内毒素血症对新生鼠肠道菌群的影响

利用高通量测序技术分析内毒素血症新生鼠肠道菌群的变化, 探究肠道菌群与内毒素血症的关系, 为临床诊治提供思路。

复制新生大鼠内毒素损伤模型, 注射LPS后第24小时、第3天、第7天分别处死新生大鼠, 留取粪便并将对照组(C1组6只、C3组5只、C7组7只)和LPS组(L1组5只、L3组5只、L7组5只)按处死天数各分为3组。高通量测序分析各组间菌群多样性及相对丰度差异。

(1) Alpha多样性分析提示对照组和LPS组菌群多样性及丰度有显著差异, C3组较L3组Shannon指数均值小(t=-3.386 8, P=0.009 5), Simpson指数均值大(t=3.102 4, P=0.014 6);C7组较L7组Shannon指数均值大(t=2.459 4, P=0.033 7), Simpson指数均值小(t=-2.475 6, P=0.032 8)。(2)物种组成分析表明LPS组的菌群结构发生改变, 在门水平LPS组较对照组变形菌门相对丰度高, 厚壁菌门相对丰度低; 在属水平上LPS组较对照组埃希菌-志贺菌属相对丰度高, 乳杆菌属相对丰度低; 且随着天数的递增LPS组埃希菌-志贺菌属呈递增趋势, 红球菌属呈递减趋势。

内毒素血症可以改变新生鼠肠道菌群的组成, 并与肠道菌群失调有一定的关系。

     

基于高通量测序分析哮喘小鼠呼吸道菌群的变化

通过高通量测序分析哮喘模型小鼠呼吸道菌群的变化情况。

将12只SPF级BALB/c雄性小鼠随机分为对照组和模型组, 每组6只。采用卵清蛋白致敏方法建立哮喘小鼠模型后, 进行支气管组织切片病理学观察, ELISA法检测血清IgE水平, 测定肺指数, 采集咽拭子后提取DNA行高通量测序分析。

与对照组比较, 模型组小鼠血清IgE水平明显升高(P < 0.05), 肺指数明显上升(P < 0.05), 可见支气管上皮粘膜有水肿, 少量淋巴细胞浸润, 平滑肌增生。模型组小鼠呼吸道菌群与对照组比较, 菌种丰度升高, 厚壁菌门较对照组减少(P < 0.05), 放线菌门和变形菌门增多(P < 0.05), 菌群结构有明显差异。

哮喘小鼠存在呼吸道微生态菌群失衡。

     

基于16S rRNA基因测序研究蜥蜴胃康方对胃癌肝转移裸鼠肠道菌群的影响

观察不同剂量蜥蜴胃康方对胃癌肝转移裸鼠肠道菌群的影响。

60只裸鼠随机分为正常对照组(10只)和造模组(50只), 造模组用HGC-27胃癌细胞通过脾脏注射制备胃癌肝转移模型, 造模4周时, 随机取正常对照组1只与造模组5只, 取裸鼠肝组织通过病理切片对比验证造模是否成功。随后剩余造模组45只裸鼠随机分为模型组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组以及蜥蜴胃康方高(2.6 g/mL)、中(1.3 g/mL)、低(0.6 g/mL)剂量组, 每组9只。取最后一次灌胃2 h后各组裸鼠新鲜粪便进行16S rRNA基因测序。

16S rRNA测序结果显示, 与正常对照组相比模型组裸鼠肠道菌群在门水平表现为拟杆菌门、厚壁菌门丰度下降, 放线菌门、蓝藻菌门丰度富集。属水平表现为Muribaculaceae丰度显著降低(t=3.514 4, P=0.024 6), 拟普雷沃菌属丰度显著富集(t=-4.660 1, P=0.009 6), 副拟杆菌属丰度显著富集(t=-4.284 7, P=0.012 8), 瘤胃球菌属丰度显著降低(t=3.342 7, P=0.028 8)。经蜥蜴胃康方干预后, 胃癌肝转移裸鼠的肠道菌群结构得到了改善, 门水平表现为厚壁菌门丰度增加, 放线菌门丰度降低, 各组间差异有统计学意义(H=11.619 9, P=0.040 4);蓝藻菌门丰度降低, 组间差异有统计学意义(H=11.433 1, P=0.043 4)。属水平表现为Muribaculaceae丰度升高, 拟普雷沃菌属、副拟杆菌属丰度降低; 瘤胃球菌属(H=14.658 4, P=0.011 9)、乳杆菌属(H=11.386 0, P=0.044 2)丰度显著富集, 各组间差异有统计学意义(P < 0.05)。

蜥蜴胃康方能增加厚壁菌门丰度, 降低放线菌门、蓝藻菌门丰度, 提高益生菌乳杆菌属、瘤胃球菌属丰度, 降低致病菌肠杆菌属、梭状芽胞杆菌属丰度。其中以蜥蜴胃康方高剂量组对肠杆菌属、梭状芽胞杆菌属的抑制作用最显著, 并能有效提高乳杆菌属丰度, 从而调节胃癌肝转移裸鼠肠道菌群的平衡, 增强肠黏膜免疫屏障, 激活免疫细胞释放肿瘤坏死因子来发挥对胃癌的抑制作用。

     

红茶对2型糖尿病小鼠肠道菌群分布的影响

探讨红茶对2型糖尿病（T2DM）小鼠肠道菌群分布的影响,为研究红茶在代谢性疾病的辅助治疗机制提供参考。

构建 T2DM小鼠模型,将其随机分为模型组（T2DM组）和茶水饲喂组（T2DM_T组）,取健康小鼠作为对照组（Control组）,每组各15只。实验终点收集3组小鼠粪便进行宏基因组测序,分析组间菌群差异;同时进行肝脏组织形态学检查,观察组织病理学改变。

与Control组和T2DM组相比,T2DM_T组拟杆菌门（F = 21.056,P＜0.001）、邓肯氏菌属（F = 13.330,P = 0.001）、乳杆菌属（F = 36.546,P＜0.001）和粘液乳杆菌属（F = 43.813,P＜0.001）的相对丰度增加,担子菌门（F = 8.676,P = 0.005）、Muribaculum（F = 8.151,P = 0.006）和肠球菌属（F = 4.271,P = 0.040）的相对丰度降低。与T2DM组小鼠相比,T2DM_T组小鼠肝细胞排列较为紧密,细胞空泡变性程度有所减弱。

红茶在一定范围内能调节T2DM模型小鼠肠道菌群结构和相对丰度,红茶水喂饲可减缓造模所致的T2DM小鼠肝脏细胞的损伤,其具体作用机制值得深入研究和探讨。

     

高原地区慢性肝病肠道微生态结构的变化

分析高原地区慢性肝病患者肠道菌群物种多样性及菌群丰度结构变化,探讨肠道微生态失衡与慢性肝病的关联。

收集高原地区90例慢性肝病（慢性乙型病毒性肝炎30例、乙肝后肝硬化30例、原发性肝癌30例）及25例健康人的粪便,利用高通量基因测序及生物信息学分析技术,探讨慢性肝病患者与健康人之间物种多样性以及不同分类水平上肠道菌群组成是否存在差异。

慢性肝病患者肠道菌群多样性较健康人显著降低（Z=1.462,P=0.005）,Beta多样性分析发现慢性肝病患者与健康人肠道菌群组成上差异存在统计学意义（r=0.122,P=0.020）;对慢性肝病组与健康组进行组间肠道菌群差异性分析,发现在门水平上,拟杆菌门在慢性肝病组中富集（Z=1.065,P=0.043）,慢性肝病组内比较发现拟杆菌门在慢性乙型病毒性肝炎、乙肝后肝硬化、原发性肝癌患者中的相对丰度呈逐渐减少的趋势,但差异无统计学意义（P＞0.050）;属水平上,粪杆菌属在慢性肝病组中富集（Z=1.092,P=0.032）,而肠球菌属分布减少（Z=1.398,P=0.036）,同时慢性肝病患者肠道菌群中一些潜在致病菌如链球菌属、韦荣球菌属较健康人富集,而双歧杆菌属、乳杆菌属等益生菌相对丰度较低,但差异无统计学意义。组内比较发现存在差异菌属链球菌属（H=6.026,P=0.049）、韦荣球菌属（H=10.317,P=0.005）,对差异菌属进行两两比较发现相较原发性肝癌组,链球菌属在乙肝后肝硬化组中更加富集,差异有统计学意义（P＜0.050）,同时发现肝硬化及肝癌组中韦荣球菌属的相对丰度较慢性乙型病毒性肝炎组高,但差异无统计学意义（P＞0.050）。相关性分析发现粪杆菌属与ALT、AST、ALP水平呈正相关（r=0.192、0.187、0.276,均P＜0.050）,韦荣球菌属与TB、ALP水平呈正相关（r=0.257、0.225,均P＜0.050）。

高原地区慢性肝病患者肠道微生物多样性显著降低,且慢性肝病患者与健康人肠道菌群组成上存在差异,在慢性肝病的进展中一些潜在致病菌的丰度逐渐增加,同时益生菌的相对丰度呈逐渐减少的趋势。

     

健脾益肾通络方对MPTP诱导的帕金森病小鼠肠道菌群与短链脂肪酸的调节作用

探讨健脾益肾通络方（JYTR）对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的帕金森病小鼠肠道菌群组成和短链脂肪酸的影响。

将成年雄性C57BL/6小鼠随机分成3组：空白组、MPTP组、MPTP+JYTR组,每组15只。采用爬杆、悬挂、横梁实验评估运动情况。采用免疫荧光法检测纹状体酪氨酸羟化酶（TH）的表达。采用蛋白印迹法检测纹状体和结肠中α-突触核蛋白（α-syn）的表达。采用16S核糖体RNA（16S rRNA）基因测序评估肠道菌群的变化。采用气相色谱质谱法（GC-MS）分析小鼠粪便短链脂肪酸的水平。最后对差异菌群和短链脂肪酸进行相关性分析。

与MPTP组相比,MPTP+JYTR组小鼠悬挂评分增加（P=0.040）,爬杆时间和横梁行走时间显著缩短（P=0.042、P＜0.001）;纹状体TH表达显著增加（P=0.045）,纹状体、结肠中α-syn表达显著减少（P=0.011、P=0.037）;肠道菌群alpha多样性、beta多样性显著改变;门水平方面拟杆菌门丰度增加（P=0.003）,厚壁菌门、疣微菌门丰度均显著减少（P=0.001、P=0.011）;科水平方面毛螺菌科丰度显著升高（P=0.001）,嗜黏蛋白阿克曼菌科、丹毒丝菌科丰度均显著降低（P=0.008、P=0.004）;短链脂肪酸中乙酸、丙酸水平均显著增加（P=0.014、P=0.010）。相关性分析显示爬杆时间、悬挂评分、横梁时间均与肠道菌群、短链脂肪酸存在相关性。

JYTR可以通过调节肠道菌群失调和改善短链脂肪酸水平起到治疗帕金森病的作用。

     

鸟苷酸环化酶C激动剂对便秘小鼠肠道菌群的影响

通过动物模型和16S rDNA高通量测序,探究鸟苷酸环化酶C（guanylate cyclase C,GC-C）激动剂（利那洛肽）对便秘的治疗作用和肠道菌群的影响,以期为便秘的治疗提供理论依据。

随机将30只雄性C57BL/6小鼠平均分为对照组、便秘模型组及治疗组,每组10只。其中对照组小鼠给予生理盐水灌胃,便秘模型组和治疗组小鼠给予洛哌丁胺灌胃构建便秘模型,造模成功后治疗组小鼠给予GC-C激动剂灌胃。干预结束后检测各组小鼠粪便含水率、首粒黑便排出时间、小肠推进率以及血清中P物质（Substance P,SP）、血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）水平;使用16S rDNA高通量测序分析3组小鼠肠道菌群特点和差异。

与便秘模型组相比,治疗组小鼠粪便含水量、小肠推进率显著提升（t = 3.418,P = 0.003 1;t = 3.141,P = 0.005 6）,首粒黑便排出时间缩短（t = 4.756,P = 0.000 2）;血清VIP水平降低（t = 4.894,P = 0.000 5）,SP水平有升高趋势。与对照组相比,便秘模型组小鼠肠道菌群多样性显著降低,门水平上,Firmicutes丰度升高和Bacteroidetes丰度降低;属水平上,便秘模型组小鼠Muribaculaceae、Lachnospiraceae、Akkermansia丰度降低（均P＜0.050 0）,Allobaculum、Turicibacter、Clostriclium丰度升高（均P＜0.001 0）,通过GC-C激动剂干预可以改善便秘引起的菌群改变,并显著提高了Lactobacillus丰度（P = 0.030 5）。

GC-C激动剂可能通过影响血清中SP、VIP水平,并调节便秘小鼠的肠道菌群趋于正常,增加Lactobacillus、Muribaculaceae等产短链脂肪酸菌群丰度,提高肠道动力,从而起到改善便秘的作用。

     

红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响

探讨红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响,为从微生态角度研究红茶在人体肠道菌群形成过程中的作用机制奠定基础。

利用宏基因组测序技术检测4周龄新生幼鼠（4weeks组,n = 30）、12周龄正常对照组小鼠（control组,n = 15）和12周龄喂饲红茶水实验组小鼠（teadrink组,n = 15）的肠道菌群分布,分析3组样本的菌群差异情况,探求红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响。

与control组相比,teadrink组小鼠肠道拟杆菌门（t = −7.711,P＜0.001）、拟杆菌科（t = −3.411,P = 0.009）、长尾嗤菌体科（t = −2.515,P = 0.036）、拟杆菌属（t = −2.693,P = 0.027）、邓肯菌属（t = −2.434,P = 0.041）、居海事城球杆菌属（t = −3.327,P = 0.029）、迪博邓肯菌（t = −2.679,P = 0.028）、普通居海事城球杆菌（t = −3.401,P = 0.027）和Duncaniella_sp._C9（t = −3.104,P = 0.035）相对丰度显著增加,厚壁菌门（t = 8.952,P＜0.001）、乳杆菌科（t = 13.102,P＜0.001）、消化链球菌科（t = 3.665,P = 0.021）、爱格菌科（t = 4.481,P = 0.002）、理研菌科（t = 3.626,P = 0.022）、乳杆菌属（t = 5.542,P = 0.004）、黏液乳杆菌属（t = 6.334,P = 0.002）、龙包茨菌属（t = 3.785,P = 0.005）、阿德勒菌属（t = 4.504,P = 0.002）、约氏乳杆菌（t = 4.282,P = 0.011）和罗伊氏粘液乳杆菌（t = 6.156,P = 0.003）相对丰度显著减少。与4weeks组相比,teadrink组小鼠肠道菌群分布差异大于control组。

红茶对新生幼鼠肠道菌群的形成能够产生影响,不同丰度的菌群可能通过调节碳水化合物代谢等途径来达到改善肠道菌群结构、增强肠道稳态的目的,具体代谢机制有待深入研究。

     

首荟通便胶囊对术后肠麻痹小鼠肠道功能的影响及机制研究

探讨首荟通便（Shou-Hui Tongbian,SHTB）胶囊对小鼠术后肠麻痹（postoperative ileus,POI）的作用,并从肠道菌群平衡方面探讨其可能的作用机制。

采用经典小肠干扰术建立小鼠POI模型,将30只小鼠随机分成对照组（Control组）、模型组（POI组）、阳性参照莫沙必利组（MSBL组）、SHTB胶囊低剂量组（SHTB-L组）和SHTB胶囊高剂量组（SHTB-H组）,每组6只。Control组和POI组小鼠灌胃生理盐水、MSBL组小鼠灌胃莫沙必利溶液（2.6 mg/kg）、SHTB-L组与SHTB-H组小鼠灌胃SHTB溶液（0.619 g/kg、1.238 g/kg）,每天1次,连续给药2 d。采用墨汁推进法检测小鼠的肠道蠕动能力;应用H&;E染色法观察小鼠肠道组织结构;利用16S rRNA基因高通量测序技术解析肠道菌群结构并确定SHTB胶囊发挥作用的关键菌。

与Control组相比,POI组小鼠肠道蠕动能力显著减弱（q=7.263,P＜0.001）,小肠黏膜中性粒细胞和淋巴细胞增多并伴有充血,组织发生水肿,肠道菌群物种总数降低,有益菌Parvibacter等的相对丰度显著降低（t=3.340,P=0.008）,有害菌Rikenellaceae_RC9_gut_group等的相对丰度显著升高（U=2,P=0.009）;药物治疗后上述变化有不同程度的减轻,与POI组相比,SHTB-L组、SHTB-H组和MSBL组小鼠肠道蠕动能力均显著提升（均P＜0.010）,炎症、水肿和充血等肠道病理改变明显好转;SHTB组小鼠肠道菌群物种总数有所提高,其中Parvibacter等的相对丰度显著升高（U=5,P=0.041）,Rikenellaceae_RC9_gut_group相对丰度显著降低（U=3,P=0.015）。

SHTB胶囊可通过调节小肠黏膜关键菌的平衡来改善POI小鼠肠道病理改变,促进肠道蠕动。

     

幽门螺杆菌感染对舌苔菌群的影响

探讨慢性萎缩性胃炎患者和慢性浅表性胃炎患者胃内幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)感染与舌苔菌群的关系。

根据61名患者内镜、病理和H.pylori检测结果, 将其分成慢性萎缩性胃炎H.pylori阳性组(12名)、慢性萎缩性胃炎H.pylori阴性组(16名)、慢性浅表性胃炎H.pylori阳性组(8名)和慢性浅表性胃炎H.pylori阴性组(25名)。采集舌苔样本进行16S rRNA基因测序, 分析各组患者舌苔菌群结构。

16S rRNA基因测序结果显示, 此次测序样本数据量足够, 样本所含物种的丰富程度和均匀程度合理。4组舌苔菌群样本中Observed species指数差异有统计学意义(H=10.023 3, P < 0.05)。门水平上, 舌苔菌群由拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门3大优势菌门组成。属水平上, 4组间共有11种菌属的丰度差异有统计学意义(均P < 0.05)。在慢性萎缩性胃炎患者中, H.pylori阳性的患者拟普雷沃菌属相对丰度显著低于H.pylori阴性患者, 而罗氏菌属的相对丰度则显著升高。此外, 61例舌苔菌群样本中, 仅1例检测到H.pylori。

H.pylori感染与舌苔菌群结构存在相关性, 然而胃内与口腔中H.pylori的具体关联还需要进一步研究。

     

痛泻要方对肝气乘脾泄泻小鼠肠道微生物的影响

目的 探讨痛泻要方对肝气乘脾泄泻小鼠肠道微生物的影响,为肝气乘脾泄泻及中医经典药方治疗泄泻的机制提供实验依据。 方法 SPF级昆明小鼠随机分为正常组10只和模型组15只,造模成功后,取正常组和模型组各5只,将剩余模型组小鼠随机分为自然恢复组和痛泻要方干预组各5只,痛泻要方干预组灌胃痛泻要方治疗3 d,分别在造模成功和治疗后取肠道内容物进行微生物培养,然后记录内容物中各种菌的数量。 结果 造模后,模型组小鼠细菌总数、大肠埃希菌、双歧杆菌、乳杆菌的数量均有上升趋势,与正常组相比只有细菌总数[(23.9±3.51)vs(1.35±0.30),108 CFU/g]差异有统计学意义(t=-11.061,P=0.008)。治疗后,痛泻要方干预组小鼠恢复了肝气乘脾泄泻引起的肠道微生物失衡,其中与自然恢复组相比痛泻要方治疗对大肠埃希菌的影响最明显[(1.63±1.19)vs(8.47±0.84),106 CFU/g;t=8.124,P=0.001],细菌总数、双歧杆菌、乳杆菌数量均受影响,但差异无统计学意义(P>0.05)。肝气乘脾造模组小鼠的肠道微生物定植抗力(B/E值)降低,而痛泻要方干预组的趋近于正常组。 结论 肝气乘脾泄泻小鼠肠道细菌总数、大肠埃希菌、双歧杆菌、乳杆菌等的数量增加,B/E值降低,痛泻要方干预能够恢复肝气乘脾泄泻引起的肠道微生物失衡,并通过调节肠道微生物以提高B/E值来治疗泄泻。     

甜味剂对七味白术散治疗抗生素相关性腹泻小鼠肠道微生物及酶活性的影响

探讨4种常用甜味剂对七味白术散治疗抗生素相关性腹泻的影响,为药剂辅料的选用对药效的影响及临床治疗指导患者服药提供实验依据。

选择42只SPF级昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、七味白术散组、蔗糖组、糖精钠组、山梨醇组和木糖醇组,每组6只。造模阶段正常组灌胃无菌水,模型组和治疗组采用抗生素混合液（庆大霉素+头孢拉定）建立小鼠抗生素相关性腹泻模型。治疗阶段对正常组和模型组小鼠灌胃无菌水,5个治疗组小鼠分别灌胃七味白术散、蔗糖+七味白术散、糖精钠+七味白术散、木糖醇+七味白术散及山梨醇+七味白术散。治疗结束后,分别收集各组小鼠脾脏、胸腺以及肠道内容物,进行脏器指数、肠道微生物数量及肠道酶活性分析。

与模型组相比,七味白术散组和山梨醇组小鼠的脾脏指数增加,但差异无统计学意义（均P＞0.050）;各组小鼠的胸腺指数差异无统计学意义（P＞0.050）。与七味白术散组相比,添加甜味剂组别的腹泻小鼠肠道内容物中的细菌数和大肠埃希菌数均有一定程度的增加,其中山梨醇组的大肠埃希菌数量变化最小（P = 0.002）;蔗糖组和山梨醇组腹泻小鼠肠道内容物中的双歧杆菌数量（P＜0.001、P＞0.050）和乳杆菌数量（P = 0.001、P＜0.001）均有所增加。与七味白术散组相比,添加甜味剂组别的小鼠均在不同程度上提高了酶活性,其中木糖醇组酶活性最高,山梨醇组和蔗糖组次之,糖精钠组酶活性最低。

甜味剂的添加对七味白术散治疗抗生素相关性腹泻疗效有一定影响,山梨醇作为甜味剂在药物制剂领域中的应用十分具有前景,但其是否能够替代传统甜味剂蔗糖在未来中药制剂中作为矫味剂被选用仍需进一步进行探究。

     

Probiotics alleviate autoimmune hepatitis in mice through modulation of gut microbiota and intestinal permeability

Autoimmune hepatitis (AIH) is an immune-mediated type of chronic liver inflammation accompanied by intestinal flora imbalance. Probiotics have been reported to ameliorate imbalances in the intestinal flora. This study aimed to investigate the effects of compound probiotic in the AIH mouse model. AIH mice were gavaged with compound probiotic and injected intraperitoneally with dexamethasone (dex) for 42 days. The results showed that these treatments suppressed hepatic inflammatory cell infiltration, serum transaminase, and Th1 and Th17 cells. However, Treg cells were increased only in the probiotics group, which indicates an immunomodulatory role of the compound probiotic. The compound probiotic maintained intestinal barrier integrity, blocked lipopolysaccharide (LPS) translocation, and inhibited the activation of the TLR4/NF-κB pathway and the production of inflammatory factors in the liver and ileum. Moreover, the compound probiotic treatment increased the abundance of beneficial bacteria and reduced the abundance of potentially harmful bacteria in gut. Compound probiotic may improve ileal barrier function while increasing the diversity of the intestinal flora, blocking the translocation of gut-derived LPS to the liver and therefore preventing activation of the TLR4/NF-κB pathway. The resulting inhibition of pro-inflammatory factor production facilitates AIH remission.     

地衣芽胞杆菌BL63516对抗生素诱导的菌群紊乱小鼠肠黏膜屏障功能的影响

目的 探索地衣芽胞杆菌BL63516对肠道菌群和肠黏膜屏障功能调节的效果和可能机制,为临床疾病的治疗提供新思路。方法 采用健康清洁级雄性BALB/C小鼠30只构建动物模型,将小鼠分为3组（每组10只）,分别为对照组（CON组）、头孢曲松钠灌胃组（CS组）和地衣芽胞杆菌BL63516治疗组（BL组）,除CON组外其余两组小鼠给予300 mg/mL头孢曲松钠0.2 mL,2次/d灌服8 d,短期大量服用抗生素以建立肠道菌群紊乱模型。第9天起BL组小鼠给予地衣芽胞杆菌干预连续8 d。第17天摘眼球处死小鼠,取血、结肠、粪便样本。ELISA方法检测小鼠血清及肝脏组织中的细胞因子及LPS水平。PCR-变性梯度凝胶电泳方法及16S rRNA高通量测序测定小鼠肠道菌群结构。结果 地衣芽胞杆菌干预后小鼠血清LPS水平较模型组显著降低,屏障功能改善。且地衣芽胞杆菌治疗后BL组肠道菌群丰富度和多样性显著升高,菌群结构有所改变。结论 实验结果提示地衣芽胞杆菌BL63516可以有效改善抗生素所致的小鼠肠道菌群失调,对肠屏障功能有一定调节作用。     

Akkermansia muciniphila在结肠炎相关结肠癌中的作用和机制

探究Akkermansia muciniphila在结肠炎相关结肠癌中的作用以及Akkermansia muciniphila通过影响肠道黏膜屏障延缓结肠炎癌变的机制。

C57BL/C小鼠共30只,分为对照组、结肠炎相关结肠癌组、结肠炎相关结肠癌+AKK组,每组10只,在建模结束后采用断头法处死小鼠,HE染色检测结肠病理结构,计算成瘤率。采用ELISA法检测3组小鼠结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平,免疫荧光双染法检测3组小鼠ZO-1和E-cadherin的表达情况,免疫组化法检测3组小鼠结肠组织Occludin-1、N-cadherin、GPCR41、GPCR43、Bcl-2、 Bax等蛋白的水平,GC-MS法检测3组小鼠短链脂肪酸的水平。

HE发现结肠炎相关结肠癌组小鼠的结肠组织炎症浸润,肠腺水肿,存在不同程度的异型增生,结肠炎相关结肠癌+AKK组小鼠的结肠水肿和出血减轻,肠腺结构清晰。结肠炎相关结肠癌组中小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平（pg/mL）（9.12±0.36、6.36±0.42、45.20±3.63）较对照组（3.80±0.38、0.06±0.89、2.10±0.14）升高（Tamhane’s T2分别为0.001、2.549、12.831,均P＜0.05）,经Akkermansia muciniphila灌胃后,IL-1β、IL-6、TNF-α水平（3.92±0.19、3.54±1.28、18.20±8.47）下降（Tamhane’s T2分别为6.553、2.414、5.743,均P＜0.05）。免疫荧光双染法显示ZO-1 和 E-cadherin主要定位在结肠柱状上皮和肠腺,结肠炎相关结肠癌组ZO-1和E-cadherin的表达（ng/mL）（0.04±0.01、0.34±0.55）比对照组（0.10±0.18、0.48±0.13）降低（Tamhane’s T2分别为0.681、4.379,均P＜0.05）,而经Akkermansia muciniphila处理后显著上调小鼠结肠的ZO-1 和 E-cadherin的表达（0.08±0.05、1.08±0.28）（Tamhane’s T2分别为7.059、5.873,均P＜0.05）。免疫组化显示结肠炎相关结肠癌组Occludin-1、GPCR41、GPCR43、Bcl-2表达（ng/mL）（0.36±0.06、0.48±0.13、0.38±0.13、0.34±0.55）较对照组（1.08±0.08、0.74±0.06、0.48±0.13、1.64±0.11）减低（LSD-t分别为2.369、0.304、8.119、2.298,均P＜0.05）,Bax表达（ng/mL）（1.34±0.27）较对照组（0.48±0.13）增加（LSD-t为7.727,P＜0.05）,与结肠炎相关结肠癌组相比,结肠炎相关结肠癌+AKK组小鼠的Occludin-1、GPCR41、GPCR43、Bcl-2表达（0.84±0.06、0.60±0.19、1.08±0.08、1.08±0.28）上调（LSD-t分别为1.153、4.111、9.472、5.873,均P＜0.05）,Bax表达（0.34±0.58）下调（LSD-t为8.785,P＜0.05）。短链脂肪酸检测结果显示,结肠炎相关结肠癌组丙酸丙酯水平（μg/mg）（0.000066±0.000025）较对照组（0.000244±0.000035）下降（LSD-t为7.448,P＜0.05）,而经Akkermansia muciniphila干预后,结肠炎相关结肠癌+AKK组的丙酸丙酯水平（0.000276±0.000049）上升（LSD-t为8.779,P＜0.05）,3组中戊酸丙酯、异己酸丙酯、己酸丙酯的水平差异均无统计学意义。

Akkermansia muciniphila可降低结肠炎相关结肠癌小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平,可能通过短链脂肪酸介导GPCR调控ZO-1、E-cadherin、Occludin-1等结肠紧密连接蛋白的表达,增强结肠的黏膜屏障,从而降低结肠炎相关癌变的发展进程。

     

四君子汤对急性肝损伤伴发菌群失调及内毒素血症的保护作用

目的　观察急性肝损伤时肠道微生态学、血内毒素含量变化及四君子汤的保护作用。方法　小白鼠腹腔注射D-氨基半乳糖( D- Ga L N) ,制备肝损伤模型,观察中药对肠道正常细菌,组织二胺氧化酶( DAO)活性,血内毒素( L PS)含量的影响及肝脏病理学影响。结果　急性肝损伤时肠杆菌、肠球菌数量明显上升,乳酸杆菌、双歧杆菌数量显著下降,DAO活性下降,L PS含量明显上升,病理学显示,肝细胞大片状、多灶性坏死,大量炎细胞浸润。而中药治疗组上述指标得到明显改善,差异有非常显著性( P<0 .0 0 1)。结论　中药四君子汤对肠道微生态失衡有调整作用,能够减少内毒素的产生和吸收,对肝脏具有保护作用     

肠道菌群失衡对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者血浆降钙素原升高的影响

目的 探讨肠道菌群失衡对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭（hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF）患者血浆降钙素原（procalcitonin,PCT）水平升高的影响。方法 检测29例HBV-ACLF（肝衰组）、14例慢性乙型肝炎（乙肝组）患者入院时的血浆PCT、内毒素（endotoxin,LPS）水平,收集患者新鲜尾便并通过高通量测序检测肠道菌群状况,统计分析两组患者间肠道菌群、B/E值、PCT和LPS水平的差异,以及肝衰组患者PCT、LPS、B/E值三者间的相关性。结果 与乙肝组患者比较,肝衰组厚壁菌门、放线菌门、双歧杆菌属、乳杆菌属等肠道菌群显著减少,而拟杆菌门、变形菌门、埃希菌属等肠道菌群过度生长,两组患者间各菌群比较差异均具有统计学意义（t=-4.84,Z=-2.84,Z=-2.57,Z=-4.39,t=3.59,t=2.64,t=2.19,P＜0.01、＜0.01、=0.01、＜0.01、＜0.01、=0.01、=0.04）;肝衰组PCT[0.50（0.96）]ng/mL、LPS（0.46±0.10）EU/mL、B/E值（0.04±0.01）,乙肝组PCT（0.08±0.02）ng/mL、LPS（0.05±0.02）EU/mL、B/E值（1.62±0.31）,各指标两组间比较差异均具有统计学意义（Z=-3.17,t=5.88,t=16.18,P＜0.01、0.01、0.01）;肝衰组B/E值与LPS水平呈负相关关系（r=‒0.81,P＜0.01）,B/E值与PCT水平呈负相关关系（r=‒0.79,P＜0.01）,且PCT水平与LPS呈正相关关系（r=0.76,P＜0.01）。结论 HBV-ACLF患者肠道菌群失衡导致肠源性LPS生成增多,而肠源性LPS促使PCT产生增多。