具有分解嘌呤核苷能力的益生菌菌株筛选

在不同的肠道菌群及奶制品样品中筛选益生菌菌株,对其耐酸和耐胆盐能力、分解嘌呤核苷能力进行评价,为后续研发治疗高尿酸血症益生菌制剂提供依据。

采集内蒙古地区及巴马长寿村的健康婴儿肠道菌群或奶豆腐、奶疙瘩制品,通过选择性培养基划线培养、镜检及16S rDNA测序的方式筛选益生菌菌株。通过耐酸、耐胆盐试验,模拟胃液和模拟肠液筛选出对胃肠道环境耐受能力强的菌株并通过电镜观察其形态。再进一步通过分解嘌呤核苷能力检测确定分解能力最优的菌株。

在8个样本中筛选出23株益生菌,对其胃肠耐受能力进行检测后发现筛选出了8株耐受能力较强的益生菌菌株,分别为鼠李糖乳酪杆菌RH01103,罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001,植物乳植杆菌RH03010,动物双歧杆菌乳亚种RH04020,发酵粘液乳杆菌RH08050,副干酪乳酪杆菌HCS17-040,乳酸片球菌RH27102和戊糖片球菌RH34011。通过对分解嘌呤核苷能力检测,发现与未接种益生菌的空白对照组相比,罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001和副干酪乳酪杆菌HCS17-040对肌苷和鸟苷的分解能力最显著（P = 0.0002, P＜0.0001）。

8个样本筛选出的23株益生菌中罗伊氏乳杆菌HCS02-001和副干酪乳杆菌HCS17-040的胃肠耐受能力最强,分解嘌呤核苷效率最高。

     

厄贝沙坦片联合益生菌对高血压伴肥胖患者的疗效及对肠道菌群的调控作用

探讨厄贝沙坦片联合益生菌对高血压伴肥胖患者的疗效及对肠道菌群的调控作用。

选取2021年10月—2022年10月本院400例高血压伴肥胖患者。随机法分组：对照组（200例）给予厄贝沙坦治疗,研究组（200例）在对照组基础上联用益生菌。比较两组治疗前后舒张压（DBP）、收缩压（SBP）、C反应蛋白（CRP）、白细胞介素（IL）-6水平和肠道菌群变化,统计治疗期间不良反应发生情况。

治疗后,研究组DBP、SBP、CRP和IL-6水平均低于对照组（P＜0.05）。治疗后,研究组乳杆菌、拟杆菌及双歧杆菌水平高于对照组,肠杆菌及肠球菌水平低于对照组（P＜0.05）。研究组不良反应发生率为3.0%,对照组为4.5%,差异无统计学意义（χ² = 0.623,P = 0.430）。

厄贝沙坦联合益生菌治疗高血压伴肥胖可提升患者血压控制效果,减轻炎症反应,改善肠道紊乱菌群,且不良反应少。

     

双歧杆菌乳杆菌三联活菌片对幽门螺杆菌根治后消化道不良反应的改善作用

探讨加用双歧杆菌乳杆菌三联活菌片对临床四联疗法根除幽门螺杆菌(H.pylori)过程中患者消化道不良反应的改善作用。

选择2019年1月至2020年1月在昆明医科大学第二附属医院门诊就诊的100例H.pylori感染患者, 分为益生菌组和正常组, 各50例。全部患者通过四联疗法根除H.pylori后, 益生菌组患者继续加用双歧杆菌乳杆菌三联活菌片治疗, 对结果进行分析。

2组患者使用含有铋剂的四联疗法根除H.pylori后效果满意。益生菌组患者不良反应发生率低于正常组(25.5% vs 47.5%;χ²=11.023, P=0.001)。

益生菌可减轻四联疗法根除H.pylori后消化道不良反应, 根除H.pylori过程中加用益生菌的时机尚待进一步探讨。

     

双歧杆菌三联活菌散/胶囊治疗儿童功能性消化不良的Meta分析

系统评价双歧杆菌三联活菌散/胶囊对儿童功能性消化不良（FD）的治疗作用。

检索中国知网、万方、维普、PubMed、Embase、Web of Science数据库中关于双歧杆菌三联活菌散/胶囊治疗儿童FD的随机对照试验或前瞻性非随机对照试验,检索时间为建库至2022年6月。由两个评价者依据纳入和排除标准分别单独筛选并获得文献和临床资料,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。

纳入9篇文献,共944例患者。Meta分析结果显示,双歧杆菌三联活菌散/胶囊（试验组）治疗儿童功能性消化不良的总有效率显著高于常规治疗（对照组）[OR=4.89,95%CI（3.15～7.59）,P＜0.00001]。试验组患儿治疗后的症状评分、腹痛、腹胀、恶心的消退时间均明显低于对照组（P＜0.05）,而血清胃动素水平显著高于对照组（P＜0.05）。

双歧杆菌三联活菌散/胶囊治疗儿童功能性消化不良效果显著。

     

益生菌粉（副干酪乳酪杆菌207-27）的毒理学安全性评价

评估益生菌粉（副干酪乳酪杆菌207-27）的毒理学安全性,为其应用提供依据。

通过大鼠急性经口毒性试验、细菌回复突变试验、小鼠红细胞微核试验、小鼠精母细胞染色体畸变试验及大鼠28 d经口毒性试验研究益生菌粉（副干酪乳酪杆菌207-27）的安全性。

大鼠急性经口毒性试验结果显示,益生菌粉（副干酪乳酪杆菌 207-27）对大鼠的经口急性毒性LD₅₀均大于15.00 g/（kg•BW）,根据急性毒性分级标准属实际无毒。细菌回复突变试验、小鼠红细胞微核试验及小鼠精母细胞染色体畸变试验结果均显示阴性。大鼠28 d经口毒性试验结果表明,实验组大鼠体质量、摄食量、食物利用率、眼部状况、血液学指标、血液生化指标、脏器指数、大体及病理学检查结果与对照组相比差异均无统计学意义。

益生菌粉（副干酪乳酪杆菌207-27）具有良好的毒理学安全性。

     

双歧杆菌制剂对肿瘤化疗患者肠道菌群影响的Meta分析

探讨双歧杆菌制剂对肿瘤化疗患者肠道菌群的影响。

通过检索PubMed、Embase、The Cochrane Library、Web of Science以及CBM、CNKI、WanFang Data和VIP数据库,收集各数据库从建库至2022年7月发表的所有关于肿瘤化疗患者应用双歧杆菌制剂的随机对照试验,由2名研究者独立筛选文献,按照系统评价的要求对文献质量进行评估,使用Revman 5.4和Stata 17.0统计学软件进行Meta分析。

共纳入25篇文献（2 152例患者）,Meta分析结果显示,双歧杆菌制剂组患者肠道中双歧杆菌和乳杆菌的数量高于对照组[SMD = 2.89,95% CI（2.28,3.49）,P＜0.001;SMD = 2.20,95% CI（1.57,2.84）,P＜0.001],双歧杆菌制剂组患者肠道中大肠埃希菌、肠杆菌和肠球菌的数量低于对照组[SMD = −1.08,95% CI（−1.64,−0.52）,P＜0.001;SMD = −0.88,95% CI（−1.58,−0.17）,P = 0.010;SMD = −0.98,95% CI（−1.68,−0.28）,P = 0.006]。

在化疗的基础上添加双歧杆菌制剂对肠道主要菌群水平能起到显著的改善作用,降低不良反应发生率,值得在临床上推广及应用。

     

绝经综合征患者肠道菌群特征

研究绝经综合征患者的肠道菌群特征,为该类患者的治疗提供参考。

选取77例绝经综合征患者为病例组（P组）,24例绝经前后健康女性为健康对照组（H组）,采用16S rRNA基因测序技术检测两组对象肠道菌群结构,计算临床参数与肠道菌群的Spearman相关系数并采用PICRUSt2进行菌群的功能预测。

两组对象肠道菌群的alpha和beta多样性差异均无统计学意义（均P＞0.05）。LEfSe分析显示两组对象肠道菌群存在显著差异的物种（种水平）有14个（LDA分数＞2.0）。Spearman相关分析发现,雌二醇与聚集杆菌、动物双歧杆菌动物亚种和吉氏不动杆菌均呈正相关（均P＜0.05）,这3种细菌在绝经前后健康女性中数量较高,而卵泡刺激素、黄体生成素水平与上述3个物种均呈负相关（均P＜0.05）。功能预测显示,与心血管疾病和碳水化合物代谢相关的KEGG L3代谢途径在P组患者肠道菌群中富集（均P＜0.05）。

绝经综合征患者存在肠道菌群结构紊乱,表现为与性激素水平相关的聚集杆菌、动物双歧杆菌动物亚种和吉氏不动杆菌丰度降低,同时在绝经综合征患者中存在独特的代谢途径。

     

益生菌对克罗恩病患者肠道屏障功能和免疫调节的影响

研究益生菌对克罗恩病患者肠道屏障功能和免疫调节的影响,为该类患者的治疗提供参考。

选择2018年1月至2020年6月我院收治的94例克罗恩病患者进行前瞻性随机对照研究,根据住院尾号单双数随机分为单号的对照组（n = 45）和双号的益生菌组（n = 49）。对照组患者给予柳氮磺胺吡啶联合安慰剂治疗,益生菌组患者给予柳氮磺胺吡啶联合双歧杆菌三联活菌片治疗。治疗前及治疗后2个月时,分别检测患者粪便中肠道菌群数量,简化克罗恩病活动指数（CDAI）,血沉（ERS）,血清中超敏C反应蛋白（hs-CRP）、二胺氧化酶、D-乳酸、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素（IL）-4、IL-10、IL-17的水平以及外周血中Th1、Th2、Th17、Treg细胞的数目。随访2组患者预后不良终点事件的累积发生率。

治疗后2个月,益生菌组患者粪便中拟杆菌、肠杆菌、肠球菌的数量,简化CDAI、ERS水平,血清中hs-CRP、二胺氧化酶、D-乳酸、IFN-γ、IL-17水平,外周血中Th1、Th17的数量均低于对照组;而粪便中双歧杆菌、乳杆菌数量,血清中IL-4、IL-10水平,外周血中Th2、Treg的数量均高于对照组（均P＜0.05）。随访过程中,益生菌组患者预后不良终点事件的累积发生率低于对照组（P＜0.05）。

益生菌能够改善克罗恩病患者病情及肠道屏障功能,调节免疫应答,同时也对预后具有改善作用。

     

经颅直流电刺激联合益生菌对脑卒中后认知功能障碍患者的作用

探讨经颅直流电刺激（tDCS）联合益生菌对脑卒中后认知功能障碍（PSCI）患者认知功能和肠道菌群的影响。

按随机数字表法将2020年6月至2021年6月我院收治的150例PSCI患者分为对照组和观察组,各75例。对照组患者给予tDCS治疗,观察组患者给予tDCS联合益生菌治疗。采用蒙特利尔认知功能评估量表（MoCA）和简易智力状态检查量表（MMSE）评估患者治疗前后的认知功能。采用荧光定量PCR法检测患者治疗前后肠道菌群数量变化。比较两组患者认知功能、肠道菌群、临床疗效以及不良反应发生情况。

治疗后,观察组患者肠道双歧杆菌和乳杆菌数量较治疗前显著升高,且双歧杆菌和乳杆菌数量显著高于对照组;而大肠埃希菌和肠球菌数量较治疗前显著降低,且大肠埃希菌和肠球菌数量显著低于对照组（均P＜0.05）。治疗后,两组患者MoCA和MMSE评分均升高,且观察组高于对照组（均P＜0.05）。观察组患者临床总有效率显著高于对照组（90.67% vs 78.67%,χ² = 12.482,P＜0.001）。对照组和观察组患者的不良反应发生情况比较差异无统计学意义（χ² = 0.150,P = 0.699）。

tDCS联合益生菌治疗能够有效改善PSCI患者的认知功能和肠道菌群状态,且不良反应少,安全系数高,值得临床推广。

     

益生菌辅助四联疗法对H. pylori感染患者根治效果及肠道菌群的影响

研究益生菌辅助四联疗法对H. pylori感染患者根治效果及肠道菌群的影响。

选择2019年1月至2020年6月在我院接受治疗的160例H. pylori感染患者为研究对象,用随机数字表法分为对照组（n = 80）和观察组（n = 80）。对照组患者给予标准铋剂四联药物治疗,观察组加用双歧杆菌四联活菌片治疗。比较两组患者的H. pylori根除率、复发率、不良反应发生率、临床症状（上腹痛、上腹胀、嗳气、纳差）、肠道菌群（双歧杆菌、乳杆菌）和炎性因子[白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]水平。

观察组患者的H. pylori根除率（95.00%）高于对照组（82.5%）,复发率和不良反应发生率低于对照组（均P＜0.05）。治疗后两组患者的临床症状积分均显著下降,同时观察组患者上腹痛、上腹胀、嗳气、纳差等临床症状积分低于对照组（均P＜0.05）。治疗后观察组患者肠道双歧杆菌和乳杆菌数量升高,而对照组降低,同时观察组患者肠道双歧杆菌和乳杆菌数量高于对照组（均P＜0.05）。治疗后观察组患者IL-6、IL-8和TNF-α水平均低于对照组（均P＜0.05）。

双歧杆菌四联活菌片辅助标准铋剂四联疗法治疗可显著提高H. pylori感染患者H. pylori根除率,降低复发率和不良反应的发生率,改善肠道菌群分布,减轻患者的临床症状和炎症状态。

     

Probiotic characteristics and in vitro compatibility of a combination of Bifidobacterium breve M-16 V,Bifidobacterium longum subsp. infantis M-63 and Bifidobacterium longum subsp. longum BB536

The consumption of probiotic-based products has risen greatly in recent decades. Due to their probiotic characteristics, microorganisms such as lactobacilli and bifidobacteria are in daily use in the production of food supplements. In the present study, three bifidobacterial strains (Bifidobacterium breve M-16 V, Bifidobacterium longum subsp. infantis M-63 and Bifidobacterium longum subsp. longum BB536) were tested for growth compatibility, resistance to antimicrobial agents, antibacterial activity against pathogens, resistance to gastric acidity, bile salt hydrolysis and adhesion to the human intestinal epithelial cell line HT29. All of these strains were resistant to gentamycin, but none showed in vitro growth incompatibility or the presence of known resistance determinants. B. breve M-16 V had the best probiotic characteristics and, indeed, was the only strain possessing antibacterial activity against Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae. All strains were resistant to simulated gastric juice, while only B. longum subsp. longum BB536 and B. breve M-16 V showed a bile salt hydrolytic activity. Interestingly, a strong adhesion to HT29 cells was observed in all Bifidobacterium strains. In conclusion, B. breve M-16 V, B. longum subsp. longum BB536 and B. longum subsp. infantis M-63 showed several promising characteristics as probiotic strains.     

模拟人体胃肠道环境筛选益生乳杆菌

【目的】筛选具有益生特性的乳杆菌作为保健型酸奶的候选菌株。【方法】从健康人肠道和奶豆腐中分离筛选出耐受人工胃液的乳杆菌,对其进行体外益生特性(人工胃肠液耐受性、胆盐耐受性、抑菌活性及胆固醇降解能力)研究。【结果】从在乳杆菌分离培养基上有溶钙圈的41株菌株中筛选出5株耐酸、耐人工胃液较强的菌株,经16S rR NA基因测序鉴定,其中3株为乳杆菌,分别命名为植物乳杆菌Lp MT-3、植物乳杆菌Lp MT-5和唾液乳杆菌LsA F-7。在人工胃液中3株菌的耐受力均强于商品化的对照菌株LGG(鼠李糖乳杆菌GG);转入肠液4 h后直至26 h,Lp MT-5存活率基本稳定在45%左右,仅次于LGG。胆盐浓度为0.10%时,3株乳杆菌的耐胆盐能力均强于LGG;胆盐浓度为0.20%时,Lp MT-3和LsA F-7仍能存活。3株乳杆菌均具有抑菌活性,对粪肠球菌的抑制最明显,其次是金黄色葡萄球菌,对大肠杆菌、沙门氏菌的抑制作用较差。3株乳杆菌对胆固醇的清除效力依次为Lp MT-3LpM T-5Ls AF-7;清除率依次为Ls AF-7Lp MT-3LpM T-5。【结论】筛选出3株适应人体胃肠液环境、耐胆盐、抑菌及降胆固醇活力强的乳杆菌,可作为进一步开发新的益生菌产品和保健型酸奶的菌株。     

Cholesterol assimilation by lactic acid bacteria and bifidobacteria isolated from the human gut

The objective of this study was to evaluate the effect of human gut-derived lactic acid bacteria and bifidobacteria on cholesterol levels in vitro. Continuous cultures inoculated with fecal material from healthy human volunteers with media supplemented with cholesterol and bile acids were used to enrich for potential cholesterol assimilators among the indigenous bacterial populations. Seven potential probiotics were found: Lactobacillus fermentum strains F53 and KC5b, Bifidobacterium infantis ATCC 15697, Streptococcus bovis ATCC 43143, Enterococcus durans DSM 20633, Enterococcus gallinarum, and Enterococcus faecalis. A comparative evaluation regarding the in vitro cholesterol reduction abilities of these strains along with commercial probiotics was undertaken. The degree of acid and bile tolerance of strains was also evaluated. The human isolate L. fermentum KC5b was able to maintain viability for 2 h at pH 2 and to grow in a medium with 4,000 mg of bile acids per liter. This strain was also able to remove a maximum of 14.8 mg of cholesterol per g (dry weight) of cells from the culture medium and therefore was regarded as a candidate probiotic.     

一株替代粪肠球菌的生产用芽胞杆菌筛选及其性质

目的 筛选1株能够产业化、替代粪肠球菌的芽胞杆菌。方法 从健康鸡、鸭、仔猪的粪便与肠道内容物中筛选,采用选择性培养基和耐酸耐胆盐发酵,通过耐人工肠液和人工胃液试验与粪肠球菌比较得到1株产酸能力较好的替代粪肠球菌的芽胞杆菌,并对其性质进行研究。结果 所筛选的芽胞杆菌（GY0520）对人工胃液、人工肠液有很好耐受性,90 ℃水浴15 min存活率为97%,能够产生大量有机酸,有利于提高动物机体的抗病能力及改善其生理性能,但对抗生素有一定的敏感性,不能配伍使用。结论 所筛选的芽胞杆菌能够替代粪肠球菌用于生产,为养殖业的微生态产品提高稳定性提供参考。     

Novel probiotic Bifidobacterium longum subsp. infantis CECT 7210 strain active against rotavirus infections

Rotavirus is the leading cause of severe acute gastroenteritis among children worldwide. It is well known that breast-feeding and vaccination afford infants protection. Since breast-feeding has drastically decreased in developed countries, efforts have been focused on the potential use of probiotics as preventive agents. In this study, a novel Bifidobacterium longum subsp. infantis strain was isolated from infant feces and selected, based on its capacity to inhibit in vitro rotavirus Wa replication (up to 36.05% infectious foci reduction) and also to protect cells from virus infection (up to 48.50% infectious foci reduction) in both MA-104 and HT-29 cell lines. Furthermore, studies using a BALB/c mouse model have proved that this strain provides preliminary in vivo protection against rotavirus infection. The strain has been deposited in the Spanish Type Culture Collection under the accession number CECT 7210. This novel strain has the main properties required of a probiotic, such as resistance to gastrointestinal juices, biliary salts, NaCl, and low pH, as well as adhesion to intestinal mucus and sensitivity to antibiotics. The food safety status has been confirmed by the absence of undesirable metabolite production and in acute ingestion studies of mice. Overall, these results demonstrate that Bifidobacterium longum subsp. infantis CECT 7210 can be considered a probiotic able to inhibit rotavirus infection.     

五种益生菌在纤维固定化连续培养系统的共存定殖

模拟肠道的半固态生境, 建立以玉米纤维为载体的固定化连续搅拌培养系统、并以非固定化连续搅拌培养系统为对照, 稀释率为0.0417, 分别连续培养12 d, 双歧杆菌、酪酸菌、嗜酸乳杆菌、肠膜芽孢杆菌、粪肠球菌五种菌在两种系统中均可稳定共存, 固定化系统固相五种菌数均高于非固定化系统, 以双歧杆菌增幅最大, 半固态的固定化连续培养较液态连续培养的菌相与肠道菌相较一致, 能更好地模拟肠道微生态。扫描电镜观察五种菌在玉米纤维上固定形成了生物膜。     

五种益生菌在纤维固定化连续培养系统的共存定殖

模拟肠道的半固态生境,建立以玉米纤维为载体的固定化连续搅拌培养系统、并以非固定化连续搅拌培养系统为对照,稀释率为0.0417,分别连续培养12 d,双歧杆菌、酪酸菌、嗜酸乳杆菌、肠膜芽孢杆菌、粪肠球菌五种菌在两种系统中均可稳定共存,固定化系统固相五种菌数均高于非固定化系统,以双歧杆菌增幅最大,半固态的固定化连续培养较液态连续培养的菌相与肠道菌相较一致,能更好地模拟肠道微生态.扫描电镜观察五种菌在玉米纤维上固定形成了生物膜.     

蒙古族儿童源益生特性双歧杆菌的筛选及鉴定

【目的】双歧杆菌在人和动物胃肠道中发挥着重要的生理作用,然而双歧杆菌能否耐受胃酸、肠液及胆汁酸是影响活菌制剂益生效果的关键因素,本研究旨在从蒙古族儿童粪便中分离筛选出具有良好益生特性的双岐杆菌。【方法】本文采用双岐杆菌选择性培养基对样品进行分离纯化,并对菌株进行生理生化鉴定,以耐受人工胃肠液、耐受牛胆盐为手段对各菌株的益生特性进行评价,并且对B. animalisV9进行了16S rDNA分子生物学鉴定。【结果】本文从12位健康蒙古族儿童粪便中分离得到11株双歧杆菌,经传统生理生化试验鉴定为5株B. adolescentis：A1、H3、G4、A8、V10;3株B. longum：C6、C7、D11;1株B. pseudocatenlatum：B2;1株B. bifidum：G5;1株B. animalis：V9。B. animalis V9具有较强的耐酸性,在pH2.0的人工胃液中厌氧培养3h后存活率为92.4%,而其它10株双歧杆菌在此条件下的存活率均小于31.25%;B. animalis V9在pH2.0的人工胃液中厌氧培养3h后接入pH8.0的人工肠液中消化8h,存活率为99.7%,并且可以耐受0.3%的牛胆盐。进一步对V9菌株进行16S rDNA分子生物学鉴定,发现与Bifidobacterium animalis subsp. lactic BB12的同源性为99%。【结论】本研究结果显示B. animalis V9来源安全,并且具有良好耐酸、耐胆盐益生特性,有望在乳制品及保健类产品中得到广泛的应用。     

双歧杆菌地高辛标记寡核苷酸基因探针制备和应用研究

目的探讨地高辛标记寡核苷酸基因探针应用于微生态研究的可行性和实用性。方法制备双歧杆菌属和部分种的地高辛标记16S rRNA寡核苷酸探针,初步应用于微生态制剂鉴定和临床肠道微生态检测,评价寡核苷酸探针杂交在肠道微生态研究和检测中的应用价值。结果地高辛标记寡核苷酸探针具有较好的特异性与灵敏度：地高辛标记的双歧杆菌属和种的共6种寡核苷酸基因探针与标准菌株杂交后灵敏度和特异度分别为属探针95％、75％,青春双歧87．5％、90％,两歧双歧87．5％、87．5％,短双歧87．5％、92．5％,婴儿双歧75％、95％,长双歧75％、100％。结论寡核苷酸基因探针用于肠道细菌的鉴定显示出一定前景,加大探针的种类与扩大调查范围有可能使该技术替代现有细菌培养技术。