PAI与细胞凋亡

纤溶酶原激活物(PA)系统是体内重要的蛋白溶解复合物系统,主要参与降解细胞外基质。纤溶酶原激活物抑制剂(PAI),主要有PAI-1、PAI-2,是纤溶酶原激活物t-PA和u-PA的有效抑制物。最近研究证明,PAI与细胞凋亡存在较密切的关系:PAI-1和PAI-2可抑制细胞凋亡的发生;细胞内PAI-2的裂解产物可作为细胞凋亡的标志等。     

A群链球菌利用人纤溶酶原的机制

A群链球菌是一种常见的人类致病菌,可以引起人类的化脓性感染和非化脓性后遗症。A群链球菌能表达或分泌多种毒力因子参与其致病性。大量文献报道,纤溶酶原也是A群链球菌侵入机体的重要因子,A群链球菌通过其纤溶酶原受体能与纤溶酶原特异性结合,从而使与A群链球菌结合的纤溶酶原更易被激活为纤溶酶。纤溶酶能降解宿主的细胞外基质和基底膜,有利于A群链球菌在人体内的扩散。本文就A群链球菌如何激活并利用人纤溶酶原的机制进行了综述。     

重组PAI－2对肿瘤细胞降解细胞外基质的影响

重组ＰＡＩ－２对肿瘤细胞降解细胞外基质的影响曹祥荣（南京师范大学生物系,２１００２４）关键词纤溶酶原激活剂抑制剂－２,基因重组,细胞外基质降解肿瘤细胞转移过程中最重要的因素是肿瘤细胞侵袭能力,其生化过程即为细胞外基质（ＥＯＭ）降解作用。纤溶酶系统（纤...     

尿激酶原变体Glu151-Glu154-mscu-PA的构建及其动力学性质

利用寡核苷酸介导的定点突变方法 ,将重组人尿激酶原 ( recombinant single chain uroki-nase- type plasminogen activator,rscu- PA)中 1 51位赖氨酸 ( Lys1 51 )突变为谷氨酸 ( Glu1 51 ) ,1 54位精氨酸 ( Arg1 54)突变为谷氨酸 ( Glu1 54) ,得到尿激酶原变体基因 ( mscu- PA) .尿激酶原变体和未突变的重组尿激酶原均在 E.coli中获得表达 ,超声后所得包涵体经体外变复性并得到纯化 .结果表明 ,尿激酶原变体对纤溶酶 ( plasmin)的敏感性比未突变的重组尿激酶原低约 40 % ,转变纤溶酶原 ( Glu- plasminogen)为纤溶酶的活性基本相同 .两种产物经纤溶酶活化后 ,分别得到了双链尿激酶 ( rtcu- PA)和双链尿激酶变体 ( mtcu- PA) .它们对人工合成的发色底物 S2 4 4 4反应的动力学基本一致 ,对 Glu- plasminogen的催化反应的米氏动力学常数 Km 基本一致 ,但 mtcu- PA的 Kcat仅为rtcu- PA的 80 % .酪蛋白降解系统 ( caseinolytic system)实验表明 ,在纤维蛋白和纤溶酶原存在的情况下 ,尿激酶原变体较未突变尿激酶原能加快酪蛋白的降解 ,说明 mtcu- PA对纤维蛋白有一定的亲和性     

尿激酶受体研究进展

细胞表面的尿激酶受体是一种高度糖基化的蛋白质,通过糖基磷脂酰肌醇锚定在细胞膜上。尿激酶受体除能与尿激酶或尿激酶原结合外还与玻连蛋白,整合素,α2巨球蛋白受体—低密度脂蛋白相关蛋白等相互作用。细胞表面的尿激酶受体不仅能促进纤溶酶原的激活、细胞外基质的降解,一些生长因子的释放或活化,而又还参与细胞粘附以及尿激酶／纤溶酶原激活物抑制剂复合物的代谢和细胞迁移。在肿瘤患血液中可溶性尿激酶受体含量显高于正常人,因而对尿激酶受体含量的测定可作为临床肿瘤诊断的指标。动物实验结果表明,阻断尿激酶与尿激酶受体的结合或抑制尿激酶受体的表达可显抑制肿瘤的浸润及转移。     

免疫亲和层析法纯化单链尿激酶型纤溶酶原激活剂

尿激酶原 (Ｐｒｏ ｕｒｏｋｉｎａｓｅ ,ｐｒｏ ＵＫ) ,也称单链尿激酶型纤溶酶原激活剂 (Ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｓｃｕ ＰＡ) ,与ｔ ＰＡ一样是第二代溶栓药物。给药时 ,保持无活性的酶原状态 ,只激活被纤维蛋白吸附的纤溶酶原 ,而对游离的纤溶酶原没有作用 ,即只在血栓表面才能活化转变为双链尿激酶 (Ｔｗｏ ｃｈａｉｎｕｒｏｋｉｎａｓｅ ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｔｃｕ ＰＡ或ＵＫ) ,因而具有较高的特异性溶血栓作用[1 ] 。尿激酶原…     

重组纤溶酶原激活剂抑制剂－2基因在HT1080亚克隆中的表达

重组纤溶酶原激活剂抑制剂－２基因在ＨＴ１０８０亚克隆中的表达曹祥荣（南京师范大学生物学系,２１００２４）关键词纤溶酶原激活剂,基因重组,纤溶酶原激活剂抑制剂活性表达目前认为纤溶酶系统是肿瘤细胞浸润和转移蛋白水解过程中重要的酶,纤溶酶能直接水解细胞外间...     

尿激酶原-RGDS双功能分子——构建、表达及性质研究

利用定点突变及DNA重组技术 ,构建了在尿激酶原K区C 端的β 发夹区插入了精氨酸 甘氨酸 天冬氨酸 丝氨酸 (RGDS)片段的尿激酶原嵌合体基因 ,并利用昆虫杆状病毒表达系统通过感染Sf9细胞对嵌合体尿激酶原进行了高效表达 .用尿激酶原单抗亲和柱纯化表达产物 ,获得初步纯化的嵌合体蛋白 .对嵌合体蛋白进行血小板膜结合实验表明 ,此嵌合体具有依赖于钙离子的结合活化血小板膜的活性 .用生色底物Chromozym U测定嵌合体的酰胺解活性 ,结果显示 ,纤溶酶激活后的嵌合体比活为 62 0 0 0IU/mg,与文献报道的纤溶酶激活的尿激酶原比活 65 3 5 5IU/mg相近 .纤溶酶激活后的嵌合体激活纤溶酶原的反应符合米氏方程 ,其Km 值为 0 .97μmol/L ,与天然尿激酶的Km 值 1.64μmol/L相近 .嵌合体还显示了较强的体外抑制血小板聚集活性 .这些结果表明 ,此尿激酶原 RGDS嵌合体有可能成为一种新的双功能溶栓药物 .     

uPA与其抑制剂复合物的受体介导内吞及其应用

尿激酶型纤溶酶原激活物 (ｕＰＡ)是参与细胞外基质降解的重要成分 ,在肿瘤细胞的侵袭和转移中起着重要作用。人们对ｕＰＡ的结构、功能以及它与纤溶酶原激活抑制物 1 (ＰＡＩ 1 )、ｕＰＡ受体 (ｕＰＡＲ)的相互作用都进行了深入的研究。单链ｕＰＡ是一种糖蛋白 ,含有 41 1个氨基酸。其结构可分为四部分 ,依次为 :上皮生长因子区、环状结构区、连接区和丝氨酸蛋白酶区。纤溶酶可裂解Ｌｙｓ1 5 8 Ｉｌｅ1 5 9之间的肽键 ,使单链ｕＰＡ转变为双链ｕＰＡ。ｕＰＡ与其细胞表面受体结合后激活纤溶酶原 ,自身激活也增强。结合在细胞膜上的ｕＰＡ…     

纤溶酶原在金黄色葡萄球菌感染中的作用

金黄色葡萄球菌菌体表面有多种纤溶酶原受体,包括次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶、核糖核苷酸还原酶、α-烯醇化酶和3-磷酸甘油醛脱氢酶等,它们均可以与纤溶酶原结合。与细菌结合的纤溶酶原可被宿主的纤溶酶原激活剂(组织型纤溶酶原激活剂和尿激酶型纤溶酶原激活剂)或葡萄菌属的纤溶酶原激活剂(葡激酶)激活为纤溶酶。细菌表面的纤溶酶有利于其降解宿主胞外基质,穿越组织屏障,因此哺乳动物的纤溶酶原可能在金黄色葡萄球菌感染宿主过程中起重要作用。     

尿激酶与肿瘤转移

尿激酶是一种丝氨酸蛋白水解酶,它能激活纤溶酶原成为纤溶酶,降解胞外基质,从而利于细胞迁移。肿瘤转移是导致肿瘤恶化和肿瘤病人死亡的主要原因之一。以尿激酶为中心,尿激酶受体介导的纤溶酶原激活系统在肿瘤转移过程中扮演了重要角色。     

SDS-PAGE纤维蛋白自显影法检测不同分子量的纤溶酶原激活剂

体内存在两种纤溶酶原激活剂(plasminogen activator, PA):血液中生理性的组织型纤溶酶原激活剂(t PA)及尿中的尿激酶型纤溶酶原激活剂(u PA)。它们通过将纤溶酶原转变成有活性的纤溶酶而启动纤溶过程使血栓溶解。目前模拟体内纤溶过程以纤维蛋白为底物的PA物质活性测定方法有纤维蛋白溶圈法和发光分析法,但这两种方法不能     

特发性肺纤维化的机制与治疗

组织纤维化会对限制性疾病,如特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)患者的肺部结构和功能造成不可逆损伤。血管外凝血、纤溶酶与纤溶酶原激活物抑制剂-1被认为在肺纤维化的发展中发挥作用。凝血激活与纤溶酶激活的蛋白酶可以分别形成和分解纤维蛋白系统,凝血酶、凝血剂和凝血因子Xa可以裂解蛋白酶活化受体促进纤维化;而尿激酶纤溶酶原激活剂的纤溶酶原蛋白酶也能结合受体引发纤维化活化。本综述聚焦IPF并描述了两个纤维蛋白稳态系统参与及促进间质纤维化,认为选择性靶向受体介导的凝血剂和纤溶酶蛋白酶既可以限制肺纤维化发展,又没有与溶栓治疗和常规抗凝血剂相关的出血并发症的危险。     

尿激酶变体Glu154—mtcu—PA的构建及其性质研究

利用寡核苷酸介导的定点突变方法,将重组人尿激酶原中Ａｒｇ１５４突变为Ｇｌｕ１５４,得到尿激原变体基因。该激酶原变体和未突变的重组尿激酶原均在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得表达。经体复性,Ｚｎ＾３＋选择性沉淀以及抗体支析,两种表达产物均被纯化,纯化后的尿激酶原变体和未突变的重组尿激酶原对纤溶酶的敏感性表现一致。两种产物经纤溶酶活化后,分别得到了双链尿激酶和双链尿激酶变体,它们对人工合成的发色底物Ｓ２４４４反应的     

利用CMV启动子在CHO细胞中表达人tPA

人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)是一种以丝氨酸为活性中心的蛋白酶,它能使特异地与血栓中纤维蛋白结合的纤溶酶原转变为纤溶酶,从而选择性地溶解血栓中的纤维蛋白,因此在临床上具有重要的应用价值。为适于tPA基因在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的高效表达,将tPA cDNA片段从原来获得的重组质粒pMM6005中用HindⅢ和BamHⅠ酶切出,经Klenow酶补平后插入CMV启动子下游     

可口革囊星虫体内纤溶酶的初步研究

目的从可口革囊星虫中寻找到纤溶酶,并对其进行初步研究。方法采用匀浆、抽提离心、Sephacryl S-300凝胶过滤等方法对可口革囊星虫纤溶酶初步分离,用纤维蛋白平板法和合成发色底物法检测其纤溶活性,并用该酶进行体外溶血凝块实验。结果可口革囊星虫内脏中存在纤溶酶。此酶既直接降解纤维蛋白又间接激活纤溶酶原,它对体外血凝块有明显溶解作用。结论可口革囊星虫内脏中存在着一种既具直接降解纤维蛋白作用又具激活纤溶酶原作用的纤溶酶。     

葡萄糖和肿瘤坏死因子-α对内皮细胞中早期生长反应基因-1表达的影响

目的探讨葡萄糖和肿瘤坏死因子-α对内皮细胞中早期生长反应基因-1表达的影响。方法利用人脐静脉内皮细胞体外培养,予以25mmol/L葡萄糖和/或10ng/ml肿瘤坏死因子-α与内皮细胞共同孵育,运用蛋白免疫印迹方法检测细胞中早期生长反应基因-1蛋白的表达,运用酶联免疫吸附法检测纤溶酶原激活抑制物-1的表达。结果葡萄糖和肿瘤坏死因子-α均可增加早期生长反应基因-1的表达,两种因素共同作用产生协同作用。而且,葡萄糖和肿瘤坏死因子-α也可促进纤溶酶原激活抑制物-1的表达。细胞外调节蛋白激酶1/2的抑制剂(PD98059)可下调肿瘤坏死因子-α所诱导的早期生长反应基因-1、纤溶酶原激活抑制物-1的表达,而对葡萄糖所诱导的早期生长反应基因-1的表达无明显影响。结论肿瘤坏死因子-α可能通过细胞外调节蛋白激酶1/2路径促进早期生长反应基因-1和纤溶酶原激活抑制物-1表达。肿瘤坏死因子-α和葡萄糖可能通过不同的信号通路调节早期生长反应基因-1、纤溶酶原激活抑制物-1表达,在肥胖、糖尿病等代谢紊乱所致的血管并发症的发生中起到重要的作用。     

纳豆激酶溶解血栓机制

根据已有文献报道,综述了关于纳豆激酶溶栓机制的研究进展,将纳豆激酶的溶栓机制归纳为以下四点:直接溶栓作用;刺激血管内皮细胞产生内源tPA;激活体内尿激酶原转变为尿激酶;通过降解和失活纤溶酶原激活剂的抑制剂(PAI1)调控纤溶作用 。     

湛江沿海潮间带产胞外纤溶活性酶类海洋真菌的生物多样性分析

【目的】研究湛江沿海硇洲岛和徐闻珊瑚礁自然保护区潮间带产胞外纤溶酶样酶和纤溶酶原激活物海洋真菌的生物多样性,为发掘新型溶栓药物奠定基础。【方法】采用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)和酵母膏蛋白胨葡萄糖(YPD)培养基分离培养海洋真菌,采用真菌r DNA转录间隔区1-5.8S r DNA-转录间隔区2(ITS1-5.8S-ITS2)片段的序列分析及其系统进化树构建的方法鉴定分离培养的海洋真菌,采用脱脂牛奶马铃薯葡萄糖琼脂(SM-PDA)培养基培养法筛选产胞外蛋白酶的海洋真菌,采用海水纤维蛋白马铃薯葡萄糖琼脂(FN-PDA)培养基培养法筛选产胞外纤溶酶样酶和/或纤溶酶原激活物的海洋真菌。【结果】从湛江沿海的硇洲岛和徐闻珊瑚礁自然保护区潮间带分离、培养和鉴定了海洋真菌446株,含真菌的98个种,分布于真菌域子囊菌门(Ascomycota)和担子菌门(Basidiomycota)的6个纲、18个目、46个科、65个属;其中产胞外蛋白酶的海洋真菌有265株,61个种,分布于41个属;产胞外纤溶酶样酶的海洋真菌有67株,22个种,分布于14个属;产胞外纤溶酶原激活物的海洋真菌有84株,23种,分布于13个属;优势属为曲霉属(Aspergillus),其次为青霉属(Penicillium)。【结论】湛江沿海潮间带可分离培养的产胞外纤溶酶样酶和纤溶酶原激活物的海洋真菌物种丰富多样,是发掘新型溶栓药的丰富资源。     

用合成多肽免疫制备尿激酶原单克隆抗体

根据尿激酶原与尿激酶一级结构的区别并结合计算机分子模拟,设计合成了包括尿激酶原Thr152-Glu163肽段的13肽,然后与载体蛋白KLH偶联作为免疫原,用BI林巴细胞融合技术获得了3种尿激酶原特异性单克隆抗体,这3种抗体仅与尿激酶原和合成多肽反应 ,而不与尿激酶及其结构类似物组织型纤溶酶原激活剂,凝血酶,纤维蛋白原反应,琼脂双向免疫扩散实验及酶活性抑制实验表明,3种抗体均为IgG类的IgG1亚类,所有3种抗体均不抑制酶活力,探讨了这组抗体用于尿激酶原结构与功能及其定量,定性分析研究方面的可能性。