低聚果糖对AOM/DSS诱导的结肠炎相关结直肠癌小鼠辅助性T细胞的调控作用

探讨益生元低聚果糖（FOS）对结肠炎相关结直肠癌（CAC）小鼠肠道辅助性T细胞的调节作用。

将6周龄SPF级雄性C57BL6小鼠（体重18～20 g）随机分为对照组、模型组和干预组,每组10只。通过偶氮甲烷、葡聚糖硫酸钠构建CAC小鼠模型,干预组每日使用2 mg/kg b.w. FOS灌胃,持续10周。造模期间监测各组小鼠体重变化,造模结束后测量结肠长度和肿瘤数目。采用微球免疫分析法检测血清Th1/Th2/Th17相关细胞因子水平,流式细胞术分析肠系膜淋巴结内Th1、Th2、Th17细胞亚群比例。

与模型组相比,干预组小鼠结肠长度显著增加（t=3.106,P=0.006 4）,肿瘤数目显著减少（U=15.000,P=0.011 1）,血清中IL-17A（t=3.504,P=0.008 8）、TNF-α（t=2.381,P=0.030 0）等促炎细胞因子水平降低,肠系膜淋巴结Th17细胞比例显著降低（t=6.031,P=0.002 7）,Th1/Th2显著升高（t=2.419,P=0.038 7）。

FOS可调控CAC模型小鼠结肠内辅助性T细胞的分化,抑制肿瘤的发生。

     

杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品对小鼠免疫功能的影响

研究杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115（Lacticaseibacillus paracasei N1115）发酵乳饮品对小鼠免疫脏器指数、免疫球蛋白、巨噬细胞、NK细胞、B淋巴细胞及T淋巴细胞的影响。

将SPF级6～8周龄雄性Balb/c小鼠随机分为对照组以及杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品低、中、高剂量组,每组15只,连续灌胃30 d,进行免疫脏器指数测定、免疫球蛋白测定、碳廓清能力测定、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、NK细胞活性测定、脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应、血清溶血素测定和抗体细胞生成实验。

杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品低、中、高剂量组的小鼠碳廓清指数显著高于对照组（t = 3.926 2,P = 0.000 7;t = 6.000 1,P＜0.000 1;t = 5.314 4,P＜0.000 1）,腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率显著高于对照组（t = 3.812 1,P = 0.001 5;t = 4.257 2,P = 0.000 4;t = 4.976 3,P = 0.000 5）。

杀菌型副干酪乳酪杆菌N1115发酵乳饮品具有增强小鼠非特异性免疫力的功能,可为副干酪乳酪杆菌N1115的开发利用提供科学依据。

     

氨基酸型肠内营养制剂支持后克罗恩病患者肠道微生物和非靶向代谢组学指标的分析

探讨氨基酸型肠内营养制剂支持后克罗恩病患者的肠道微生物和非靶向代谢组学指标的变化,为该类患者的治疗提供参考。

选择我院收治的20例克罗恩病活动期患者作为研究对象,所有患者均采用氨基酸型肠内营养制剂进行支持治疗。比较患者治疗前后肠道菌群结构、菌群多样性以及非靶向代谢组学检测结果的差异。

治疗后,患者肠道乳杆菌属（t=5.200,P＜0.001）、大肠埃希菌（t=11.974,P＜0.001）、克雷伯菌属（t=15.033,P＜0.001）、糖单胞菌（t=12.166,P＜0.001）、恶臭假单胞菌（t=31.063,P＜0.001）、肠球菌属（t=28.867,P＜0.001）数量均显著升高;同时患者肠道菌群OUTs（t=40.435,P＜0.001）、Observed species（t=5.475,P＜0.001）、Chao1指数（t=12.348,P＜0.001）、Simpson指数（t=2.961,P=0.005）、Shannon指数（t=3.330,P=0.002）均显著升高。相比治疗前,治疗后患者血清以及粪便中的氨基酸、多肽、脂肪酸、胆固醇及碳水化合物水平均显著改善。

氨基酸型肠内营养制剂支持后,克罗恩病患者肠道菌群丰度提高,同时患者脂质代谢的改善可能与氧化应激反应通路相关联。

     

红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响

探讨红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响,为从微生态角度研究红茶在人体肠道菌群形成过程中的作用机制奠定基础。

利用宏基因组测序技术检测4周龄新生幼鼠（4weeks组,n = 30）、12周龄正常对照组小鼠（control组,n = 15）和12周龄喂饲红茶水实验组小鼠（teadrink组,n = 15）的肠道菌群分布,分析3组样本的菌群差异情况,探求红茶对新生幼鼠肠道菌群形成的影响。

与control组相比,teadrink组小鼠肠道拟杆菌门（t = −7.711,P＜0.001）、拟杆菌科（t = −3.411,P = 0.009）、长尾嗤菌体科（t = −2.515,P = 0.036）、拟杆菌属（t = −2.693,P = 0.027）、邓肯菌属（t = −2.434,P = 0.041）、居海事城球杆菌属（t = −3.327,P = 0.029）、迪博邓肯菌（t = −2.679,P = 0.028）、普通居海事城球杆菌（t = −3.401,P = 0.027）和Duncaniella_sp._C9（t = −3.104,P = 0.035）相对丰度显著增加,厚壁菌门（t = 8.952,P＜0.001）、乳杆菌科（t = 13.102,P＜0.001）、消化链球菌科（t = 3.665,P = 0.021）、爱格菌科（t = 4.481,P = 0.002）、理研菌科（t = 3.626,P = 0.022）、乳杆菌属（t = 5.542,P = 0.004）、黏液乳杆菌属（t = 6.334,P = 0.002）、龙包茨菌属（t = 3.785,P = 0.005）、阿德勒菌属（t = 4.504,P = 0.002）、约氏乳杆菌（t = 4.282,P = 0.011）和罗伊氏粘液乳杆菌（t = 6.156,P = 0.003）相对丰度显著减少。与4weeks组相比,teadrink组小鼠肠道菌群分布差异大于control组。

红茶对新生幼鼠肠道菌群的形成能够产生影响,不同丰度的菌群可能通过调节碳水化合物代谢等途径来达到改善肠道菌群结构、增强肠道稳态的目的,具体代谢机制有待深入研究。

     

靛蓝对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群作用研究

研究靛蓝对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的溃疡性结肠炎（UC）模型小鼠的干预作用,并分析对小鼠肠道菌群的影响。

实验小鼠分为对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶组（125 mg/kg）和靛蓝组（50 mg/kg),每组小鼠各9只。观察给药后小鼠体征并进行疾病活动指数（DAI）评分,通过苏木素―伊红（HE）染色观察小鼠结肠组织切片形态变化,ELISA法检测小鼠血清中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-10水平;针对16S rRNA基因V4‒V5区进行高通量测序,分析小鼠肠道内容物的菌群变化。

与模型组相比,靛蓝组小鼠DAI评分降低,病理切片结果显示靛蓝可改善UC小鼠结肠黏膜损伤,减少炎性细胞浸润,血清中促炎因子IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α水平显著降低（t = 4.377 0、5.374 0、12.140 0、5.508 0,P = 0.011 9、0.005 8、0.000 3、0.005 3）,抑炎因子IL-10水平显著升高（t = 3.716 0,P = 0.020 5）。16S rRNA基因测序结果显示,模型组小鼠肠道菌群多样性降低,靛蓝组小鼠肠道菌群多样性升高。

给予靛蓝干预后可有效缓解UC小鼠结肠炎症状,通过降低炎症因子水平和调节UC小鼠肠道菌群平衡达到治疗UC的效果。

     

鸟苷酸环化酶C激动剂对便秘小鼠肠道菌群的影响

通过动物模型和16S rDNA高通量测序,探究鸟苷酸环化酶C（guanylate cyclase C,GC-C）激动剂（利那洛肽）对便秘的治疗作用和肠道菌群的影响,以期为便秘的治疗提供理论依据。

随机将30只雄性C57BL/6小鼠平均分为对照组、便秘模型组及治疗组,每组10只。其中对照组小鼠给予生理盐水灌胃,便秘模型组和治疗组小鼠给予洛哌丁胺灌胃构建便秘模型,造模成功后治疗组小鼠给予GC-C激动剂灌胃。干预结束后检测各组小鼠粪便含水率、首粒黑便排出时间、小肠推进率以及血清中P物质（Substance P,SP）、血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）水平;使用16S rDNA高通量测序分析3组小鼠肠道菌群特点和差异。

与便秘模型组相比,治疗组小鼠粪便含水量、小肠推进率显著提升（t = 3.418,P = 0.003 1;t = 3.141,P = 0.005 6）,首粒黑便排出时间缩短（t = 4.756,P = 0.000 2）;血清VIP水平降低（t = 4.894,P = 0.000 5）,SP水平有升高趋势。与对照组相比,便秘模型组小鼠肠道菌群多样性显著降低,门水平上,Firmicutes丰度升高和Bacteroidetes丰度降低;属水平上,便秘模型组小鼠Muribaculaceae、Lachnospiraceae、Akkermansia丰度降低（均P＜0.050 0）,Allobaculum、Turicibacter、Clostriclium丰度升高（均P＜0.001 0）,通过GC-C激动剂干预可以改善便秘引起的菌群改变,并显著提高了Lactobacillus丰度（P = 0.030 5）。

GC-C激动剂可能通过影响血清中SP、VIP水平,并调节便秘小鼠的肠道菌群趋于正常,增加Lactobacillus、Muribaculaceae等产短链脂肪酸菌群丰度,提高肠道动力,从而起到改善便秘的作用。

     

乳杆菌及双歧杆菌缓解便秘的机制

探讨可改善患者便秘症状的植物乳植杆菌LP45、嗜酸乳杆菌La28和动物双歧杆菌乳亚种BAL531的作用机制。

采用HT-29细胞与肠道菌群体外批量发酵系统结合的方法,检测益生菌增殖肠上皮细胞、提升肠道紧密连接性与黏膜屏障能力以及增强五羟色胺转运体（SERT）、水通道蛋白-3（AQP-3）表达的能力。

菌株LP45和BAL531均具有较好的黏附能力并能够增殖肠上皮细胞,菌株La28无增殖作用;菌株LP45、La28和BAL531能显著提升紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的mRNA相对表达水平,最高达2.73倍（t = 13.099,P＜0.001）,从而增强肠道屏障。菌株LP45使黏蛋白（MUC2）mRNA相对表达量显著提升1.89倍（t = 10.285,P = 0.001）,菌株La28与BAL531无显著影响;菌株LP45、La28和BAL531使SERT mRNA相对表达量分别提升2.13倍、1.45倍和4.00倍,其中菌株BAL531效果最显著（t = 21.308,P＜0.001）;另外,菌株LP45可使AQP-3 mRNA相对表达量提升2.12倍（t = 10.625,P＜0.001）,菌株BAL531使AQP-3 mRNA相对表达量下调0.79倍（t = ‒2.611,P = 0.059）,菌株La28无显著影响（t = ‒0.951,P = 0.395）。

菌株LP45、La28和BAL531对便秘症状的缓解作用可能是通过特异性增加肠道润滑、促进肠道蠕动、减缓肠道水液吸收等不同机制实现的。

     

黄连素和黄芩苷不同配伍对肠道细菌体外生长的影响

研究不同配伍的黄连素和黄芩苷在模拟肠道厌氧环境下对肠道内有害菌、条件致病菌和益生菌体外生长的影响。

采用微量肉汤稀释法测定黄连素和黄芩苷不同配伍对肠道内金黄色葡萄球菌、沙门菌、肠炎链球菌、大肠埃希菌、乳杆菌及嗜黏蛋白阿克曼菌体外生长24 h后吸光度的影响。

对于金黄色葡萄球菌,抑制作用最强的是黄连素∶黄芩苷 = 10∶1（组合六）125 μg/mL（t = –39.350,P＜0.001）,抑制率为99.91%;对于沙门菌,抑制作用最强的是黄连素∶黄芩苷 = 100∶1（组合七）250 μg/mL（t = –73.788,P＜0.001）,抑制率为80.47%;对于肠炎链球菌,抑制作用最强的是黄连素∶黄芩苷 = 1∶0（组合一）250 μg/mL（t = –57.549,P＜0.001）;对于大肠埃希菌,抑制作用最强的是黄连素∶黄芩苷 = 1∶0（组合一）125 μg/mL（t = –29.085,P＜0.001）;对于乳杆菌,增殖作用最强的是黄连素∶黄芩苷 = 100∶1（组合七）31.25 μg/mL（t = 76.280,P＜0.001）;对于嗜黏蛋白阿克曼菌,增殖作用最强的是黄连素∶黄芩苷 = 100∶1（组合七）62.5 μg/mL（t = 8.357,P＜0.001）。

黄连素∶黄芩苷 = 10∶1（组合六）、黄连素∶黄芩苷 = 100∶1（组合七）对有害菌的抑制作用更强,黄连素∶黄芩苷 = 100∶1（组合七）对益生菌的增殖作用更强,而黄连素和黄芩苷联合使用对条件致病菌的抑制作用较弱。

     

高校女性日常能耗与肠道菌群的相关性研究

探讨高校女性日常能耗及肠道菌群结构特征,分析不同能耗指标与特征肠道菌群之间的相关性。

基于智能可穿戴设备人体运动能耗检测仪对广州两所大学的青年女性（Y组,n=30）、中年女性（M组,n=30）进行48 h能耗监测,统计分析日常能耗的组间差异。采集调查对象清晨粪便进行16S rRNA基因测序,运用多元统计学分析中青年女性肠道菌群结构特征。将目、属水平的特征菌群与能耗指标进行相关性检验及回归分析。

Y组人群的日均步数（t=4.250,P＜0.001）、每日能耗值（t=3.590,P＜0.001）、日均中高强度活动时长（t=4.357,P＜0.001）均显著高于M组;两组人群肠道菌群的目、属水平的丰度差异菌群主要为乳杆菌目（Lactobacillales）（t=2.537,P=0.014）、小杆菌属（Dialister）（t=2.904,P=0.005）、布劳特菌属（Blautia）（t=3.246,P=0.002）,其中Lactobacillales和Dialister与多项能耗指标呈正相关,Blautia与多项能耗指标呈负相关。

日均步数、每日能耗值、日均中高强度活动时长的能耗指标可用于预测更好的身体机能;一定条件下,增加低、中、高强度活动时长可能提高Lactobacillales和Dialister的丰度,进而延缓身体机能下降。

     

Collinsella aerofaciens对高脂饮食小鼠糖脂代谢及肠道菌群的影响

从人粪便中分离Collinsella aerofaciens,并给予正常和高脂饮食的C57BL/6J小鼠,观察Collinsella aerofaciens对小鼠糖脂代谢及肠道菌群结构的影响。

将40只C57BL/6J雄性小鼠随机分成正常饮食组（NCD组）、正常饮食+菌液组（NCD+B组）、高脂饮食组（HFD组）和高脂饮食+菌液组（HFD+B组）,每组10只。NCD组和HFD组给予100 μL的生理盐水,其余组给予Collinsella aerofaciens 1×10⁹ CFU/mL,连续灌胃12周。第0、4、8和12周通过试剂盒检测空腹血糖（FBG）、随机血糖（GLU）、总胆固醇（TC）和三酰甘油（TG）水平。第12周,对各组小鼠进行口服糖耐量和胰岛素耐量试验,并检测血浆高、低密度脂蛋白胆固醇（HDL-C、LDL-C）水平。收集小鼠粪便,采用高通量测序技术检测16S rRNA V3‒V4区序列,分析肠道菌群结构变化。

第8和12周4组小鼠间TC水平差异有统计学意义（F = 132.424,P＜0.001;F = 107.601,P＜0.001）,与NCD组相比,NCD+B组小鼠TC水平显著升高（P＜0.050）;与HFD组相比,HFD+B组小鼠TC水平显著升高（P＜0.050）。4组小鼠间HDL-C和LDL-C水平差异有统计学意义（F = 7.809,P＜0.001;F = 41.521,P＜0.001）,与NCD组相比,NCD+B组小鼠HDL-C水平显著降低（P＜0.050）,LDL-C水平显著升高（P＜0.050）;与HFD组相比,HFD+B组小鼠LDL-C水平显著升高（P＜0.050）。Spearman相关性分析发现小鼠肠道中Desulfovibrionaceae丰度与FBG、GLU、TC和LDL-C水平呈正相关（r = 0.512,P = 0.011;r = 0.445,P = 0.029;r = 0.728,P＜0.001;r = 0.758,P＜0.001）。

人粪便中分离的Collinsella aerofaciens可以影响小鼠糖脂代谢,可能与其破坏肠道菌群平衡有关,同时为防治血糖血脂异常代谢提供靶点。

     

氯化两面针碱对小鼠溃疡性结肠炎的干预作用及其机制*

目的:探讨氯化两面针碱(NC)通过靶向miR-31对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发小鼠结肠炎的保护作用及其机制。方法:用1%DSS诱发小鼠溃疡性结肠炎(UC)。30只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(Control)(n=7),DSS组(n=8),DSS+NC组(7.27 mg/kg)(n=8)和NC组(n=7),饮水给予DSS,灌胃给予氯化两面针碱。造模周期为3周,分别为Control组和NC组每天饮用无菌水,DSS组和DSS+NC组第一周饮用1% DSS水,第2周正常饮水,第3周1% DSS水。造模最后一周给予Control组和DSS组小鼠0.5% 羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃,DSS+NC组和NC组给予NC灌胃。造模完成后,观察小鼠结肠炎相关的疾病活动指数(DAI),HE染色进行结肠组织病理评分,qPCR检测小鼠结肠组织miR-31的表达水平,Western blot检测小鼠结肠组织炎症蛋白NF-κB和COX-2的表达情况。结果:①与DSS组相比,DSS+NC组的 DAI 显著降低(P＜0.01),结肠病理损伤明显改善;②与Control组相比,DSS组小鼠结肠组织miR-31表达显著升高(P＜0.01),DSS+NC组miR-31的表达水平显著低于DSS组(P＜0.05);③与DSS组相比,DSS+NC组中的炎症蛋白NF-κB和COX-2表达水平显著下降(P＜0.05)。结论:氯化两面针碱对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎有明显的治疗作用,其抗炎机制与下调miR-31的表达有关。     

整肠生对溃疡性结肠炎小鼠肠上皮屏障的保护作用

目的 探讨整肠生对溃疡性结肠炎小鼠肠道紧密连接蛋白表达以及对氧化应激反应的影响。方法 选用雄性8~10周龄C57BL/6小鼠40只,随机分为4组：对照组、模型组（3% DSS）、5-ASA组（3% DSS+5-ASA 200 mg/kg灌胃）和整肠生组（3% DSS+联合整肠生及5-ASA灌胃）,每组10只,造模7 d。观察各组小鼠便血程度、组织学损伤情况,通过投射电镜观察各组肠道上皮间紧密连接改变情况,应用Western blot和RT-PCR的方法,检测小鼠结肠黏膜紧密连接蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-2的表达情况。结果 （1）与模型组比较,5-ASA组和整肠生组小鼠便血程度明显减轻,DAI评分显著降低（P<0.05）。整肠生组与5-ASA组比较,便血减轻,DAI评分降低（P<0.05）。（2）电镜显示,对照组肠上皮间紧密连接呈一条致密条带,结构完整,见细胞桥粒,微绒毛光滑、排列整齐,细胞间隙狭窄;模型组肠上皮间紧密连接结构松散、模糊、密度降低,桥粒结构消失,微绒毛稀疏,短缩且长短不一,细胞间隙增宽;各治疗组的紧密连接的破坏情况较模型组有不同程度的改善,整肠生组紧密连接清晰,细胞间隙缩窄,微绒毛排列整齐,出现细胞桥粒。（3）应用Western blot和Real time-PCR法检测,与正常组相比,模型组Occludin、ZO-1蛋白和mRNA表达显著下降,Claudin-2表达显著上调（P<0.05）;各治疗组较模型组Occludin、ZO-1蛋白表达上调,Claudin-2蛋白表达下调（P<0.05）,整肠生组较单用5-ASA组更明显提高Occludin、ZO-1蛋白和mRNA表达。（4）与正常组相比,模型组MDA含量增高,SOD活性降低,与5-ASA组相比,整肠生组能更显著地降低MDA含量,提高SOD活性（P<0.05）。结论 联合应用整肠生通过调节紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达和降低氧化应激反应,来改善溃疡性结肠炎小鼠肠上皮屏障功能。     

粪菌移植对小鼠实验性结肠炎TLR4信号通路及肠黏膜屏障的影响

目的探讨粪菌移植(FMT)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠黏膜屏障的影响及可能机制。方法小鼠饮用2.0%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液构建小鼠UC模型;50只成年雄性C57BL/6J小鼠,随机留取10只取粪便(这10只不参与后续的实验),其余40只称重、编号,随机分为空白对照组(Con组)、DSS模型对照组(Model组)、美沙拉嗪组(Model+5-ASA组)和粪菌液组(Model+FMT组),每组10只,Con组和Model组均给予0.9%NaCl溶液灌肠,给药组分别给予美沙拉嗪、粪便滤液灌肠;评估疾病活动指数(DAI)、各组结肠组织病理情况,用透射电镜检测各组小鼠的结肠黏膜上皮细胞结构的变化情况,ELISA检测各组血清内毒素、炎症因子TNF-α水平变化,免疫组化法检测结肠组织Toll样受体4(TLR4)及核因子-κB(NF-κB)的表达变化,Western blot检测各组ZO-1蛋白表达。结果与Model组相比,粪菌移植明显改善小鼠的DAI指数和结肠组织的病理损伤,结肠上皮细胞间隙增宽程度减轻,腺上皮细胞间连接较紧密,结肠黏膜上皮细胞微绒毛完整,排列整齐,内毒素、TNF-α的含量明显下降,TLR4及NF-κB在结肠组织的表达明显下降,ZO-1蛋白表达明显升高,促进结肠黏膜屏障的修复,差异具有统计学意义(t=7.9543,P<0.0001;t=3.7641,P=0.0010;t=4.5899,P=0.0020;t=13.2886,P<0.0001;t=4.9750,P=0.0010;t=6.9388,P<0.0001;t=8.3744,P<0.0001)。结论FMT可减少内毒素及炎症因子的产生,改善结肠炎症,TLR4-NF-κB信号通路可能是FMT修复结肠黏膜屏障功能的机制之一。     

UNC5B receptor deletion exacerbates DSS‐induced colitis in mice by increasing epithelial cell apoptosis

The netrin-1 administration or overexpression is known to protect colon from acute colitis. However, the receptor that mediates netrin-1 protective activities in the colon during colitis remains unknown. We tested the hypothesis that UNC5B receptor is a critical mediator of protective function of netrin-1 in dextran sodium sulfate (DSS)-induced colitis using mice with partial deletion of UNC5B receptor. DSS colitis was performed in mice with partial genetic UNC5B deficiency (UNC5B^+/− mice) or wild-type mice to examine the role of endogenous UNC5B. These studies were supported by in vitro models of DSS-induced apoptosis in human colon epithelial cells. WT mice developed colitis in response to DSS feeding as indicated by reduction in bw, reduction in colon length and increase in colon weight. These changes were exacerbated in heterozygous UNC5B knockout mice treated with DSS. Periodic Acid-Schiff stained section shows damages in colon epithelium and mononuclear cell infiltration in WT mice, which was further increased in UNC5B heterozygous knockout mice. This was associated with large increase in inflammatory mediators such as cytokine and chemokine expression and extensive apoptosis of epithelial cells in heterozygous knockout mice as compared to WT mice. Overexpression of UNC5B human colon epithelial cells suppressed DSS-induced apoptosis and caspase-3 activity. Moreover, DSS induced large amount of netrin-1 and shRNA mediated knockdown of netrin-1 induction exacerbated DSS-induced epithelial cell apoptosis. Our results suggest that UNC5B is a critical mediator of cell survival in response to stress in colon.     

过表达miR-31对结肠炎模型小鼠TLR4/NF-κB信号通路及凋亡蛋白的调控

目的: 探讨miR-31对DSS诱发结肠炎小鼠TLR4/NF-κB信号通路和凋亡相关蛋白的影响。方法: ①小鼠结肠炎实验:用1%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发小鼠溃疡性结肠炎(UC)。14只FVB非转基因小鼠随机分为control组(n=6),DSS组(n=8),16只FVB miR-31转基因小鼠随机分为miR-31过表达组(n=8),miR-31过表达+DSS 组(n=8),DSS溶于水后通过饮水给予小鼠。DSS组和miR-31+DSS组第一周饮用1%DSS水,第二周饮用正常无菌水,第三周饮用1%DSS水,如此5周后造模完成,之后留取小鼠的结肠组织,通过Western blot和IHC检测小鼠结肠组织NF-κB p65、TLR4、Bax、Bcl-2蛋白的表达;TUNEL检测小鼠结肠组织细胞凋亡。②细胞培养实验:在人结肠上皮细胞系HCT 116细胞中通过脂质体转染的方法转染miR-31 mimic和inhibitor,使miR-31过表达或敲低,每组均进行三次重复,48 h后收取细胞,通过Western blot检测NF-κB p65、TLR4蛋白的表达。结果: ①动物实验中,与control组相比,小鼠结肠组织中DSS组和miR-31过表达组NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平和凋亡细胞指数均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.05或P＜0.01);且与DSS组相比,miR-31+DSS组NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平和凋亡细胞指数也显著升高(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.01)。②细胞实验中,与control组相比, HCT 116细胞过表达miR-31组的NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),敲低miR-31组的NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平下降(P＜0.05)。结论: miR-31通过促进TLR4/NF-κB信号通路和介导肠上皮细胞凋亡促进结肠炎的发展。     

Infection with a helminth parasite prevents experimental colitis via a macrophage-mediated mechanism

The propensity of a range of parasitic helminths to stimulate a Th2 or regulatory cell-biased response has been proposed to reduce the severity of experimental inflammatory bowel disease. We examined whether infection with Schistosoma mansoni, a trematode parasite, altered the susceptibility of mice to colitis induced by dextran sodium sulfate (DSS). Mice infected with schistosome worms were refractory to DSS-induced colitis. Egg-laying schistosome infections or injection of eggs did not render mice resistant to colitis induced by DSS. Schistosome worm infections prevent colitis by a novel mechanism dependent on macrophages, and not by simple modulation of Th2 responses, or via induction of regulatory CD4+ or CD25+ cells, IL-10, or TGF-beta. Infected mice had marked infiltration of macrophages (F4/80+CD11b+CD11c(-)) into the colon lamina propria and protection from DSS-induced colitis was shown to be macrophage dependent. Resistance from colitis was not due to alternatively activated macrophages. Transfer of colon lamina propria F4/80+ macrophages isolated from worm-infected mice induced significant protection from colitis in recipient mice treated with DSS. Therefore, we propose a new mechanism whereby a parasitic worm suppresses DSS-induced colitis via a novel colon-infiltrating macrophage population.     

Akkermansia muciniphila在结肠炎相关结肠癌中的作用和机制

探究Akkermansia muciniphila在结肠炎相关结肠癌中的作用以及Akkermansia muciniphila通过影响肠道黏膜屏障延缓结肠炎癌变的机制。

C57BL/C小鼠共30只,分为对照组、结肠炎相关结肠癌组、结肠炎相关结肠癌+AKK组,每组10只,在建模结束后采用断头法处死小鼠,HE染色检测结肠病理结构,计算成瘤率。采用ELISA法检测3组小鼠结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平,免疫荧光双染法检测3组小鼠ZO-1和E-cadherin的表达情况,免疫组化法检测3组小鼠结肠组织Occludin-1、N-cadherin、GPCR41、GPCR43、Bcl-2、 Bax等蛋白的水平,GC-MS法检测3组小鼠短链脂肪酸的水平。

HE发现结肠炎相关结肠癌组小鼠的结肠组织炎症浸润,肠腺水肿,存在不同程度的异型增生,结肠炎相关结肠癌+AKK组小鼠的结肠水肿和出血减轻,肠腺结构清晰。结肠炎相关结肠癌组中小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平（pg/mL）（9.12±0.36、6.36±0.42、45.20±3.63）较对照组（3.80±0.38、0.06±0.89、2.10±0.14）升高（Tamhane’s T2分别为0.001、2.549、12.831,均P＜0.05）,经Akkermansia muciniphila灌胃后,IL-1β、IL-6、TNF-α水平（3.92±0.19、3.54±1.28、18.20±8.47）下降（Tamhane’s T2分别为6.553、2.414、5.743,均P＜0.05）。免疫荧光双染法显示ZO-1 和 E-cadherin主要定位在结肠柱状上皮和肠腺,结肠炎相关结肠癌组ZO-1和E-cadherin的表达（ng/mL）（0.04±0.01、0.34±0.55）比对照组（0.10±0.18、0.48±0.13）降低（Tamhane’s T2分别为0.681、4.379,均P＜0.05）,而经Akkermansia muciniphila处理后显著上调小鼠结肠的ZO-1 和 E-cadherin的表达（0.08±0.05、1.08±0.28）（Tamhane’s T2分别为7.059、5.873,均P＜0.05）。免疫组化显示结肠炎相关结肠癌组Occludin-1、GPCR41、GPCR43、Bcl-2表达（ng/mL）（0.36±0.06、0.48±0.13、0.38±0.13、0.34±0.55）较对照组（1.08±0.08、0.74±0.06、0.48±0.13、1.64±0.11）减低（LSD-t分别为2.369、0.304、8.119、2.298,均P＜0.05）,Bax表达（ng/mL）（1.34±0.27）较对照组（0.48±0.13）增加（LSD-t为7.727,P＜0.05）,与结肠炎相关结肠癌组相比,结肠炎相关结肠癌+AKK组小鼠的Occludin-1、GPCR41、GPCR43、Bcl-2表达（0.84±0.06、0.60±0.19、1.08±0.08、1.08±0.28）上调（LSD-t分别为1.153、4.111、9.472、5.873,均P＜0.05）,Bax表达（0.34±0.58）下调（LSD-t为8.785,P＜0.05）。短链脂肪酸检测结果显示,结肠炎相关结肠癌组丙酸丙酯水平（μg/mg）（0.000066±0.000025）较对照组（0.000244±0.000035）下降（LSD-t为7.448,P＜0.05）,而经Akkermansia muciniphila干预后,结肠炎相关结肠癌+AKK组的丙酸丙酯水平（0.000276±0.000049）上升（LSD-t为8.779,P＜0.05）,3组中戊酸丙酯、异己酸丙酯、己酸丙酯的水平差异均无统计学意义。

Akkermansia muciniphila可降低结肠炎相关结肠癌小鼠IL-1β、IL-6、TNF-α水平,可能通过短链脂肪酸介导GPCR调控ZO-1、E-cadherin、Occludin-1等结肠紧密连接蛋白的表达,增强结肠的黏膜屏障,从而降低结肠炎相关癌变的发展进程。

     

卵泡抑素样蛋白1在实验性结肠炎的表达及其意义

目的:溃疡性结肠炎病因和发病机制目前尚不明确,抗炎与促炎因子的失衡可能在UC的发生发展中起到一定的作用。卵泡抑素-1是一种具有广泛糖基化修饰的分泌糖蛋白,目前的研究倾向于是一种炎性蛋白。本研究检测溃疡性结肠炎小鼠模型结肠标本中FSTL1的表达,分析探讨FSTL1在溃疡性结肠炎发病的中的作用。方法:20只BALB/c小鼠均分为对照组、模型组。模型组予以4%DSS喂养一周,对照组予以普通饮水一周,监测小鼠疾病症状,对小鼠疾病活动指数DAI进行评分。观察FSTL1在结肠黏膜组织中的表达,检测结肠组织FSTL1蛋白及FSTL1 mRNA表达水平,对FSTL1表达与小鼠疾病活动指数DAI进行相关性分析。采用t检验及Pearson相关分析,进行统计分析。结果:HE染色显示模型组病变主要累及黏膜及黏膜下层,可见大量炎性细胞浸润,以中性粒细胞为主,部分表面上皮脱落,上皮内杯状细胞减少,隐窝破坏;FSTL1蛋白表达于肠黏膜腺体间质,模型组表达高于正常对照组,分别为(2.9±1.44)和(0.6±0.51),具有显著性差异,P0.0l;实验组结肠FSTL1 mRNA平均表达水平(1.57±0.23)较对照组(0.46±0.22)明显增加,(t=10.84,P0.05)。结肠组织FSTL1mRNA表达水平与小鼠DAI成正相关,相关系数为r=0.850,P0.05。结论:研究中发现溃疡性结肠炎小鼠模型中FSTL1表达较正常对照组明显升高,且与小鼠DAI成正相关。提示FSTL1可能与实验性结肠炎的发生发展有一定的相关性,可能可以作为预测溃疡性结肠炎活动度的新的炎性标记物应用。     

Suppressive activity of a fermented grain food product on dextran sulfate sodium-induced experimental colitis in mice

Oxidative stress has been shown to play pivotal roles in the onset of inflammatory bowel disease. We evaluated the effects of a dietary anti-oxidant, Antioxidant Biofactor (AOB), a processed grain food, on dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis in mice. Female ICR mice were fed a diet containing 0.1% or 1% AOB for 2 weeks, during which they were given 5% DSS in drinking water for the latter 1 week to induce colitis. A diet containing 1% AOB, but not that with 0.1% AOB, attenuated DSS-induced body weight loss and colon shortening (each, P < 0.05), and dramatically improved colitis histologic scores. In addition, DSS-induced increases in colonic mucosal IL-1beta, but not TNF-alpha, protein levels were significantly abrogated in 1% AOB-fed mice (P < 0.05). Further, 1% dietary AOB abolished the expression of IL-1beta mRNA levels in colonic mucosa (P < 0.01). Our results suggest that AOB is effective for the prevention of DSS-induced colitis in mice.