云南野生油菜RAPD反应体系的优化

针对RAPD反应体系中Mg2+、dNTPs、引物等3个主要影响因素,设计了一组3因素3水平试验。筛选出了云南野生油菜RAPD反应优化体系。即Mg2+浓度为1.25mmol/L、dNTPs浓度为0.15mmol/L、引物浓度为0.5umol/L。     

白色念珠菌RAPD反应体系优化的研究

建立白色念珠菌RAPD的最佳反应体系,并应用于其基因组DNA扩增。通过单因子试验分别研究了Mg^2＋、dNTPs、Taq酶、引物和模板DNA等浓度对RAPD反应的影响;同时,应用L16（4^5）正交试验研究了DNA模板、Mg^2＋、Taq酶、dNTPs和引物浓度对RAPD反应的影响。以条带稳定、丰富、清晰为标准,获得了白色念珠菌基因组DNA的RAPD扩增优化条件;对于白色念珠菌的最适RAPD反应体系为Mg^2＋1．5mmol／L、dNTPs250μmol／L、引物0．6μmol／L、模板100ng／25μL、TaqDNA聚合酶1．5U／25μL。     

井冈山血水草种群遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD技术对江西省井冈山5个血水草种群进行了遗传多样性研究。从50条随机引物中筛选出16条随机引物对血水草的90个个体进行了扩增,共得到180条可统计条带,其中156条为多态带,占总条带数的85.56%。根据Shannon指数和Nei’s遗传分化指数分析显示5个种群间的遗传多样性为31.50%、遗传分化系数为0.302 9,表明血水草大部分遗传变异存在于种群内,少部分存在种群间。血水草的基因流（Nm）为1.150 8。采用算数平均数的非加权成组配对法（UPMGA）对Nei’s的一致度进行的聚类分析结果显示梨坪种群和水口种群的遗传距离最近（0.120 9）,茨坪种群和荆竹山种群的遗传距离最远（0.234 9）。Mantel相关性分析结果显示血水草种群间的遗传距离不仅与海拔梯度有关,还与其生境有关。     

桔梗RAPD反应体系的优化

以通化桔梗为材料,用改进的CTAB法提取桔梗叶片的总DNA,通过对不同镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA含量、引物浓度、DNA聚合酶量条件下的RAPD扩增反应的效果,建立了一个适合桔梗的比较稳定的RAPD反应体系,用于桔梗遗传多样性分析。结果表明,桔梗RAPD扩增反应的最佳体系为:模板DNA20ng,dNTP150μmol/L,引物0.3μmol/L,Mg2+浓度2.0mmol/L,TaqDNA聚合酶1Unit,10×Buff-er2.0μL,PCR反应总体积为20μL。按此优化RAPD条件进行实验,重现性良好。     

土壤微生物RAPD分析体系的优化研究

采用正交实验设计,对影响土壤微生物RAPD扩增体系的Mg2+、dNTP浓度及引物浓度进行了研究,同时对退火温度、延伸时间及循环次数进行摸索。结果表明,适宜土壤微生物PCR扩增反应在25μl体积中进行,包括7ng土壤微生物DNA样品、20pm随机引物l、.5uTaq酶、3.0mmol.L-1Mg-CL2和0.2mmol.L-1dNTP。PCR扩增反应进程如下:94℃3min,使土壤DNA变性;然后再进行39个循环,每个循环包括94℃1min,37℃40s,72℃90s,结束后72℃延伸7min。     

甜叶菊RAPD反应体系的优化

以甜叶菊为试材,对影响其RAPD反应体系的7个因子进行优化.结果表明,20 μL的优化体系包括:双蒸水13.6 μL,10×Buffer(含15 mmol/L MgCI2)溶液3μL,2.5 mmol/L的dNTPS 1.2 μL,10 μmol/L的引物1μL,20 ng的模板DNA 1μL,1UTaq聚合酶;热循环...     

水稻RAPD反应体系的正交优化

以焦旱1号总DNA为材料,首先对影响RAPD-PCR反应的模板DNA、Mg~(2+)、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶浓度等因素进行了初步优化,分析了各因素对RAPD-PCR扩增结果的影响.在此基础上对影响RAPD-PCR反应的Mg~(2+)、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶浓度等4个主要因素进行正交优化,研究结果表明:在25 μl RAPD-PCR反应体系中,模板DNA 20 ng;Mg~(2+)浓度1.5mmol/L;dNTP的浓度0.2mmol/L;引物量15 pmol;Taq DNA聚合酶1.0 U.在此最佳条件下,利用引物B8对18个北方粳稻品种进行了成功的扩增.     

用正交设计优化荔枝RAPD反应体系

以改良CTAB法提取的荔枝基因组DNA为模板,应用L25(56)正交表,研究了Taq、Mg2+、随机引物、dNTPs和DNA模板5种RAPD反应组分浓度变化对扩增结果的影响,量化分析结果表明:正交设计可以应用于RAPD反应体系的建立。用这种方法建立的荔枝RAPD-PCR优化反应体系为:25μL反应体系中含1×Buffer、2.0mmol/LMg2+、2.0UTaqDNA聚合酶、0.15mmol/LdNTPs、0.6μmol/L随机引物、25ngDNA模板。     

茶树RAPD分析体系的优化

以福鼎大白茶为材料,采用美国的PTC-100^Tm热循环仪,对茶树RAPD分析中影响PCR扩增结果的主要因素进行了研究。确定了茶树RAPD的最适反应体系和扩增程序,即在30μl反应体系中,含40ng模板,2mmol/LMgCl2,各0.2mmol/LdNTPs,0.15μmol/L引物和1.5UTaqDNA聚合酶;扩增程序为;第1步预变性94℃,180s,第2步变性92℃,50s;第3步退火35℃,50s;第4步链延伸72℃,100s;循环41次,后延伸72℃,300s。     

白色念珠菌菌丝相培养条件及RAPD反应体系优化的研究

目的优化门色念珠菌菌丝相培养条件,为白色念珠菌菌丝相的分子生物学研究提供必要条件;建立白色念珠菌菌丝相RAPD的最佳反应体系,应用于其基因组DNA扩增。方法在RPM11640培养基的基础上,通过单因素试验研究了小牛血清用量、培养液pH值、培养温度和转种次数等对白色念珠菌菌丝相形成的影响。采用单因素试验,分别研究了Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、Taq酶的浓度、引物浓度和模板DNA浓度对白色念珠菌菌丝相RAPD反应的影响;应用L16（4^5）正交试验对RAPD反应条件进行了优化。结果白色念珠菌菌丝相诱导的最佳条件为：每100ml培养液中的小牛血清用量为10ml,培养液pH值为7．5,培养温度为36℃,转种次数为12次。白色念珠菌菌丝相的最适RAPD反应体系为：Mg^2＋ 1．25mmol／L、dNTPs 0．4mmol／L、随机引物0．1μmol／L、TaqDNA聚合酶5U／50μl、模板DNA495ng／50μl。结论通过单因素和正交试验,获得了较适白色念珠菌菌丝相培养条件和其基因组RAPD扩增条件。     

血水草生态解剖学特征及其药理功能研究进展

血水草(Eomecon chionantha Hance)是罂粟科(Papaveraceae)白屈菜族(Chelidonium)血水草属(Eomecon)多年生药用草本植物,为我国独属独种的特有物种.广泛生长于荫凉潮湿的生态环境,体内含有丰富的生物碱,具有抗菌、抑菌、灭螺功能作用,是一种开发生态型绿色药物的优良野生植物.从血水草的生态解剖学特征、化学成分和药理功能作用方面的研究进行了综述,可为血水草的资源保护、生态功能研究和开发生态型绿色药物提供系统性途径,并对今后的研究和发展提出了展望.     

中国特有植物血水草开花物候与生殖特性

于2008年3-5月对分布在井冈山的血水草(Eomecon chionantha Hance )5个自然种群的开花物候进行了观察,运用开花振幅、相对开花强度和开花同步性等指数研究了其开花物候特征及其对该种生殖成功的影响.结果表明:血水草开花时间为3月下旬-5月上旬,种群花期历时24 ～46 d,个体平均开花持续时间为11～21 d,单花花期一般为3～5d;井冈山血水草种群的开花物候进程呈单峰曲线模式具有一个开花高峰期,表现出一种“集中开花模式”;与大多数亚热带植物一样,血水草具有较低的相对开花强度,分布频率集中在10％ ～30％.开花物候指数与生殖间的相关分析结果表明:始花时间与花期持续时间呈显著负相关,而与开花数和坐果率呈显著正相关;花期持续时间与开花数和坐果率呈显著正相关;同步性指数与始花时间、开花数、花期持续时间呈负相关.血水草“集中开花模式”是其在长期的进化过程中适应周围气候条件及生境的一种生殖保障.     

中国特有单种属血水草的微卫星分子标记开发与评价

血水草(Eomecon chionantha Hance)是中国亚热带地区特有的单种属植物。本研究采用(AG)15、(AC)15两种生物素探针及磁珠富集法从血水草基因组中开发并筛选出13个微卫星位点,且在该物种中能进行稳定的PCR扩增并表现出多态性。利用筛选出的13个SSR多态性标记对血水草4个野生居群24个个体进行PCR扩增,结果显示每个微卫星位点的等位基因数为2~7个,观测杂合度(HO)和期望杂合度(HE)分别为0.125~0.792和0.299~0.691。说明这些SSR标记可用于血水草遗传多样性的后续研究,并揭示该物种地理分布格局形成的原因,有助于保护和利用中国亚热带地区的血水草野生资源。     

Cytotoxic Effects of the Benzophenanthridine Alkaloids Isolated from Eomecon chionantha on MCF-7 Cells and Its Potential Mechanism

Seven benzophenanthridine alkaloids ( 1–7 ) were obtained from the 75 % EtOH extract of Eomecon chionantha, and exhibited moderate biological activity against MCF-7 cells. 8,12-dimethoxysanguinarine ( 1 , DSG) strongly decreased the cell viability of MCF-7 cell lines with an IC₅₀ value of 7.12 μΜ. Based on RNA-sequencing measure and KEGG pathway enrichment analysis results, the significant differentially expressed genes (DEGs) were associated with Pathways in Cancer and PI3 K-AKT signaling pathways in DSG treated group. The potential molecular regulatory mechanisms underlying the effect of DSG induces necroptosis in MCF-7 cells via molecular docking, TEM analysis, and ROS measurement. Besides, DEGs of bone metastasis-related genes such as PI3 K, IGF1R, Notch, and Wnt mRNA were significantly downregulated in the DSG-treated group on MCF-7 cells. DSG might be selected as a bone metastasis proteins inhibitor of IL-1β, IL-6, IκBα, IGF1R, Notch, NF-κB, PTHrp, PI3 K, PKB/AKT, PTEN, TNF-α, and Wnt via molecular docking. DSG suppressed bone metastasis by regulating the expression levels of IL-1β, IL-6, PTH, CROSS, TP1NP, and OSTEOC on MCF-7 cells using ELISA measurement. Thus, our findings reveal that DSG could be a lead compound for suppressing tumor cells to bone metastasis in breast cancer cells.     

RAPD反应体系优化的研究

筛选随机扩增多态性DNA(RAPD)反应体系的最佳优化方案,以期获得稳定可靠的实验结果。选取对结果影响较大的4种因素(Taq酶、dNTP、引物、Mg2+)进行单因素设计,寻找最佳反应浓度。优化后得到4种因素的最佳反应浓度分别为Taq酶2.5U、dNTP 200μmol/L、引物1μmol/L、Mg2+2.5mmol/L。在优化的反应条件下,RAPD的稳定性和重复性均好。     

血水草生物量及碳贮量分布格局

采用样方收获法,利用实测数据,研究了湖南桃江血水草的生物量、碳含量、碳贮量及其分配特征.结果表明,血水草生物量为1744.70 kg/hm2,其中以地下根系生物量最高,为1278.63 kg/hm2,占血水草生物量的73.9％,且地下根系部分生物量与地上叶、茎部分生物量比值为2.74.血水草各器官平均碳含量为450.54 g/kg,从高到低排序为叶＞茎＞根.土壤层有机碳含量为6.63-38.50 g/kg,各层次碳含量分布不均,表层(015cm)土壤碳含量较高,并随土壤深度的增加而逐渐下降.生态系统碳贮量为101.19 t/hm2,碳库的分布格局为土壤层＞植被层＞枯落物层.植被层的碳贮量为0.79 t/hm2,占整个生态系统总碳贮量的0.78％;在植被层中,地下根系碳贮量为0.57 t/hm2,占植被层总碳贮量的72.2％,是植被层的主要碳库.枯落物层碳贮量较少,为0.22t/hm2,仅占整个生态系统的0.22％,它是维系植物体地上碳库与土壤碳库形成循环的主要通道.血水草生态系统中的碳贮量绝大部分集中在土壤中,土壤层碳贮量可观,为100.18 t/hm2,占系统总碳贮量的99.0％,是血水草生态系统中的主要碳库.研究结果,可为深入研究亚热带地区草本植物的生态功能提供参考.