被子植物未受精胚珠与子房离体培养的研究进展

介绍被子植物未受精胚珠与子房离体培养诱导单倍体植株的研究进展。迄今已有9个科21种植物用这一方法诱导出单倍体植株,植物的基因型、外植体的发育程度、接种前的预处理、培养基和培养条件等均能影响诱导率的高低。胚胎学观察揭示大孢子与胚囊内的卵细胞、助细胞和反足细胞均有可能在培养中启动分裂,通过胚状体或愈伤组织形成单倍体植株。本项技术在植物单倍体育种中可发挥重要作用。     

向日葵未受精胚珠培养时胚状体发生的显微观察

由开花前1—4天的向日葵子房中取出胚珠,在液体培养基上进行漂浮培养,诱导了未受精的卵细胞发育为单倍体的胚状体.亦诱导了珠被绒毡层产生胚状体。对两种胚状体的发生和发育过程及其形态发生特点作了显微观察与描述。     

巴西橡胶树未受精胚珠培养时愈伤组织与胚状体的起源(简报)

THEORIGINOFCALLUSANDEMBRYOIDINCULTUREDUNFERTILIZEDOVULESOFHEVEABRASILIENSISYangXiaoqua(DepartmentofFallScience,SouthChinaUniversityofTechnolop,Guangzhou510641)FuJiarui(DepartmentofBiology,ZhongshanUniversity,Guangzhou510275)迄今为止,利用未受精胚珠高体培养诱导木本植物形成单倍体植株的仅有杨树及巴西橡胶树两例[1-3],但均缺乏详细的胚胎学观察资料,胚状体的起源不甚清楚。在某些草本植物中,起源问题已有详细的研究。例如向日葵未受精胚珠离体培养时,胚状体起源于未受精的卵…     

向日葵未受精胚珠培养再生植株

迄今,有关向日葵离体雌核发育的研究,仅蔡得田与周嫦(1983)、Gelebart与San(1987)由未传粉子房培养分别得到单倍体小苗和植株,而在未受精胚珠培养方面,阎华等对诱导胚状体形成的因素作了大规模研究,但未继续研究其植株再生问题。我们在上述基础上,经过三次重复实验,建立了向日葵未受精胚珠培养再生单倍体植株的技术流程,使其进一步用于育种及细胞工程成为可能。     

南瓜未受精胚珠的离体培养及植株再生

以南瓜(Cucurbita moschata)品种试验1号为材料, 以未受精胚珠为外植体, 研究了激素种类、外植体发育时期、高温预处理时间和AgNO₃浓度对胚状体诱导的影响。结果表明, 2,4-D、NAA和6-BA组合有利于胚状体的形成, 出胚效果最好的培养基为MS+1.0 mg·L^–12,4-D+0.25 mg·L^–1NAA+0.5 mg·L^–16-BA, 出胚率达31.1%; 雌花开放当天的胚珠出胚率最高(26.7%), 且愈伤组织形成频率低(<5%); 外植体在黑暗、高温(35°C)条件下处理5天有利于胚状体的形成, 出胚率为32.2%。培养基中添加AgNO₃对胚状体形成的抑制作用明显。胚状体转移至成苗培养基后可形成正常小苗, 出苗率最高可达64.3%, 植株再生过程经历了典型的胚胎发育途径。细胞学观察结果表明, 胚状体极有可能起源于胚囊珠孔端的细胞, 即卵细胞或助细胞。     

向日葵离体孤雌生殖的超微结构研究

本文是研究未受精胚珠培养诱导的孤雌生殖过程超微结构变化的首次报道。向日葵(Heliaanthus annuus L.)的卵细胞在离体条件下被激活,发生细胞核移位、极性丧失、细胞器增多并转变成活动状态、液泡化程度增大、合点端形成细胞壁等一系列变化,预示即将启动孤雌生殖。孤雌生殖的原胚具有若干显著特征,如极性颠倒、有自体吞噬活动、壁的自由生长、游离核分裂等。对这些现象作了初步的讨论。     

黑穗醋栗(Ribes nigrum L.)未受精胚珠培养诱导体细胞胚状体和植株再生的研究

本文报告了黑穗醋栗(Ribes nigrum L.)三个栽培品种中的薄皮黑豆未受精胚珠(花粉发育到单核晚期)在MS基本培养基附加植物激素BA,2.4-D和GA_3中形成了体细胞胚状体。长度约为0.5—1.0cm大小的胚状体在生根培养基中可以形成完整的再生植株。经过筛选得到了体细胞胚性愈伤组织无性系,继代培养二年多仍能保持胚状体形成能力。试验结果表明:诱导体细胞胚胎发生受品种和接种时期的影响,适宜的接种时期为花粉发育到单核晚期。培养基中的BA为诱导胚胎发生和保持胚性愈伤组织无性系所必需。     

五唇兰未受精胚珠离体培养及雌配子体发育的研究

五唇兰(Doritispulcherrima Lindl.)的胚珠属于倒生型,具薄珠心,两层珠被.胚囊发育类型为双孢子葱型,授粉后约45 d形成七细胞八核的成熟胚囊.五唇兰未受精胚珠在离体培养初期对外源激素的依赖性很小,在没有外源激素的培养基上,大孢子母细胞也能经过减数分裂发育为二核胚囊.在培养后期,外源激素对胚囊发育的影响很大.在培养基无外源激素或仅含生长素或细胞分裂素时,雌配子体的发生过程不能顺利完成;在改良VW培养基上添加0.5 mg/L BA和0.1 mg/LNAA时,形成成熟胚囊.     

野生棉与栽培棉种间杂交胚珠离体培养的胚胎发育研究

以陆地棉(Gossypium hirsutum L.)做母本,野生的瑟伯氏棉(Gossypium thurberi Tod)和克劳茨基棉(Gossypium klotzschianum Anderss.)做父本,并以陆地棉自交为对照,取杂交授粉后两天的胚珠进行离体培养,研究胚胎发育。在培养条件下,三种遗传型合子启动的时间不一致,而且胚乳的发育也存在差异。珠心和胚囊腔的生长变化在有胚胚珠和无胚胚珠之间,存在明显的不同。球形胚时期,是杂种胚能否正常发育的关键时期。离体培养,改变了自然杂种状态的胚和胚乳以及胚和母体组织的不协调关系,因此产生了较多的杂种胚。     

向日葵的幼胚培养

实验所用的基本培基中以B_5培养基对向日葵幼胚培养为最适。激素萘乙酸主要促进幼胚的胚性生长。吲哚乙酸(IAA)与激动素(KT)的配合使用,对幼胚的分化起明显的调节作用。天然提取物则明显地促进幼胚生长、其中荸荠汁的培养基可使向日葵球形胚进行正常发育。 用两种改良的B_5培养基做胚胎培养系统,使向日葵种间杂交胚生长发育。先将杂交后的心形胚培养在胚胎生长培养基上,进行充分的胚性生长。然后把胚转移到萌发培养基,使其萌发形成幼苗,最后移入土壤直至开花。     

向日葵悬浮培养再生芽

从54份向日葵(Helianthus annuus L.)材料中筛选出三个再生能力较强的基因型,取其下胚轴诱导愈伤组织,再以愈伤组织制备悬浮细胞系。在 MS 添加 BA(0.5mg/l)和2,4-D(0.001mg/l)液体培养基上确定细胞生长量,悬浮培养细胞在去掉2,4-D 的 MS 培养基上能够诱导芽的再生。     

埃塞俄比亚芥与白菜型、甘蓝型和芥菜型油菜杂种子房培养技术的研究

本文研究了埃芥×白菜型油菜、埃芥×甘蓝型油菜和埃芥×芥菜型油菜杂种子房的离体培养方法。结果表明,三大种间组合授粉子房的适宜离体时间分别在５—１０、７—１２和１０—１７天之间。水解酪蛋白对杂种胚的发育没显示出有利作用,０．２ｍｇ／ＬＢＡ促进了杂种胚的形成。ＭＳ和Ｌ．Ｓ．Ｍ．基本培养基和本培养方法对于埃芥×白菜型油菜和埃芥×甘蓝型油菜杂种子房的离体培养是可行的。     

向日葵幼胚培养中体细胞胚胎发生的观察

1.向日葵不同品种体细胞胚胎发生的情况不同。2.较高浓度的蔗糖有利于向日葵幼胚的体细胞胚胎发生。3.在同样条件下,2mm长的幼胚较其它时期的幼胚体细胞胚胎发生的频率高。4.在蔗糖浓度为17.5％并分别加入0.5—10.0ppm玉米素的Nitsch培养基中,向日葵幼胚产生体细胞胚胎发生的频率随着玉米素浓度的增高而增加。5. 2,4-D能使体细胞胚胎发生,但不能分化器官。6.切片观察表明:在含玉米素的培养基上,幼胚产生了胚性细胞团和胚状体。并多数发生于子叶与下胚轴的深层。胚性细胞团周围细胞退化,使其与周围组织之间形成间隙。     

恒河猴静脉内皮细胞培养的研究

利用胶原酶对恒河猴血管内皮细胞进行消化,以9.92±3.34×10~3个细胞/cm~2的接种率接种于35mm培养皿中原代培养,体外培养7.7±1.82天,细胞增长了7.39±5.04倍,以1:6及1:2比例分别传第一代、第二代共历时13.89±1.36天细胞增长了147.93±88.68倍。对原代及传代细胞进行染色体及第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检查,证实所培养的细胞为内皮细胞。通过检测培养上清中vWF和PGF1α的含量,原代、第一代与第二代之间均无明显差异(P>0.05)。     

罗汉果茎段离体培养研究

罗汉果茎段培养在MS基本培养基中,研究植物激素对器官形成的影响,试验结果表明细胞分裂素BA促进芽的形成和增殖;而KT则有利于根的形成,却抑制芽的增殖,BA和IBA配合使用,对茎段形成芽有增效作用。通过继代培养,能繁殖大量绿苗,这揭示出同一块离体茎组织培养出许多小植株的可能,将嫩梢转入含有NAA0.2毫克/升的1/2MS培养基中,能诱导生根,形成完整小植株,试管苗成功地移栽田间,并已开始开花结果,     

营养因素对日本血吸虫毛蚴人工转变母胞蚴及体外培养的影响

本文报道了4种培养基,4种血清,不同浓度的半乳糖,二巯基苏糖醇及部分三羧酸循环中间产物对日本血吸虫毛蚴体外转变为母胞蚴及其存活的影响,发现稀释一倍的RPM1 1640加10％兔血清为较适宜的培养基,上述添加剂对毛蚴转变和母胞蚴存活均无有益作用,其中柠檬酸可显著抑制毛蚴的转变,文中描述了毛蚴的体外转变成母胞蚴的过程,对血吸虫的糖代谢途径进行了讨论。