世界首例二代克隆牛“茁壮成长”

著名美籍华人科学家、康涅狄格大学教授杨向中5月23日宣布,他和日本研究人员合作进行的克隆牛再克隆实验,即二代克隆牛实验已获得成功。这是世界上大动物再克隆实验的首个成功案例,标志着克隆技术又取得了新的突破。所谓二代克隆牛指的是用从第1代克隆牛身上取得的体细胞再次进行克隆。虽然再克隆实验早在6年前已在小鼠身上获得成功,但是在其他动物中的尝试,包括多莉羊的再克隆却一直没有成功。杨向中和日本鹿儿岛良种牛育种中心洼田力研究员继1998年使用一头日本著名种公牛的耳皮肤细胞克隆出4头第1代克隆牛后,又采集其中一头克隆牛的体细…     

国内首批克隆牛即将生产

山东银香伟业集团董事长王银香介绍说,2002年1、2月间在山东曹县五里墩降生的5头克隆牛已经全部怀孕,预产期为4月中上旬。中国科学院动物研究所陈大元教授说:“如果这一实验成功,将进一步证明克隆牛具有正常的生育繁殖能力。”此前,世界上第1头克隆羊“多莉”曾成功繁育过后代。2001年,中国科学院动物研究所在山东省曹县五里墩进行“家畜体细胞无性繁殖(克隆)”科学研究。2002年初,先后有14头体细胞克隆牛降生,成为中国第1批自主培育的本土克隆牛,并有5头顺利存活。摘自《科学时报》2004年3月26日国内首批克隆牛即将生产…     

小RNA与卵的生长

近日,中国农业大学成功地获得了中国第一头体细胞克隆猪,这是我国独立自主完成的首例体细胞克隆猪,标志着我国已成为第7个(继英国、日本、美国、澳大利亚、韩国及德国之后)拥有自主克隆猪能力的国家,填补了我国在这一领域的空白。猪的体细胞克隆难度     

我国首次获得成年体细胞克隆牛群体

中国自主完成的首批成年体细胞克隆牛于2 0 0 2年 1月中旬到 2月中旬陆续降生 ,12头怀孕的受体母牛共产下了 14头克隆牛犊 ,现存活 5头(见封面 ) ,实现了我国成年体细胞克隆牛成活群体零的突破 ,标志着我国科研人员已完全掌握了世界一流的体细胞克隆牛技术 ,使我国成为继日本 (1998)、新西兰 (1998)、美国 (2 0 0 0 )等国家之后掌握体细胞克隆牛关键技术的少数国家之一。体细胞克隆牛研究是国家自然科学基金委员会的重点项目“家畜体细胞无性繁殖研究”的一部分 ,项目的首席专家是中国科学院动物研究所陈大元研究员。该项研究由中国科学院动…     

利用核移植一卵产三头克隆犊牛获得成功

全国农业协作联合会(JA全农)的饲料畜产中央研究所的青柳敬人等利用核移植技术一卵产三头犊牛(双子×1,单子×1)获得成功。目前核移植的生存犊牛都是1卵产一头犊牛。从受精卵中得到三头存活犊牛在日本还是首例。除此之外,农林水产省家畜改良中心也预计今年11月中旬一卵生产五头犊牛克隆(双胞胎×2,单胞胎×1)。估计明年4月在枥本县酪农试验场诞生克隆牛。在日本克隆牛相继诞生。在这三年以美国、欧洲为中心确立克隆牛的生产技术。去年底报告了1卵产11头的克隆牛。加拿大Alta Genetics公司得到第Ⅲ代克隆牛、第Ⅳ代胚盘泡。     

我国第1头体细胞克隆猪获得诞生

中国农业大学成功地获得我国第1头体细胞克隆猪．这是我国独立自立完成的首例体细胞克隆猪。     

热烈祝贺《动物学报》创刊70周年——莱阳农学院动物胚胎工程中心科研成果简介

2001年11月3日和6日,中国首例和第二例健康成活的体细胞克隆牛“康康”和“双双”在山东莱阳农学院动物胚胎工程中心实验场诞生。该项目是由山东省教育厅重大科研项目“克隆牛技术的研究（J01H06）”和莱阳农学院“克隆牛技术的研究（Y0006）”课题资助,研究出的体细胞克隆牛技术与国际上其他克隆牛技术相比,其创新点是：     

牛卵核移植技术的应用

用去核的牛卵母细胞进行核移植,形成重构胚,胚胎移植后,可产生克隆牛。将克隆牛的肉和奶制成肉粉和奶粉饲喂大鼠,大鼠的生理功能不受影响。牛卵核移植技术为珍稀动物的保护提供了一条重要途径,对于细胞治疗的研究也具有重要意义。通过牛卵核移植技术,可构建异种克隆胚胎,用以研究核质相互作用。将牛卵核移植技术和体细胞基因修饰技术相结合,可生产转基因克隆牛。     

我国培育世界首例冷冻胚胎克隆水牛

近日,广西水牛研究所利用克隆胚胎冷冻技术,使一头杂交母水牛顺利产下一头冷冻胚胎移植的体细胞克隆雌性水牛犊。冷冻胚胎克隆水牛犊在世界尚属首例,这是继1月1日广西水牛研究所利用国外优质种牛和本地水牛成功克隆出世界首例亚种问水牛之后的又一重大研究成果。该项目为农业部“948”项目。     

初乳中乳腺上皮细胞体细胞克隆牛的诞生

《日经生物技术》１９９９年５月１０日第１５页报道：雪印乳业公司４月２６日宣布,来自初乳中乳腺上皮细胞的体细胞克隆牛诞生了。来自初乳中乳腺上皮细胞的体细胞克隆牛诞生也是世界首例。该公司受精卵移植研究所的研究组将含于黑白花荷兰牛种牛（雌牛）乳中的乳腺上皮细胞移植到除核的未受精卵中。核移植等实验方法使用的是英国Ｒｏｓｌｉｎ研究所的在血清饥饿状态下培养细胞的方法。移植给８头受胚牛时,确认３头妊娠,其中１头妊娠到第１５７天流产。１头于４月２０日（第２７９日）剖腹,另１头于４月２１日（第２８０天）人工分娩各…     

体细胞克隆牛和转基因体细胞克隆牛的遗传学分析(英)

分析了来自同一细胞系的体细胞克隆牛甜甜、庆庆、浒娃及来源同一培养转基因体细胞系转基因体细胞克隆牛九妹、乐娃和1个妊娠8个月转基因流产胎牛8C2以及随机抽取的1头鲁西黄牛(LX)、1头褐斯坦牛(HS)在24个微卫星位点标记牛的基因型.结果表明24个多态位点均表现出多态,等位基因数为1～5个,平均为3.17个.根据网上公布的数据,按其最高频率计算,甜甜、庆庆、浒娃、九妹、乐娃、8C2与培养细胞系、转基因细胞系间匹配概率为1.17×10^－36,根据本研究观察到的数据计算,匹配概率为1.90×10^－23;而与随机抽取的1头鲁西黄牛及褐斯坦牛的基因型分别在23和20个位点上完全不同.     

牛体细胞核移植显微操作环节的优化

本研究从牛卵母细胞去核方法(纺锤体观测仪法&Hoechst33342染色法)、供体细胞核引入去核卵细胞质的方法(卵细胞质注射法和电融合法)和重构胚胎电融合(3组参数)等3个环节对牛体细胞核移植的显微操作过程及相关参数进行了筛选优化。以核移植胚胎的卵裂率、囊胚发育率作为检测指标,对不同的方法所获得的克隆胚胎的卵分裂率与囊胚发育率进行比较,最后筛选获得1个优化的牛体细胞核移植操作程序,即采用Spindle view系统对牛卵母细胞进行去核操作,将供核体细胞注射到卵周隙,然后通过电融合法将供体核引入去核卵细胞质(电融合参数为1.9kV/cm,脉冲时程10μs,方波2次间隔2s)。以此核移植程序进行牛体细胞核移植实验,自获得克隆胚胎中筛选80枚优质囊胚移植到33头受体牛子宫内,最后2头母牛产下2头克隆牛犊,结果表明利用该优化的显微操作环节进行牛体细胞核移植可以获得体细胞克隆牛犊。     

日本人即将获得克隆奶牛

据报道,日本Yamaguchi University的研究者很快就能成功地培育出克隆奶牛。如果他们的计划得以实现,这将是人类首次复制出高等哺乳动物。目前,有三头奶牛所具有的性质与她们优秀的母亲完全一样。研究者取出5头奶牛的未受精卵,并用生长因子激刺其分裂。克隆胚活体生长近1月时将它们植入奶牛的子宫。这些奶牛已服用促性腺激素(一种能育激素)。迄今,有三个胚胎已发育至6周,如果不出     

我国体细胞克隆牛的研究进展

近年来,由于体细胞克隆技术在畜牧业生产、疾病治疗、生物学基础理论研究及濒危动物保护等诸多领域所蕴藏的巨大应用价值,克隆效率成为科学界研究的热点问题。本文对克隆技术的相关影响因素进行了综述,研究表明,不同细胞系影响到体细胞克隆牛效率,胎儿细胞和颗粒细胞重构胚的囊胚发育率、犊牛成活率比成年成纤维细胞高。关于卵母细胞和克隆胚胎冷冻保存的研究表明,玻璃化冷冻法可以用于克隆胚胎以及卵母细胞的冷冻保存。在此基础上,讨论了国际上哺乳动物体细胞克隆研究新进展和体细胞克隆的效率,指出体细胞克隆中亟待解决的问题。     

血清孕酮水平检测在克隆胚胎移植受体牛的筛选及妊娠诊断中的应用

目的:孕酮(progesterone,P4)作为一种生殖激素,在牛的发情期和妊娠期呈规律性变化,且在妊娠的建立和维持过程中发挥着重要作用。拟应用孕酮浓度测定辅助人工观察筛选克隆胚胎移植受体牛并监测其整个妊娠过程。方法:通过对自然配种牛不同生殖阶段血液中孕酮水平的分析,建立其在发情初期、妊娠期孕酮浓度的变化规律,以此为依据辅助人工观察筛选适合胚胎移植的受体牛。同时将在体外培养7天后的体细胞核移植重构囊胚移植到所筛选出的同期发情的受体牛子宫内,并应用孕酮测定监测其妊娠状态。实验结果:(1)运用孕酮检测筛选克隆胚胎移植受体牛时,当孕酮浓度在发情第0天和第5天分别为≤0.64nmol/L和2～8nmol/L时,适宜作为胚胎移植受体牛,根据此筛选指标能够排除50%左右假发情牛。(2)运用孕酮检测较传统的人工观察方法,胚胎移植的克隆牛出生率提高了7.1倍。结论:运用牛血清孕酮检测方法能有效提高母牛生理周期判断的准确性,有利于选择合适的胚胎移植受体牛,既能实时、有效地监测怀孕受体牛的妊娠状态,又避免了靠人工观察受体牛返情、流产时的人为疏漏和误判,有效地提高受体牛的利用率,提高克隆牛的生产效率,并能推广应用于畜牧行业牛的生产繁育中。     

体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1克隆猪

转ω-3脂肪酸去饱和酶基因猪在优质猪培育及研究ω-3不饱和脂肪酸预防心血管和癌症疾病中的作用方面有着重大的应用．本研究首次通过体细胞核移植制备了转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1猪．将sFat—1基因转染到大白猪胎儿成纤维细胞,获得转基因阳性细胞克隆,然后以转基因细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎,胚胎体外培养或进行移植．先后移植了1889枚1-4细胞期克隆胚胎到10头受体母猪的输卵管内,28天B超检测9头受体母猪妊娠（90％）,7头妊娠足月（70％）分娩产下21头仔猪,体细胞克隆猪的效率为1．1％（出生仔猪／移植胚胎）．体细胞克隆猪效率的提高,主要是对克隆胚胎的移植环节进行了改进,比较了受体母猪排卵状况对胚胎移植效率的影响．当受体母猪卵泡发育处于即将排卵或正在排卵阶段,能够获得较高的妊娠率和妊娠足月率（100％）,而排卵后移植妊娠足月率为0％．对健康存活15头克隆猪进行了PCR和Southern检测,证实13头为转基因猪,转基因阳性率为87％．RT—PCR检测13头转基因猪,12头表达sFat—1基因．以上结果表明,利用优化的体细胞转基因结合核移植技术,可以成功地批量生产转sFat-1基因的克隆猪．     

体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1克隆猪

转ω-3脂肪酸去饱和酶基因猪在优质猪培育及研究ω-3不饱和脂肪酸预防心血管和癌症疾病中的作用方面有着重大的应用.本研究首次通过体细胞核移植制备了转线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1猪.将sFat-1基因转染到大白猪胎儿成纤维细胞,获得转基因阳性细胞克隆,然后以转基因细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎,胚胎体外培养或进行移植.先后移植了1889枚1~4细胞期克隆胚胎到10头受体母猪的输卵管内,28天B超检测9头受体母猪妊娠(90%),7头妊娠足月(70%)分娩产下21头仔猪,体细胞克隆猪的效率为1.1%(出生仔猪/移植胚胎).体细胞克隆猪效率的提高,主要是对克隆胚胎的移植环节进行了改进,比较了受体母猪排卵状况对胚胎移植效率的影响.当受体母猪卵泡发育处于即将排卵或正在排卵阶段,能够获得较高的妊娠率和妊娠足月率(100%),而排卵后移植妊娠足月率为0%.对健康存活15头克隆猪进行了PCR和Southern检测,证实13头为转基因猪,转基因阳性率为87%.RT-PCR检测13头转基因猪,12头表达sFat-1基因.以上结果表明,利用优化的体细胞转基因结合核移植技术,可以成功地批量生产转sFa...     

广西巴马小型猪克隆胚的构建及胚胎移植

通过胚胎移植验证构建的广西巴马小型猪克隆胚是否可以发育到期.利用刺入式手术胚胎移植法,将0.5～1.5日龄巴马小型猪克隆胚移植到2头巴马小型猪和2头陆川猪的输卵管壶腹部.其中2头巴马小型猪和1头陆川猪返情,另外一头陆川猪于2007年10月13日产下1头克隆雄性巴马小型猪.说明巴马小型猪克隆胚能够在受体猪体内发育到期并产仔.     

在Science杂志公开成牛体细胞克隆牛的实验数据

《日经生物技术》１９９８年１２月２１日号第１４页报道：于１９９８年１２月１１日号在Ｓｃｉｅｎｃｅ杂志上刊载了近畿大学农学部教授角田幸雄等小组进行的来自成牛的体细胞克隆牛培育的详细实验数据。该小组宣布,目前在世界上首次成功地诞生了来自成牛的体细胞克隆牛...     

供体细胞类型对体细胞克隆牛生产效率的影响

建立了中国红系冀南黄牛颗粒细胞系(YGR)、Holstein奶牛颗粒细胞系(HGR)、Holstein奶牛不同个体的成年成纤维细胞系(AFB)以及Holstein奶牛同一个体的胎儿成纤维细胞系(FFB)和胎儿输卵管上皮细胞系(FOV). 以上述不同类型的体细胞为核供体, 进行了体细胞核移植, 共成功培育出12头体细胞克隆牛. 比较了不同类型供体细胞的重构胚的发育潜能, 结果表明: (ⅰ) YGR和HGR的重构胚的囊胚发育率(33.2% vs 35.1%)无显著差异(P > 0.05), 妊娠率分别为33.3%和30.2%, 产犊率分别为16.7%和11.6%; (ⅱ) Holstein奶牛不同个体AFB的重构胚的囊胚发育率(27.9% vs 39.4%)差异显著(P < 0.05), 妊娠率分别为36.2%和36.4%, 产犊率分别为14.9%和27.3%; (ⅲ) Holstein奶牛同一个体的FFB和FOV的重构胚的囊胚发育率(37.9% vs 41.5%)差异显著(P < 0.05), 妊娠率分别为45.7%和24.1%, 产犊率分别为22.9%和10.3%. 综合比较Holstein奶牛的4种体细胞(HGR, AFB, FFB和FOV)的重构胚的发育情况, 结果显示: 在体外发育阶段, FOV的重组胚的囊胚发育率(41.5%)最高, FFB (37.9%)和HGR (35.1%)次之, AFB(29.4%)最低, 三者之间差异显著(P < 0.05). 在体内发育阶段, 4种供体细胞克隆胚胎的妊娠率分别为30.2%, 36.2%, 45.7%和24.1%, 产犊率分别为11.6%, 17.2%, 22.9%和10.3%.