胞浆型磷脂酶A2介导弱氧化修饰低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白(MM-LDL)能否诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡以及胞浆型磷脂酶A₂(cPLA₂)在此过程中的作用.MTT法测定细胞存活率;相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡;³H-花生四烯酸(³H-AA)预标法测定PLA₂活性;蛋白质印迹检测cPLA₂磷酸化;激光共聚焦显微镜检测单个细胞内钙离子浓度的变化.结果表明,MM-LDL(100～300 mg/L)作用后的HUVECs呈现凋亡典型的形态特征,凋亡率随MM-LDL浓度的增加而上升.MM-LDL能引起胞内钙离子浓度增加,cPLA₂的活化及磷酸化.15 μmol/L AACOCF₃和5 mmol/L EGTA在抑制cPLA₂活性的同时,部分抑制MM-LDL诱导的HUVECs凋亡.加入外源性AA(50 μmol/L)能逆转AACOCF₃引起的凋亡抑制.结果提示,cPLA₂参与了MM-LDL诱导HUVECs凋亡的信号传递.     

氧化修饰低密度脂蛋白与动脉粥样硬化

氧化修饰低密度脂蛋白与动脉粥样硬化周永列（浙江省人民医院,杭州３１００１４）关键词氧化修饰低密度脂蛋白,动脉粥样硬化在动脉粥样硬化（ＡＳ）与血浆脂质关系的研究中,血浆低密度脂蛋白（ＬＤＬ）浓度升高被认为是引起ＡＳ的重要危险因素而受到广泛的重视。但是脂...     

胞浆型磷脂酶A2介导弱氧化修饰低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白(MM-LDL)能否诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡以及胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)在此过程中的作用.MTT法测定细胞存活率;相差显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡;3H-花生四烯酸(3H-AA)预标法测定PLA2活性;蛋白质印迹检测cPLA2磷酸化;激光共聚焦显微镜检测单个细胞内钙离子浓度的变化.结果表明,MM-LDL(100～300 mg/L)作用后的HUVECs呈现凋亡典型的形态特征,凋亡率随MM-LDL浓度的增加而上升.MM-LDL能引起胞内钙离子浓度增加,cPLA2的活化及磷酸化.15 μmol/L AACOCF3和5 mmol/L EGTA在抑制cPLA2活性的同时,部分抑制MM-LDL诱导的HUVECs凋亡.加入外源性AA(50 μmol/L)能逆转AACOCF3引起的凋亡抑制.结果提示,cPLA2参与了MM-LDL诱导HUVECs凋亡的信号传递.     

氧化修饰低密度脂蛋白与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化的发生发展与低密度脂蛋白受到氧化修饰有关。本文从以下四个方面对本室的工作进行了综述：（１）动脉粥样硬化机体受到脂质过氧化损伤;（２）Ｏｘ－ＬＤＬ对内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞的毒性效应;（３）Ｏｘ－ＬＤＬ和ＭＤＡ－ＬＤＬ的比较及与Ｏｘ－ＬＤＬ和ＭＤＡ－ＬＤＬ结合的清道夫受体的特征;（４）不同方法对ＬＤＬ氧化修饰的比较和以ＬＤＬ氧化修饰为模型对某些物质的抗氧化修饰研究。研究结果为动脉粥     

维生素C抑制低密度脂蛋白的氧化修饰

研究了不同浓度维生素 C 对 Cu²⁺诱导的低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰的抑制作用,通过测定硫代巴比妥酸反应物质(TBARS),荧光物质(lipofusion)扫描及琼脂糖电泳,显示一定浓度的维生素 C 在24h 内对 LDL 的氧化修饰具有抑制作用,并呈现量效效应.提示维生素 C 作为体内存在的一种抗氧化物,可抑制 LDL的氧化修饰,从而在防治动脉粥样硬化的发生具有一定意义.     

芦丁和槲皮素对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用

以低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化修饰为模型和以硫代巴比妥酸反应物质（ＴＢＡＳ）生成量以及ＬＤＬ的α－Ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ和荧光物质含量为指标,以时间效应和浓度效应说明槲皮素和芦丁能明显地抑制Ｃａ＾２＋诱导的ＬＤＬ氧化修饰但其抗氧化修饰的程度无明显差异。它们对已受到Ｃｕ＾２＋氧化修饰的ＬＤＬ的过氧化无明显地终止作用。     

褪黑素对脂多糖诱导血管内皮细胞损伤的保护机制研究

目的：研究褪黑素（melatonin,MLT）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用及其机制探讨。方法：不同浓度的褪黑素作用于体外培养的内皮细胞脂质过氧化损伤模型,实验分为5组,即正常对照组（Ctrl）,脂多糖（LPS）氧化损伤组：在培养基中加入2mmol／L的LPS诱导损伤4h;LPS加MLT低剂量（200t~mol／L）组、中剂量（400ixmol／L）组、高剂量（600txmol／L）gai。采用MTT法观察MET对HUVECs活性的影响;用双波长荧光分光光度法测定HUVECs细胞内游离钙离子浓度;检测各组内皮细胞匀浆中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH·Px）活性;用ELISA法测定培养的细胞上清液中白细胞介素6（IL．6）表达的变化;并测定细胞凋亡率。结果：①LPS作用后血管内皮细胞损伤明显,细胞增殖减少,细胞培养上清液和细胞匀浆中MDA含量、细胞内钙离子浓度和IL．6均升高,SOD、GSH-Px活性下降,凋亡率可达38．9±1．1％,均与正常对照组有统计学差异（P〈0．01）;②加入MET可明显减轻LPS对抗氧化酶SOD、GSH—Px的影响,同时MDA含量、细胞内钙离子浓度和几一6均明显下降,并显著减少凋亡细胞数量,各指标差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：褪黑素可保护和修复LPS引起的血管内皮细胞损伤,其作用途径可能与保护细胞的线粒体,提高了该细胞的抗氧化酶活性,降低细胞内钙离子浓度作用有关。     

Ceramide Production Mediates Aldosterone-Induced Human Umbilical Vein Endothelial Cell (HUVEC) Damages

Here, we studied the underlying mechanism of aldosterone (Aldo)-induced vascular endothelial cell damages by focusing on ceramide. We confirmed that Aldo (at nmol/L) inhibited human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) survival, and induced considerable cell apoptosis. We propose that ceramide (mainly C18) production might be responsible for Aldo-mediated damages in HUVECs. Sphingosine-1-phosphate (S1P), an anti-ceramide lipid, attenuated Aldo-induced ceramide production and following HUVEC damages. On the other hand, the glucosylceramide synthase (GCS) inhibitor PDMP or the ceramide (C6) potentiated Aldo-induced HUVEC apoptosis. Eplerenone, a mineralocorticoid receptor (MR) antagonist, almost completely blocked Aldo-induced C18 ceramide production and HUVEC damages. Molecularly, ceramide synthase 1 (CerS-1) is required for C18 ceramide production by Aldo. Knockdown of CerS-1 by targeted-shRNA inhibited Aldo-induced C18 ceramide production, and protected HUVECs from Aldo. Reversely, CerS-1 overexpression facilitated Aldo-induced C18 ceramide production, and potentiated HUVEC damages. Together, these results suggest that C18 ceramide production mediates Aldo-mediated HUVEC damages. MR and CerS-1 could be the two signaling molecule regulating C18 ceramide production by Aldo.     

人可溶性低密度脂蛋白受体在甲醇酵母中的表达

为获得低密度脂蛋白受体配基结合结构域在甲醇酵母中的分泌表达 ,首先用RT PCR方法以人肝癌Bel 740 2总RNA为模板扩增了编码低密度脂蛋白受体配基结合结构域的基因片段。核酸测序分析表明克隆到的DNA片段的序列与报道的人LDLR的cDNA序列相同。然后构建了甲醇酵母表达质粒pPIC9K sLDLr ,并将其线性化后用电穿孔法导入PichiapastorisGS115。分别用SDS PAGE、Westernblot和Ligandbindingblot对GS115 pPIC9K sLDLr上清中的重组sLDLR进行鉴定。SDS PAGE和Westernblot分析表明表达的sLDLR的表观分子量为 36kD。Ligandbindingblot分析表明表达的sLDLR具有配基结合的生物学活性     

激活蛋白处理水稻引发基因差异表达的研究

利用抑制性消减杂交技术(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)成功构建了植物激活蛋白处理水稻与非处理组水稻中差异表达的消减cDNA文库。从文库中一共筛选到1756个克隆,通过反向Northern杂交,从中得到264个有效克隆并测序,利用BLAST在GenBank数据库进行序列相似性比对分析,获得28个上升表达差异基因。通过分析这些基因与植物的光合作用、营养物质的运输代谢等多种植物的生理生化功能相关。本研究为揭示激活蛋白的作用机理奠定基础。     

脱氧胆酸钠对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨脱氧胆酸钠(SD)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响。方法:(1)以不同终浓度(0、0.015mg/mL、0.05 mg/mL、0.15 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL)的脱氧胆酸钠分别作用于人脐静脉血管内皮细胞,使用CCK-8检测细胞活力、TUNEL荧光染色检测细胞凋亡;(2)以终浓度为0.15 mg/mL的SD作用于HUVEC4、8、12 h后用Western blot检测Caspase-3、7、9蛋白及PARP活化情况;(3)观察Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对0.15 mg/mL脱氧胆酸钠组的影响。结果:CCK8结果显示随SD浓度(0~1.0 mg/mL)及作用时间(0~12 h)增加,HUVEC活力降低,0.15 mg/mL时活力为80%,1.0 mg/mL时细胞活力仅不到10%;Tunel检测示随着SD浓度的增加HUVEC凋亡明显增多;Western Blot结果示SD作用于HUVEC后Caspase-3、7、9蛋白及PARP活化明显增加;Z-DEVD-FMK明显抑制了0.15 mg/mLSD引起的PARP活化。结论:脱氧胆酸钠(SD)通过启动Caspase级联反应介导了人脐静脉内皮细胞的凋亡。     

干旱胁迫诱导下植物基因的表达与调控

干旱胁迫能够诱导植物表达大量的基因 ,研究这些基因的表达与调控 ,为植物抗旱的定向育种创造条件。本文系统介绍了在干旱胁迫条件下 ,植物体内渗透调节物质和可溶性糖合成有关的基因、离子和水分通道及Lea蛋白基因的表达 ,以及与这些基因表达相关的调控元件和因子 ,干旱胁迫信号转导等方面的最新研究进展。     

A Comparison of Substrates for Human Umbilical Vein Endothelial Cell Culture

We have studied culture conditions which facilitate the growth of stable, non-proliferating, human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) monolayers. Gelatin and fibronectin coatings, with or without glutaraldehyde cross-linking, on both plastic and glass were investigated for initial attachment of HUVEC and growth characteristics. The presence during culture of intercellular (IC) junctions demonstrated by silver staining, expression of platelet endothelial cell adhesion molecule-1 (PECAM-1) and maintenance of a cobblestone appearance of HUVEC monolayers were assessed over time.

Glutaraldehyde cross-linked fibronectin and gelatin coatings on glass and glutaraldehyde cross-linked gelatin or untreated fibronectin coatings on plastic served as good substrates for short term culture. Long term (20 days) cultures of HUVEC which maintained silver and PECAM-1 staining of IC junctions and a cobblestone appearance could be achieved if glutaraldehyde cross-linked gelatin coatings on glass were used as substrates.     

子痫前期患者血清对脐静脉内皮细胞CD40 和NF-kB 表达的影响

目的：研究CD40 和NF-资B 在子痫前期患者组的脐静脉内皮细胞（HUVEC）中的表达,探讨其在子痫前期发病过程中的作 用。方法：应用子痫前期患者组的血清冲击人HUVEC 株,电镜下观察HUVEC 的形态变化,流式细胞仪下测定细胞的凋亡,用 RT-PCR 方法检测HUVEC中CD40 和NF-资B 的表达情况。结果：①电镜下正常孕妇组HUVEC呈" 铺路石" 状单层镶嵌排列, 子痫前期组HUVEC形态呈典型损伤改变,细胞稀疏,细胞核与细胞浆分界模糊不清,胞浆中有暗色颗粒。②流式细胞仪测定子 痫前期组HUVEC的细胞凋亡较正常组明显升高,差异有显著意义（P<0.05）;③ RT-PCR 测定显示子痫前期患者组HUVEC 中 CD40mRNA 及NF- BmRNA 水平均较正常组明显升高,差异有显著意义（P<0.05）;④ 子痫前期组及对照组的CD40 和NF- kB表 达均呈显著性正相关。结论：CD40和NF-资B 的激活均参与了子痫前期的发病机制,并在其中发挥重要作用。     

利用表达谱基因芯片筛选溃疡性结肠炎差异表达基因

目的:利用人类全基因组表达谱芯片技术,分析溃疡性结肠炎患者和健康者基因表达谱差异,筛选出溃疡性结肠炎相关基因。方法:采用Trizol法提取8例溃疡性结肠炎患者和8例健康对照者结肠粘膜组织总RNA并纯化,逆转录合成c DNA,利用荧光染料Cy3标记aa UTP,转录合成标记的c RNA,并与Agilent人类全基因组表达谱芯片杂交,扫描荧光信号图像,对芯片原始数据进行归一化处理,利用倍数差异和t检验计算筛选出相关差异表达基因,采用DAVID在线分析系统进行基因的功能注释和关联分析,明确差异基因的生物学功能,并对部分差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证。结果:筛查出溃疡性结肠炎结肠粘膜组织差异表达基因4132个,其中上调基因2004个,下调基因2128个。选取6条差异表达基因进行PCR验证,结果有3条基因表达上调,3条基因表达下调,表达趋势与芯片结果一致。结论:溃疡性结肠炎患者与健康对照者基因表达存在明显差异,分析这些差异表达基因有助于我们探索溃疡性结肠炎的发病机制,为疾病的治疗提供理论依据。     

二苯乙烯苷对H202诱导血管内皮细胞ICAM-1及VCAM-1表达的影响

目的：通过研究二苯乙烯苷（TSG）对H20：诱导的人脐静脉内皮细胞ICAM-1、VCAM-1表达的影响,探明二苯乙烯苷抗氧化保护内皮细胞的作用机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为空白对照组、H20：组、辛伐他汀组、TSG组,运用逆转录聚合酶链式反应和酶联免疫吸附试验分别检测ICAM-1及VCAM-1mRNA与其蛋白的表达。结果：200μmol·L。的H202作用内皮细胞24h后。ICAM．1和VCAM-1的mRNA和蛋白表达水平均明显上调,与空白对照组比较,差异有显著性（P〈0．01）。而在200μmol·L。的H202作用前用1μmol·L^-1二苯乙烯苷预处理体外培养人脐静脉内皮细胞4h,结果显示二苯乙烯苷能抑制H2O2诱导的内皮细胞ICAM-1、VCAM-1的mRNA和VCAM-1的蛋白水平表达,与H2O2组比较差异有显著性（P〈0．01）;而ICAM-1的蛋白表达水平与H202组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;辛伐他汀组ICAM-1和VCAM-1的mRNA及其蛋白水平表达降低,与H20：组比较差异均有显著性（P〈0．01）。实验结果表明二苯乙烯苷可抑制H2O2诱导的内皮细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1表达。结论：二苯乙烯苷可通过降低细胞粘附分子ICAM-1和VCAM-1的表达保护氧化应激引起的人脐静脉内皮细胞损伤。