蛋白质酸水解液用过甲酸氧化处理对胱氨酸的测定

<正> 蛋白质在酸水解过程中,其中的半胱氨酸和胱氨酸易受到氧化而破坏。特别是在用茚三酮显色反应来检测氨基酸的柱层析法中,半胱氨酸不与茚三酮产生显色反应,因而对它无法测定。所以在测定这两个氨基酸时,通常采用过甲酸氧化法。即用过甲酸将蛋白质中的这两个氨基酸氧化为半胱磺酸进行测定。但这一方法操作烦杂,其中的过甲酸不易除去,而会在酸水解过程中使     

茚三酮直接加入展开剂显色的探索

在纸层析和薄层层析中,经典显色法是用显色剂对晾干后的层析谱进行喷显。1984年,朱婉华用微晶纤维素薄层层析法分析氨基酸,将茚三酮直接加进展开剂内,在展开过程中显色,获得成功。最近,我们用纸层析     

三氯化钛对氨基酸茚三酮显色的影响

在氨基酸的分析中,常用茚三酮显色法进行定性定量测定。无论用离子交换柱层析和液体色谱法还是用氨基酸自动分析仪分析氨基酸,常在茚三酮显色剂中加入二氯化锡还原剂作为增色剂,但由于二氯化锡不稳定,配制茚三酮时加入255毫克/升的三氯化钛代     

纸上径向层析法定量测定氨基酸

<正> 氨基酸纸层析定量测定法包括了纸层析分离和各氨基酸的定量测定。在纸层析分离上,径向展层远比单同或双向展层为优;在氨基酸定量测定上,有结合标准定量的方法和斑点测量法两种,前者较为准确,但手续繁杂;后者简单快速,但影响因素较多。斑点测量法是Fisher首先提出的,以后Beinley从理论上证明其关系式如下:     

介绍一种有效的混合氨基酸双向层析法(Atiya Abbasi等方法)

<正> 在蛋白质水解液的氨基酸分离工作中,常用两种溶剂系统作双向层析法,但是由于R_f值接近的氨基酸完全重叠,分离效果不好。1980年Atiya Abbasi Rashida ali 和ZafarH.Zaidi选择了三种溶剂系统,用Whatman 1号层析纸作双向层析,可将已知的二十种氨基酸成功地分离清晰,并改用锶—茚三酮作显色剂,显色决,色斑可保持六星期以上。     

氨基酸的离子交换色谱(理论原理和实践)(续)

<正> 五、洗脱液中氨基酸的定量测定洗脱液中氨基酸的定量测定是根据洗脱液中各组分与各种显色试剂(见第一章)反应时产生的颜色强度借助光电比色计进行测量的。适合于此目的所有显色试剂中,象上面指出的最有效的是茚三酮。这种制备简单,使用方便,重复性好的茚三酮试剂由Moore 和Stein 首先提出。作为这种方法的还原剂采用氢化茚三酮—茚三酮的还原形。如所周知,在与氨基酸相互作用时茚三酮形成带颜色的物质—双配位茚酮胺(Ⅲ)和醛     

三种展层剂层析效果的比较

植物色素的层析方法有多种。目前多采用纸层析、薄板层析和柱层析三种,其中以纸层析法最为常用。此法虽简便、经济、易行,但如展层剂选择不好,常会造成层析效果不佳。为提高色素的分离、提纯效果、增大各色素带间的距离,我们选用双重展层剂,分     

稻米赖氨酸快速测定条件的探讨

以氨基酸自动分析仪测定稻米赖氨酸含量为参照标准。在“茚三酮测定赖氨酸含量”(A法)的基础上,对该法中大米蛋白质的提取温度和时间、色温度和时间及茚三酮用量等条件进行了探讨,提出了稻米赖氨酸含量快速测(B法)。提取条件为90℃5分钟,显色条件为90℃20分钟;茚三酮试剂用1 ml。用B法对10个大米样品进行测定,赖氨酸含量与氨基酸分析仪测得的赖含量基本上一致,无显著差异(P>0.05)。     

一种通用的氨基酸生产菌筛选法

<正> 在氨基酸育种工作中,高产菌株的筛选是项困难的工作。因为平板上的菌落分泌的氨基酸无法直接显色,所以通常不能在平板上直接筛选产生氨基酸的菌株。氨基酸生产菌的筛选一般是在平板上挑取带有定向育种标记的单菌落,接种到大试管或三角瓶中摇瓶发酵,发酵结束后取各个样品点在滤纸上,然后用相应氨基酸的待殊茚三酮显色反     

纤维素板微量氨基酸的分离及几种显色方法的比较

氨基酸分析是研究蛋白质化学的最基本的实验技术之一。现在已经普遍地使用离子交换层析、纸层析、纸电泳、薄层层析等方法分离、分析氨基酸。其中自动化的离子交换层析方法分析具有快速、微量和准确等特点,但需要昂贵的仪器设备,在一般实验室里不易办到。纸层析和薄层层析的方法,设备要求简单,操作方便,操作熟练时也可达到定量的要求。也可以用纤维素薄层层析的方法分离分析氨基酸,并已用于尿和血样品以及其他蛋白质中的氨基酸测定。经我们初步摸索,使用一种小型的纤维素板层析,并将茚三酮试剂直接加入展层溶剂中,蛋白质经酸水解后,可得到完全分开的普通     

氨基酸显色剂茚三酮试剂的实验研究（一）茚三酮显色剂在不同存放时间内对氨基酸含量的影响

本项目采用新的技术,对茚三酮显色试剂进行了研究,利用国内新引进的６３００黄金系列氨基酸分析仪对不同存放时间内的节三酮显色剂对氨基酸含量的影响进行了实验研究。观察了第１天,第７天,第１４天,第２１天,第２８天内进口茚三酮显色剂与自制茚三酮显色剂对氨基酸含量的影响。并对３８种氨基酸与自制茚三酮试剂和进口茚三酮试剂反应后的实验结果进行了观察。实验结果表明,第１天至第２８天内,自制茚三酮试剂的稳定性、灵敏度,重度性,分辨率等项指标均优于进口的茚三酮试剂,统计结果,说明用自制的茚三酮试剂取代进口的茚三酮试剂是可靠和可行的。     

血红蛋白的结构分析

本文应用指纹法和肽段氨基酸层析法对血红蛋白A(HbA)和血红蛋白S(HbS)进行结构分析。 指纹法:淀粉板电泳提纯的HbA和HbS,经胰蛋白酶酶解后,点样于60×25厘米的新华3号滤纸上,作高压电泳分离(缓冲液为呲啶:冰醋酸:水=100∶4∶900 V/V,电压2,800伏,电泳2小时),继而进行垂直于电泳方向的上行层析(溶剂系统为吡啶:异戊醇:水=35∶35∶30),茚三酮显色,得血红蛋白酶解图谱。和HbA比较,发现HbS酶解图     

氨基酸的定量濾纸层析法 Ⅰ.纯氨基酸

1944年Consden,Gordon和Martin於於濾纸层析法的经典工作为氨基酸分析提供了新的简便有效的工具,在蛋白质及其代谢的研究工作上起了决定性的作用。因此濾纸层析方法,特别是定量方面,引起了很多生物化学家的注意。近十数年来,关於濾纸层析的文献不下数百篇,在滤纸的選擇、溶剂、顯色剂及定量操作技术上都有种种的修正和变化,例如Fisher等作者採用测量斑点面积的方法定     

关于做好“纸层析法分离氨基酸”实验的总结

分析了影响“纸层析法分离氨基酸”实验效果的关键操作,并提出相应的解决方案.     

混合醇体系中测定氨基酸的茚三酮光度法

氨基酸一般利用自动分析仪定量测定,但需高精密仪器,而基层研究单位一般难以采用,而且分析也不需要如此精密。利用茚三酮能够定量测定氨基酸,除脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮形成黄色化合物外,其它所有氨基酸均与茚三酮反应形成蓝紫色物质,溶液颜色深浅与氨基酸含量成正比。据此本文对氨基酸的茚三酮光度法测定进行了研究和改进。在混合醇体系中以醋酸钠-醋酸为缓冲溶液,加入抗坏血酸以增加反应的灵敏度,100℃水浴20分钟完成显色反应。并对酸度、试剂用量、反应时间等因素进行了研究,拟定了用于混合氨基酸总量测定的操作程序。     

直接比色法测定发酵液中赖氨酸的含量

<正> 赖氨酸是人类和动物生长所必须的氨基酸之一。大量用作输液,营养药品,食品和饲料添加剂,目前它的制备普遍采用发酵提取法,在发酵过程中还产生多种其它氨基酸,因此要求快速测定发酵液中赖氨酸的含量比较困难,过去采用的分析方法有下述几种: 一、发酵液经泸纸层析,薄板层析或电泳分离后,将赖氨酸组份洗脱,加茚三酮试剂显     

一种简易的picomole水平的氨基酸定量测定法

茚三酮显色法,是氨基酸分析仪最早使用和经常使用的检测方法,但是用此法检测,氨基酸分析仪,灵敏度通常限制在nanomole水平。Beckmen 121M和D-500型氨基酸分析仪的比色分析据称能在100p mol水平进行,但这已是灵敏度的极限。随着荧光技术的应用和发展,荧光检测技术与氨基酸分析仪相结合,与高效液相色谱相结合,使氨基酸、多肽和蛋白质的检测灵敏度达到Pmol水平。本文介绍一种简单易行的改进方法,即用邻苯二甲醛/β-巯基乙醇(OPA/ME)试剂代替     

氨基酸快速薄膜层析法

纤维素薄膜层析法是60年代发展起来的,用于分离和鉴定氨基酸,具有灵敏度高,分辨力强,操作简便等优点,比过去分析这类化合物使用的纸层析方法有了进一步的发展。我们采用微晶型纤维素粉,铺成的薄板应用于植物样品内氨基酸的分离和鉴定,性能良好,优点显著,在氨基酸的定性和定量分析工作上具有一定的成效。     

纸层析－分光光度法检测茶氨酸

为了满足普通实验室对茶中茶氨酸测定的需要,研究了茶氨酸的纸层析-分光光度检测方法。结果表明,用茚三酮．乙醇水溶液做展层剂,对茶苗根、芽叶和茶叶的水浸提液进行纸层析,能够有效地将茶氨酸与其它氨基酸分离,紫色色斑清晰而均匀。用乙醇溶液洗脱色斑后用分光光度计在570nm比色,在20～70此茶氨酸溶液点样量范围内其含量与吸光度呈线性关系。本方法检出限为0．0057mg·mL-1,测定下限为0．0191mg·mL-1,平均回收率90．28％～115．38％,平均相对标准差1．51％,具有安全、药品种类少和操作步骤简单等特点。     

离子交换高效液体色谱法在氨基酸类药物分析中的应用——(一)前列腺肥大症治疗药prostall胶囊的分离测定

本文报导了采用离子交换高效液体色谱仪分离测定混合氨基酸制剂中单一氨基酸的方法,方法操作简便、快速、准确度高,较采用茚三酮比色法,萤光胺法灵敏度约高十倍。在计算含量上采用了外标法和内标法两种方法,实验证明,内标法操作简便,结果误差小,可用于常规分析。