儿童急性淋巴细胞白血病特异性标记物的精准检测方法研究

目的：T细胞和免疫球蛋白重链基因重排是微小残留病灶水平的特异性标记物,而微小残留病灶的水平与儿童急性淋巴细胞白血病的复发强烈相关。应用传统的聚合酶链式反应方法来监测IgH／TCR基因重排不仅耗时、耗人力,而且敏感度较低。本研究旨在探索一种更为高效和敏感与实用的监测IgH／TCR基因重排的精准检测方法。方法：应用多重PCR技术检测26个患有急性淋巴细胞白血病的儿童的外周血样品中的标记物,这些儿童是在中国哈尔滨市最近两年内被诊断的患者。分别应用基因扫描和毛细血管电泳方法检测IgH（FRI,FRII,FRⅢ）／TCR（TCRB,TCRγ）基因重排和分析PCR产物的片段。结果：IgH／TCR基因重排和对IgH基因重排的阳性率分别为92．3％和75％,在26个病例中,4个复发病人的IgH的三个片段（FRI,FRII,FRⅢ）基因重排显示阳性。进一步分析显示复发与ign基因重排呈线性相关。结论：实验与临床应用表明,基因扫描这种方法对于IgH／TCR基因重排的检测是可靠的、实用的,因而可用于儿童急性淋巴细胞白血病的诊断和随访。     

N-甲基亚硝基脲诱导小鼠胸腺淋巴瘤TCR基因重排分析

目的探讨N-甲基亚硝基脲（MNU）诱导的小鼠胸腺淋巴瘤的单克隆起源。方法采用巢式PCR方法,对8例MNU诱导的胸腺淋巴瘤组织进行T细胞受体β链（TCRβ）和γ链（TCRγ）克隆性基因重排分析,并对TCRγ基因重排的PCR产物直接测序。结果 8例胸腺淋巴瘤检测TCRβ和TCRγ均呈克隆性基因重排。DNA序列测定证实TCRγ基因PCR扩增产物为基因重排产物。结论巢式PCR TCR基因重排检测及DNA序列分析证实,MNU诱导的小鼠胸腺淋巴瘤是来源于T细胞的肿瘤。     

Daxx在急性白血病的表达及意义

目的研究Daxx在急性白血病(AL)中的表达及其与AL的分型、临床特征、疗效及预后的关系.方法应用免疫组织化学方法检测88例初治AL骨髓细胞Daxx蛋白的表达情况,分析其与FAB分型、临床特征、疗效及预后的关系.结果急性髓细胞白血病(AML)骨髓细胞中Daxx的表达显著高于正常对照组(P<0.05)与急性淋巴细胞白血病(ALL)组(P<0.05).在AML亚型中,Daxx在M3中的表达显著高于M1,M2,M3,M4和M5.采用逐步回归法分析,校正其它参数,Daxx的表达与初诊时的白细胞数及骨髓原始细胞数目呈正相关,与疗效呈负相关. 结论 Daxx在急性髓细胞白血病中广泛表达,其表达的紊乱可能在AML的发病中起作用,还与AML的某些临床特征、疗效及预后密切相关.     

CD47 在急性白血病干细胞中的表达及其对临床疗效及预后的影响

目的:探讨CD47在急性白血病患者骨髓白血病细胞的表达及其临床意义。方法:选择2013年5月-2015年5月在我院确诊的急性白血病患者101例作为研究对象,其中急性淋巴细胞白血病50例(ALL组),急性髓系白血病51例(AML组)。另选取同期在我院接受体检的健康志愿者39例作为对照组。采用流式细胞仪检测白血病细胞表面CD47的表达情况,并分析CD47表达与急性白血病患者临床疗效及复发情况的关系。结果:急性白血病患者白血病细胞CD47的阳性表达率明显高于健康对照组,差异具有统计学意义(P0.05);而ALL组与AML组患者白血病细胞CD47的阳性表达率比较差异无统计学意义(P0.05);CD47阴性表达的急性白血病患者CR率显著高于阳性表达者,差异具有统计学意义(P0.05);ALL组和AML组CD47阴性表达患者CR率显著高于CD47阳性表达患者,差异具有统计学意义(P0.05),但两组之间比较,差异无统计学意义(P0.05);CD47阳性表达的急性白血病患者复发率显著高于阴性表达患者,差异具有统计学意义(P0.05);ALL组和AML组CD47表达阳性患者复发率明显高于阴性患者,差异具有统计学意义(P0.05),但两组之间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:急性白血病患者白血病细胞表面CD47的表达异常升高,且与白血病患者的疗效和预后有关,CD47可能作为一种急性白血病的诊断及疗效和预后的辅助评估指标。     

正常人间围血及骨髓单个核白细胞和白血病肿瘤细胞的免疫分型

本文用10种单克隆抗体(McAb)分析了正常人周围血及有髓单个核细胞的免疫表型,以及急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性髓细胞白血病(AML)的免疫表型,并以免疫双酶标记法观察了非T-ALL肿瘤细胞的肿瘤相关核仁抗原(HMNA)和细胞表面抗原的表达。结果:不同年龄正常群体周围血CD_4~+细胞数及CD_4/CD_8比值有差异;约3％的正常骨髓单个核细胞CD_(10)~+(ALL的抗原)。应用单克隆抗体对白血病的免疫分型,不仅能确诊肿瘤的谱系,还能了解细胞分化阶段。本文讨论了AML和ALL免疫分型中的鉴别性McAb。HMNA为多种肿瘤细胞的标记,本文观察到幼稚B细胞白血病及毛细胞白血病的肿瘤细胞中HMNA亦为阳性。     

慢性髓细胞白血病急变期MICM 分型回顾性分析

目的:探讨慢性髓细胞白血病急变期(CML-BC)患者的细胞形态学(M)、免疫学(I)、细胞遗传学(C)和分子生物学(M)的特征及应用价值。方法:对38例CML-BC患者的MICM分型进行回顾性分析。结果:以FAB分型为基础的形态学确诊率达94.7%;免疫分型结果为:38例CML-BC中CML-AML占71.0%,其中37.0%伴淋系表达;CML-ALL占23.7%,均为B细胞性,其中66.67%伴髓系表达;CML-MAL(混合性白血病)占5.3%,均为B系和髓系混合表达;CD34+26例(68.4%),CD7+10例(26.3%),均与CD34共表达。细胞遗传学结果显示:CML特征性Ph染色体检出率为94.3%(36/38),附加异常染色体检出率为60.5%(23/38),发生频率较高的类型是+Ph、+8和i(17q);FISH检测BCR/ABL融合基因阳性率为100%,der(9)缺失占14.7%。RT-PCR检测20例患者BCR/ABL融合基因均为阳性,其中b2a2型(12/20),b3a2型(8/20),1例(1/20),b2a2和b3a2双阳性(1/20)。结论:CML-BC是造血干细胞疾病,原始细胞分化阻滞在早期阶段,预后差。MICM分型对CML-BC的诊断、治疗和预后判断均有重要价值。     

核型分析与FISH技术诊断成人B细胞急性淋巴细胞白血病等臂双着丝粒费城染色体

目的提高对携带复杂费城染色体(Philadelphia chromosome,Ph)的急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的鉴别诊断和治疗的认识。方法用染色体核型分析技术对1例成人B细胞ALL(B-ALL)患者骨髓细胞做细胞遗传学检查;核型异常细胞用荧光原位杂交(FISH)进行验证。结果首次发现该B-ALL患者异常细胞系携带等臂双着丝粒Ph,并呈现克隆演化趋势;干系克隆细胞携带典型的Ph,旁系克隆细胞的Ph发生多种演化;FISH检测显示BCR/ABL1融合基因的拷贝数逐步增加。结论成人B-ALL中Ph经复制重排形成等臂衍生Ph非常罕见;这些重排使BCR/ABL1拷贝数增加,可能是导致白血病细胞快速增殖及耐药的机制。     

小鼠急性髓系白血病模型的构建

MLL基因的异常重排会引发急性淋巴系(ALL)和急性髓系白血病(AML)。该文详细阐述了利用逆转录病毒载体MLL-AF9构建小鼠AML模型的方法。该研究比较了免疫磁珠法与5-氟尿嘧啶(5-FU)方法富集骨髓细胞的效率,以及不同时间点收获的病毒对骨髓Lin-细胞感染效率的影响。通过流式检测发现, 5-氟尿嘧啶富集的骨髓Lin–细能够被48 h收获的病毒高效感染。受体鼠在移植了MLL-AF9感染的骨髓Lin–细胞60天后,外周血、骨髓、脾脏组织中均有大量的白血病细胞浸润, RT-qPCR也验证了白血病靶基因的表达上调,表明小鼠AML模型的成功构建。这项研究为从事白血病研究的科研人员提供了一种有效的小鼠急性髓系白血病模型,为研究白血病发病机理与研发白血病治疗药物提供有用的工具。     

Nestin基因在髓系白血病的表达及意义

Nestin蛋白是一种神经干细胞标志物,参与组织修复,并且在一些肿瘤细胞中表达。最近研究报道称nestin可能参与肿瘤细胞恶性增殖及细胞侵袭。在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoid leukemia,ALL)小鼠模型中,白血病增殖细胞(leukemia-propagating cells,LPCs)可形成一个抗药性niche,其中nestin阳性细胞参与该niche形成。为探索nestin基因在白血病患者的临床表达情况,通过RT-PCR和Western-blot实验方法 ,检测了50位髓系白血病患者的nestin基因的临床表达情况。结果发现,在50位髓系白血病患者(38位AML,12位CML)中,42位患者表达nestin基因mRNA,6位患者表达nestin蛋白,并且nestin基因表达水平和患者血红蛋白、血小板、细胞因子和T淋巴细胞数并不存在相关性,但是高白细胞白血病患者表现出nestin基因mRNA水平高表达。虽然nestin基因和患者完全缓解率(complete remission,CR)并不存在联系,但是nestin基因在髓系白血病异常表达,说明其可能作为一种诊断AML或CML的生物标记物。     

血清IFN-γ、ESR以及sIL-2R在急性淋巴细胞白血病患儿中的表达水平与病情的相关性

摘要 目的：探讨与分析血清干扰素-γ（IFN-γ）、血沉（ESR）以及可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）在急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿中的表达水平与病情的相关性。方法：选择2017年2月到2020年10月在本院血液科诊治的急性淋巴细胞白血病患儿62例作为ALL组,同期选择在本院体检的健康小儿62例作为对照组,检测所有小儿的血清IFN-?酌、ESR、sIL-2R水平,判定ALL组患儿的免疫表型、染色体分析,随访患儿的预后并进行相关性分析。结果：ALL组的CD34+阳性、CD117+阳性、染色体核型异常占比分别为77.4 %、58.1 %、54.8 %,高于对照组的27.4 %、17.7 %、14.5 %（P<0.05）。ALL组的血清ESR、sIL-2R含量高于对照组,IFN-γ含量低于对照组（P<0.05）。在ALL组小儿中,随访到2021年12月1日,平均随访时间29.14±4.28个月,总生存时间为18.29±1.22个月,无事件生存时间为10.48±0.33个月;死亡22例,生存40例,死亡率为35.5 %。Spearman相关分析显示：血清IFN-γ、ESR、sIL-2R含量与CD34+阳性、CD117+阳性、染色体核型异常、总生存时间、无事件生存时间具有相关性（P<0.05）。多因素logistic回归分析显示：IFN-γ、ESR、sIL-2R为影响急性淋巴细胞白血病患儿预后死亡的重要因素（P<0.05）。受试者操作特征曲线（ROC）显示IFN-γ、ESR、sIL-2R预测急性淋巴细胞白血病患儿预后死亡的曲线下面积分别为0.867、0.735、0.796。结论：急性淋巴细胞白血病患儿多伴随有血清IFN-γ的高表达与血清ESR、sIL-2R的低表达,三者都与患儿的免疫表型与染色体核型存在相关性,也是影响患儿预后的重要因素。