豆天蛾幼虫肠道细菌的初步研究

目的从微生态学角度探索豆天蛾的营养生理活动,了解其肠道菌群构成,找出具有利用价值的菌类,为豆天蛾的资源化开发和生物防治提供一定理论依据和技术基础。方法按照传统的培养分离方法从豆天蛾幼虫肠道消化道内分离纯化获得23个不同菌株,分别对其培养性状、菌体形态、染色反应和生理生化性状进行了系统研究。结果得到以葡萄球菌属（Staphylococcus）、地衣芽胞杆菌（B．lichenifomis）、丙酸杆菌属（Propionibacterium）为主的细菌23种,并记录了各种细菌的存在情况及数量。结论豆天蛾的菌群种类与其生活习性有关,为进一步研究适合豆天蛾幼虫生长和繁殖的人工饲料提供数据参考。     

利用肠道菌群的分布和16S DNA序列研究鲤科肠道菌系统演化关系

肠道微生物与寄主具有复杂的、多方面的相互依存效应,这种依存效应所产生的共生关系或协同进化关系既可反映寄主间的系统演化关系,也可显示肠道微生物间的系统演化关系,共生关系或协同进化关系是由于寄主与肠道微生物两者之间存在着相互自然选择作用所形成的,在长期的进化历程中逐步发生的共生关系信息很可能被记录在DNA序列中。本文通过检测鲤鱼科8种鱼中9种肠道菌群的分布含量对这9种菌群进行分析,且利用从GenBank调取这9种肠道细菌菌属的43个种或亚种的16S DNA序列的构建NJ树和MP树,将这6个科9个属43个种或亚种分为革兰氏阴性和革兰氏阳性两大类群（一级分枝）。在这两类群中,又以科为单位分为6个亚类群（二级分枝）,而肠杆菌科中则以属为单位分为4个小类群（三级分枝）,此外球状菌与杆状菌也能截然分开。将16S DNA的NJ树隐去所有的种,以属为单位所得到的以分枝形式的无根树在拓扑结构上与菌群分布含量（寄主范围）所构建的无根树相近,但芽孢杆菌在两种无根树的位置中有较大的差异。如果提高检测水平,扩大所检测的寄主对象,这种差异有可能消除。 Abstract:There is a complex- and multi-effect for interdependent survival between intestinal- microorganisms and hosts.The symbiosis or coevolution that results from this effect for interdependent survival is used to reveal the phylogenies of hosts as well as intestinal microorganisms.The symbiosis or coevolution between intestinal microorganisms and hosts has been generated by interactive natural selection occurred between them.The symbiosis information that has been formed by interactive natural selection during a long evolutionary process must be recorded in DNA sequences.According to this point of view,we analyzed the phylogeny of 9 intestinal bacteria genera using their contents in intestines of 8 Cyrinidate species.At the same time,we fetched the 16S rRNA gene DNA sequences of 43 intestinal bacteria species being included in these nine genera of six intestinal families from GeneBank and constructed phylogenetic trees by NJ and MP methods.The NJ tree and MP tree have the same topologic configuration and are identical with the classical phylogenetic tree.Both the trees of 16S rRNA gene separated 43 bacteria species into gram-negative bacteria group and the gram-positive bacteria group,which are the first branches.Each of the first branches (groups) made again 6 subbranches (subgroups) where each subbranch is a family.Especially,the subbranch (subgroup) of enterobacteriaceace made again four small branches as genus taxon.This tree also shows that bacilliform bacterium is distinct from each other in the NJ and MP trees.After all species on the tree are merged,the topological configuration of the unrooted tree of 16S gene is closed to that of the host range unrooted tree.However,the position of bacillus is greatly changed on both the unrooted trees.The difference can be found if we increase the examination level and extend the hosts examed.     

紫藤蚜肠道细菌的分离及鉴定

目的 依据微生态学原理,针对紫藤蚜的肠道细菌进行分离鉴定,为探索紫藤蚜的营养生理与肠道细菌之间的关系等提供理论依据.方法 利用传统的分离培养方法对紫藤蚜5株肠道细菌的生理生化性状进行系统研究,并针对细菌16SrDNA保守区设计通用引物进行PCR扩增、测序,将获得的16S rDNA序列与美国NCBI信息中心数据库中的发表序列细菌进行比对,分析克隆群中细菌的种属.结果 分离纯化得到的5株细菌经过鉴定,其中1、2、3号菌属于蜡状芽孢杆菌属(Bacillus cereus)、4号菌为沙雷菌属(Serratia bzio)、5号菌为枯草芽孢杆菌属(Bacillus subtilis).结论 本研究为进一步探讨紫藤蚜生长发育与肠道细菌的关系以及深入研究菌株提供工作基础.     

塑料饲养大蜡螟幼虫肠道可培养细菌多样性

【背景】昆虫肠道中存在大量的微生物,是昆虫正常生命活动所必需的。它们能够促进维生素的合成、脂肪和碳水化合物的吸收及利用,同时还可以保护宿主抵御天敌,忍受高温以及促进毒素或异生素的代谢,间接促进资源开发。【目的】研究PE塑料饲喂的大蜡螟幼虫肠道可培养细菌的多样性。【方法】利用16S rRNA基因序列分析技术,结合菌落形态和细胞形态及相关生理生化特征鉴定细菌种类。【结果】从大蜡螟幼虫肠道分离纯化的40株可培养细菌得到16种不同细菌遗传型,分别属于芽孢杆菌科(Bacillaceae)、肠球菌科(Enterococcaceae)、葡萄球菌科(Staphylococcaceae)、莫拉菌科(Moraxellaceae)4个科。其中芽孢杆菌科是肠道可培养细菌的优势细菌种类。结合菌落和细胞形态及生理生化特征,确定肠道可培养细菌为芽孢杆菌属9株、肠球菌属4株、葡萄球菌属2株以及不动杆菌属1株。【结论】通过研究大蜡螟幼虫肠道可培养细菌群落结构组成,可为开展大蜡螟肠道的微生态研究提供相关理论基础。     

豆天蛾越冬幼虫滞育解除后生物学特性的研究

[目的]豆天蛾Clanis bilineata tsingtauica以老熟幼虫进入滞育越冬,为探明豆天蛾滞育解除的机制.[方法]本研究设置4个不同温度梯度,在恒湿条件下,研究不同温度处理下豆天蛾滞育持续时间、化蛹及羽化的差异.[结果]温度对豆天蛾滞育解除存在一定影响.随着温度升高,豆天蛾滞育持续时间和蛹期逐渐缩短,在35℃条件下滞育持续时间和蛹期最短,分别为(34.4±0.3)d和(6.7±1.2)d;而化蛹率、蛹重随温度的升高呈先升高后降低,在25 ℃时,化蛹率最高为(80.60±0.26)％,在30 ℃时,蛹重最大为(4.21±0.07)g/头.豆天蛾成虫羽化率随温度升高而显著降低;25℃条件下,单雌产卵量最大,达到(204±9)粒.本室内条件下,豆天蛾滞育解除的有效积温为111¨日·度.[结论]在温度为25 ℃的条件下最有利于豆天蛾滞育解除后的生长发育.     

菜青虫幼虫肠道细菌的分离及鉴定

目的为深入研究菜青虫肠道的营养生理,分析其取食消化机制,对菜青虫肠道细菌进行了研究。方法从自然种群的菜青虫肠道环境中按传统分离、纯化、培养,获得细菌5个菌株,对其茵体形态、染色反应、培养性状、生理生化反应进行了系统研究。结果鉴定结果l号菌株为李斯特菌属（Listeria）,2号菌株为皮杆菌属（Dermabacter）,3号菌株为丙酸杆菌属（Propionibacterium）,4号菌株为沙雷菌属（Serratia）,5号菌株为短状杆菌属（Brachybacterium）。结论在菜青虫肠道环境中分离出5个菌株,鉴定出分类地位。其菌株之间的数量具有明显差异,以皮杆菌属数量最多（2×10^8）,需进一步研究该菌的功能及其在菜青虫肠道中的作用。     

小碎斑鱼蛉幼虫肠道细菌分离及鉴定研究

目的从微生态学角度研究小碎斑鱼蛉幼虫的营养生理活动。方法从小碎斑鱼蛉幼虫肠道环境中进行分离、纯化和培养,获得3个细菌菌株,对其菌体形态、染色反应、培养性状和生理生化反应进行系统研究。结果上述3个菌株均属于芽胞杆菌属(Bacillus),1号菌株为巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium),2号菌株为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis),3号菌株为地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)。结论小碎斑鱼蛉幼虫肠道环境中的不同细菌,其数量存在明显差异。     

红裸须摇蚊幼虫肠道可培养细菌多样性及耐受重金属功能初步研究

红裸须摇蚊Propsilocerus akamusi为华北地区常见耐污种,广泛分布于各种水体中。本研究采用传统培养法对4龄红裸须摇蚊幼虫肠道内细菌种类进行分离,利用16S rRNA基因序列分析比对,结合菌落形态、系统进化分析等方法进一步鉴定菌株种类,同时探究可培养菌株对重金属（铜、镍）的耐受情况。结果表明,红裸须摇蚊幼虫在重金属铜暴露下的24 h-LC50、48 h-LC50、72 h-LC50、96 h-LC50分别为6304.86、403.59、29.33以及14.43 mmol/L,在重金属镍暴露下的24 h-LC50、48 h-LC50、72 h-LC50、96 h-LC50分别为339.52、182.18、102.59以及60.94 mmol/L。利用LB、NA、BHI、MC 4种培养基,从幼虫肠道分离纯化到16种不同遗传型细菌,分属2门 9科16属,其中优势菌门为变形菌门Proteobacteria。另外,丛毛单胞菌科Comamonadaceae丛毛单胞菌属Comamonas丛毛单胞菌Comamonas sp.对重金属铜和镍有良好耐受性。通过研究红裸须摇蚊幼虫肠道可培养细菌群落组成以及重金属胁迫下摇蚊幼虫肠道细菌群落生长情况,可为水生昆虫肠道菌群资源库的开发提供了一定的思路,也可为筛选出具备重金属代谢功能的细菌资源奠定基础。     

昆虫病原线虫共生细菌的分子生物学鉴定

对来自全国各地的23个未鉴定的共生菌菌株和本室保存的5个菌株的部分16S rDNA序列进行PCR扩增和测序,与GenBank中已知种的共生菌及4个其它肠杆菌的同源序列比较,利用DNAstar软件绘制系统树,初步确定了这28个共生菌的分类地位。其中品系0396Y与Xenorhabdus bovineii的相似值为100%,可能是该种的一个品系;品系0312-4与X.beddingii的相似值为100%,可能是该种的一个品系。     

豆天蛾生产与综合利用的研究进展

豆天蛾是一种危害豆类作物的农业害虫,但同时又是重要的资源昆虫。本文针对豆天蛾的资源利用,对其资源发掘潜力及开发利用现状进行了综述,并讨论了豆天蛾工厂化生产繁育中亟需解决的若干问题。     

大豆品种(系)和种植密度对豆天蛾幼虫存活及生长发育的影响

豆天蛾Clanis bilineata tsingtauica Mell幼虫,是一种食用昆虫,富含蛋白质、维生素和矿质元素,具有很高的营养、药用和经济价值。了解适宜豆天蛾幼虫生长发育的大豆品种（品系）和种植密度,可为豆天蛾幼虫规模化饲养提供理论基础。研究通过设置两因素裂区实验,在10个品种（品系）大豆和2个种植密度水平下,测定豆天蛾幼虫生物学参数,明确适宜豆天蛾幼虫养殖的大豆品种（品系）和种植密度。结果表明,不同大豆品种（系）和种植密度对豆天蛾幼虫存活及生长发育均有显著影响;其中使用连151、淮豆9号、东辛3号和H0573大豆饲养的豆天蛾幼虫产量和存活率较高,虫体长度较长,发育历期较短;大青豆饲养的豆天蛾幼虫产量较低,幼虫发育整齐度较差,发育历期长。当种植密度为40 cm×30 cm时,豆天蛾幼虫存活和发育历期整齐度均显著高于种植密度40 cm×15 cm。综上所述,较适宜豆天蛾幼虫养殖的大豆品种（品系）为连151、淮豆9号、东辛3号和H0573,种植密度为40 cm×30 cm。     

鸡肠道菌群总DNA三种提取方法的比较

目的比较不同方法提取鸡肠道菌群总DNA的差异,为分子方法分析肠道菌群组成提供质量较高的DNA模板。方法采用反复冻融法、酶裂解法和试剂盒法（E.N.Z.A Stool DNA Kit）来提取鸡肠道菌群的总DNA,并根据DNA浓度及纯度、16S DNA扩增产物和ERIC-PCR产物所反映的片段多态性4个指标,对这3种方法提取的DNA质量进行比较。结果3种方法均能提取DNA,所得DNA都可以用于16S DNA的扩增,但后2种方法所得DNA的ERIC-PCR结果能反映出更高的菌群多样性。结论试剂盒法和酶裂解法所提取的DNA质量好,适合用于肠道菌群的分子生态研究。     

Glutathione suppresses lipid oxidation of Clanis bilineata larvae meat during frozen storage

The lipids of Clanis bilineata larvae meat (CBLM) are susceptible to oxidation, and thus the commercial and consumption values of CBLM decrease during frozen storage. In the present study, peroxide values (PV), thiobarbituric acid‐reactive substances (TBARS), free fatty acid (FFA) content, fatty acid composition, and likeness (palatability) score of CBLM were determined to investigate the effect of glutathione on the oxidation of CBLM lipids. Glutathione decreased the PV, TBARS, and FFA content, maintained fatty acid composition, and increased the likeness (palatability) score of the CBLM, indicating that glutathione can be used as a cryoprotectant to extend the shelf life of CBLM.     

抑黄曲霉乳酸菌的筛选及菌种鉴定

目的筛选具有抑制黄曲霉(Aspergillus flavus)生长的乳酸菌。方法以各地泡菜、实验室自制泡菜、豆浆渣以及新鲜猪肠、鸡肠道内容物为材料,采用牛津杯法筛选所需菌株。对筛选出的菌株进行生理生化及16S rRNA基因序列同源性分析。结果分离得到756株乳酸菌,其中有6株菌株对黄曲霉的生长有明显的抑制作用。结论实验获得的6株产酸菌,3株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),2株为消化乳杆菌(L.alimentari-us),1株为亚利桑那乳杆菌(L.arizonenensis)。     

家蚕肠道产蛋白酶细菌的分离筛选与分子鉴定

目的肠道细菌对家蚕具有重要的生理作用,探明家蚕肠道产蛋白酶细菌菌群对家蚕肠道细菌的高效开发与利用具有十分重要的意义。方法从菁松×皓月品种4龄家蚕肠液中分离与纯化肠道细菌,获得一株产高活力蛋白酶细菌,对该菌菌落进行形态学鉴定及菌体的显微镜检并结合16S rDNA方法进行了鉴定。结果该菌为革兰阴性杆菌,属于嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophom onas maltophilia)。结论该产蛋白酶细菌产酶能力较高,可进一步开发研究并用作微生态制剂。     

口虾蛄肠道细菌种群多样性的分子分析

目的探讨口虾蛄肠道细菌种群的多样性。方法通过不依赖于分离培养的分子生物学分析方法,以直接提取虾蛄肠道细菌的总DNA为模板经过PCR扩增16S DNA,然后经与T载体连接建立质粒文库。用限制性内切酶(BsuRⅠ和Hin6Ⅰ)对阳性克隆的PCR扩增产物进行限制性酶切片段长度多态性(RFLP)分析,选取有代表性的克隆进行测序。结果16S DNA序列通过CLUSTALX进行多序列比对及NCBI数据库中的BLAST分析后发现口虾蛄肠道细菌主要分成4类:未培养细菌,未培养支原体科细菌,未培养δ变形菌和马特斯支原体。结论口虾蛄肠道细菌种类较为简单,且多为未培养的细菌。     

富硒猴头菇对小鼠肠道菌群的调节作用

目的以昆明小鼠为实验对象,观察富硒猴头菇对小鼠肠道菌群的影响。方法设高、中和低3个剂量组和1个普通猴头菇对照组,1个蒸馏水对照组,搜集粪便,用细菌16S rDNA荧光定量PCR法测定3大类肠道菌的数量。结果富硒猴头菇冻干粉灌胃后,中剂量组和高剂量组小鼠肠道中大肠埃希菌明显减少,低、中剂量组双歧杆菌增多,高剂量组乳酸菌增多,差异有统计学意义(P0.05)。且断药3 d后,中剂量组的大肠埃希菌、双歧杆菌数量,高剂量组的大肠埃希菌、乳酸菌数量与正常对照组相比差异仍有统计学意义。结论富硒猴头菇对小鼠肠道菌群有明显调节作用。