真菌(GL-2),经鉴定为明孢多节孢Nodulisporium hyalosporum。     

两种八角莲内生真菌的生物活性研究

测定云南八角莲Dysosma aurantiocaulis和川八角莲Dysosma veitchii内生真菌的生物活性,为进一步从内生真菌中寻找活性成分提供指导,也为认识内生真菌相互作用提供有益的参考。从两种八角莲中分离出内生真菌187株,用滤纸片法测抗菌活性,用卤虫模型测抗卤虫活性得知大部分菌株发酵液都有活性,高活性菌株主要集中在镰孢霉属Fusarium、青霉属Penicillium、木霉属Trichoderma、丛梗孢属Monilia、毛壳菌属Chaetomium、无孢类群Mycellia sterilia、小齿梗霉属Rhinotrichum、无梗孢属Trichocladium和胶帚霉属Gliocladium。云南八角莲和川八角莲内生真菌是活性成分筛选的重要来源,并且通过活性分析发现:发酵液的活性强于菌丝体;云南八角莲的抗细菌活性菌株多于川八角莲。     

云南八角莲内生真菌分离、鉴定的初步探索

通过对云南八角莲(D.aurantiocaulis)内生真菌的分离、鉴定,获得87株内生真菌,并对87株进行分离、鉴定发现内生真菌在宿主植物中具有明显的多样性,无孢类群(22株)是优势菌,其次为镰孢菌属(10株)毛壳菌属(10株)、青霉属(9株)、小齿梗霉属(7株)、丛梗孢属(4株),首次报道云南八角莲内生真菌的类群和区系特点.     

云南红豆杉(Taxus Yunnanensis)皮下真菌类群初步研究

分离纯化与云南红豆杉（Taxus Yunnanensis)内共生的皮下真菌,获得了52株内生真菌,对52株菌进行了分类研究。结果是：无孢类各属是优势菌群（共29株）,其次是木霉属（5株）和茎点霉属（4株）,首次报道了红豆杉属植物皮下真菌的类群和区系特点。     

飞虱虫疠霉液培菌丝的凝胶化及其杀蚜活性*

用丙烯酰胺淀粉凝胶包埋飞虱虫疠霉(Pandora delphacis)液培菌丝,制成含营养和不含营养的虫霉凝胶,并测试其产孢能力及对桃蚜(Myzus persicae)的侵染力。经持续9 d产孢观察,相同菌丝量条件下,含营养的虫霉凝胶的累计产孢量(1910.9 个/mm2）为不含营养的虫霉凝胶的3.14倍（608.5个/mm2）和对照（纯液培菌丝）的4.69倍（387.5个/mm2）。用虫霉凝胶的“孢子浴”接种桃蚜居群（成蚜与不同龄期若蚜的混合）,在2.23个/mm2的剂量下,接种后第7 d的死亡率达82.3%。结果表明,丙烯酰胺淀粉凝胶作为载体材料,与飞虱虫疠霉的基本生物学特性相容,对虫霉的剂型化具有重要意义     

黄栌根内生真菌分离鉴定及拮抗真菌筛选

采用常规分离法从不同地区健康黄栌根系中共分离得到33株内生真菌,其优势类群主要包括无孢菌群、腐质霉属、青霉属等,而且不同地区黄栌的根系内生真菌种类和数量有一定差异。内生真菌对黄栌枯萎病病原——大丽轮枝孢的拮抗试验结果表明:团炭角菌、黑乌霉属、假丝酵母属的菌株抑制作用较强,其它内生真菌菌株对大丽轮枝孢均有不同程度的抑制作用。     

中国种子植物内生真菌资源及菌植协同进化

综述了中国种子植物内生真菌资源研究概况,比较了裸子植物和被子植物内生真菌种类,它们都具有肉座菌目(Hypocreales),粪壳菌目(Sordariales),散囊菌目(Eurotiales),毛霉目(Mucorales)及不产孢类(Myceliasterilia)内生真菌。裸子植物内生真菌涉及52个属,既包括高等的子囊菌和担子菌,也包括低等的卵菌(Oomycetes)和接合菌(Zygomycetes)类。被子植物涉及60个属,主要为高等的子囊菌(Ascomycetes)和担子菌(Basidiomycetes),低等的卵菌和接合菌报道很少。双子叶植物涉及40个属,单子叶植物内生真菌涉及30个属,两类被子植物所报道的内生真菌只有11个属相同。裸子植物与双子叶植物内生真菌相似程度较高,都具有炭角菌目(Xylariales)、格孢腔菌目(Pleosporales)、柔膜菌目(Helotiales)和白粉菌目(Erysiphales),刺盘孢菌属(Colletotrichum)、拟茎点霉属(Phomopsis)、枝孢霉属(Cladosporium)、地霉属(Geotrichum)等内真菌,共20个属相同。各类种子植物具有自己独特的一些内生真菌。还对植物与其内生真菌的协同进化关系进行了分析。     

ENHANCEMENT OF RUTIN PRODUCTION IN Fagopyrum tataricum HAIRY ROOT CULTURES WITH ITS ENDOPHYTIC FUNGAL ELICITORS

Tartary buckwheat (Fagopyrum tataricum) is a potentially important source of rutin, a natural bioactive flavonoid with antihyperglycemic, antioxidative, antihypertensive, and anti-inflammatory properties. This study examines the effects of endophytic fungi on rutin production in the hairy root cultures of F. tataricum. Without obvious changes in the appearance of the hairy roots, the exogenous fungal mycelia elicitors efficiently stimulated the hairy root growth and rutin biosynthesis, and the stimulation effect was mainly dependent on the mycelia elicitor species, as well as its treatment dose. Two endophytic fungal isolates Fat9 (Fusarium oxysporum) and Fat15 (Alternaria sp.) were screened as promising candidates for promoting F. tataricum hairy root growth and rutin production. With application of polysaccharide (PS) of endophyte Fat9 (200 mg/L), and PS of endophyte Fat15 (100 mg/L) to the hairy root cultures on day 25, the rutin yield was increased to 45.9 mg/L and 47.2 mg/L, respectively. That was about 3.1- to 3.2-fold in comparison with the control level of 14.6 mg/L. Moreover, the present study revealed that the accumulation of rutin resulted from the stimulation of the phenylpropanoid pathway by mycelia PS treatments. This may be an efficient strategy for enhancing rutin production in F. tataricum hairy root culture provided with its endophytic mycelia elicitors.     

Endophytic fungi of teak leaves Tectona grandis L. and rain tree leaves Samanea saman Merr.

Summary In order to study the foliar endophytes from teak (Tectona grandis L.) and rain tree (Samanea saman Merr.) growing in the campus of Chulalongkorn University, healthy leaves were collected at two-monthly intervals during January to December. The number of genera and species, together with their colonization frequency (CF%) in mature teak and rain tree leaves were greater than those in the young leaves. More endophytic isolates in the leaves of both trees were recovered during the rainy season. The fungal genera found in both young and mature teak leaves were Alternaria, Colletotrichum, Nigrospora, Phomopsis and mycelia sterilia. Phomopsis was the dominant genus in both young (newly emerged) and mature leaves. Fusarium, Penicillium, Schizophyllum commune and members of the Xylariaceae were found only in mature leaves. For the rain tree leaves, species of Phomopsis and mycelia sterilia were found in both young newly emerged and mature leaves. Colletotrichum and Penicillium were found only in mature leaves, whereas Nigrospora was found only in young newly emerged leaves. In this study, Phomopsis was the dominant genus in the leaves of both tree species. A total of 37 isolates of endophytic fungi isolated from teak and rain tree leaves were tested for the production of antimicrobial activities. Out of these, 18 isolates could produce inhibitory substances effective against Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus and Escherichia coli and 3 isolates inhibited growth of Candida albicans in vitro.