信使RNA差异显示技术的最新进展

各种疾病，如肿瘤、遗传性疾病都是一种或多种基因异常表达的结果。寻找、定位疾病相关基因在目前分子生物学研究中占有十分重要的地位，Ｌｉａｎｇ等１９９２年首创了信使ＲＮＡ差异显示技术（ｍｅｓｓｅｎｇｅｒＲＮＡｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ，ｍＲＮＡ...     

利用mRNA荧光差异显示技术规模化筛选棉纤维特异表达基因

以陆地棉（Gossypium hirsutum L.）品种TM-1开花后9d、21d、27d三个不同发育时期的棉花纤维为材料,利用mRNA荧光差异显示 (FDD) 技术,筛选到109个差异显示的cDNA片段。在此基础上,结合两轮反Northern杂交筛选和Northern杂交分析,获得了多个仅在棉花纤维细胞中特异表达或在纤维中优先表达基因的cDNA片段,序列测定和数据库搜索分析表明,这些cDNA片段中的多数还未有报道。本工作为克隆上述基因的全长cDNA,并进一步研究它们在棉纤维发育中的功能奠定了基础。     

mRNA差异显示

分离差异表达的基因是研究生命调节过程的重要手段,mRNA差异显示技术是一种能成功分离差异表达基因的方法,文章对该方法的基本原理、方法步骤及其应用作了较为详细的介绍。     

快速、有效筛选新的功能基因——荧光差异显示技术

控制生物性状的基本单位是基因,研究细胞的基因表达一直是分子生物学的重要课题之一。不同细胞间基因表达的差异决定了生命活动的多样性,如发育与分化、内环境稳定、细胞周期调节等。近年来,随着DNA重组技术的发展,已有数万个人类基因被克隆分析,要从如此众多的表达基因中找出引起细胞生理或病理变化的基因并非易事。应用荧光标记的mRNA差异显示技术将有可能在一定程度上起到关键的作用。以总RNA为模板,采用荧光标记的锚定引物,通过逆转录、差异显示PCR反应,经5.6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离差异条带,条带清晰、明亮、背景低,各样本间的差异不仅呈有无的变化,亦表现出很多强弱改变;本实验室经过多年的坚持摸索、研究,现已能成功的应用荧光标记差异显示技术,可快速（2d）、敏感、经济有效的筛选各种未知的表达基因。     

快速、有效筛选新的功能基因——荧光差异显示技术

控制生物性状的基本单位是基因 ,研究细胞的基因表达一直是分子生物学的重要课题之一。不同细胞间基因表达的差异决定了生命活动的多样性 ,如发育与分化、内环境稳定、细胞周期调节等。近年来 ,随着DNA重组技术的发展 ,已有数万个人类基因被克隆分析 ,要从如此众多的表达基因中找出引起细胞生理或病理变化的基因并非易事。应用荧光标记的mRNA差异显示技术将有可能在一定程度上起到关键的作用。以总RNA为模板 ,采用荧光标记的锚定引物 ,通过逆转录、差异显示PCR反应 ,经 5 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离差异条带     

荧光差异显示技术在分离细菌体内诱导表达基因中的应用

面对复杂的宿主环境,细菌是通过调节表达不同的毒力基因实施其感染过程。目前已建立起多种分析鉴定体内特异表达的细菌毒力基因的方法;其中荧光差异显示技术的应用为鉴定细菌的毒力基因以及揭示细菌致病机理开辟了新途径。本对此作一扼要综述。     

mRNA差异显示技术及其应用

mRNA差异显示技术是国外最近发展起来的一种分离表达水平出现差别的基因的新技术。目前已广泛用于人类及其他动物生长发育基因调控、基因克隆研究,也开始用于植物基因分析、杂种优势机理等方面研究。本文综述这一新技术原理、实验步骤、应用及问题与展望。     

柑橘mRNA差异显示技术体系建立

明柳甜橘是从春甜桔自然芽变中选育出来的新品种,本研究以春甜橘和明柳甜橘的叶片为试验材料,首先提取春甜橘和明柳甜橘叶片的总RNA,经3种锚定引物(HT11A,HT11C,HT11G)反转录成3类cDNA,再利用相应的锚定引物和34个随机引物(HAP1-HAP34)组成引物对,反转录cNA进行差异显示PCR扩增,将扩增产物经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后进行银染,获得了比较清晰的差异条带,然后回收差异条带并进行克隆,初步分离获得一些春甜橘和明柳甜橘差异基因,建立了柑桔mRNA差异显示技术,为进一步分析导致柑橘芽变的分子机理奠定基础.     

克隆未知基因的新方法——mRNA差异显示技术

高等生物大约有１０万个不同的基因,但只有１５％的基因在任何个体的细胞中都表达。选择哪个基因表达决定了生命历程中的许多重要环节,如：细胞的发育、分化、应激、细胞周期调节、衰老和细胞凋亡。因此,对不同类型、不同时期细胞的基因表达情况进行比较研究,可以获得...     

植物无融合生殖的分子标记和Mrna差异显示研究进展

综述了分子标记和mRNA差异显示技术在植物无融合生殖研究中的应用进展。并对今后的研究方向进行了探讨。     

mRNA差别显示技术分离草菇低温诱导基因

本文报道采用改良的mRNA差别筛选法,通过选用3'锚定引物和18-25碱基的PCR随机引物组合,以琼脂糖凝胶电泳,EB显色替代聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影,对低温处理草菇(Volvariella volvacea)及正常草菇基因表达进行筛选、分析,结合RNA斑点杂交技术加以验证,分离得到70个草菇低温诱导DNA片段。     

mRNA差别显示技术分离草菇低温诱导基因*

本文报道采用改良的mRNA差别筛选法,通过选用3'锚定引物和18-25碱基的PCR随机引物组合,以琼脂糖凝胶电泳,EB显色替代聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影,对低温处理草菇(Volvariella volvacea)及正常草菇基因表达进行筛选、分析,结合RNA斑点杂交技术加以验证,分离得到70个草菇低温诱导DNA片段。     

通过荧光差异显示PCR法分离水稻中由ABA调节的基因

脱落酸(ABA)在植物种子发育以及植物细胞对外源环境因子(如逆境、胁迫等)反应过程中起着重要的作用,对其调节基因的分离将有助于了解其相关信号传导途径及作用机制.通过荧光差异显示PCR法我们由水稻中分离了部分ABA调节的cDNA片段,在所分离克隆的17个片段中,有14个片段被ABA诱导(2、4、8、12h),有3个片段被ABA抑制(8h).测序及序列分析表明这些片段可能分别编码与植物光合作用(7)、信号传导(1)、转录调控(2)、代谢(6)相关的蛋白或未知蛋白(1)而且其表达可能受到ABA的调节或ABA参与了其作用,对其中可能编码α/β水解酶折叠蛋白、酪氨酸磷酸酶、液泡H+-ATPase的mRNA进行的RT-PCR和Northern blot分析,确证了ABA对它们表达的调节作用.在此基础上对FDD-PCR技术及ABA作用的可能机制进行了讨论.     

The function of proteins that interact with mRNA

Specific proteins are associated with mRNA in the cytoplasm of eukaryotic cells. The complement of associated proteins depends upon whether the mRNA is an integral component of the polysomal complex being translated, or, alternatively, whether it is part of the non-translated free mRNP fraction. By subjecting cells to ultraviolet irradiation in vivo to cross-link proteins to mRNA, mRNP proteins have been shown to be associated with specific regions of the mRNA molecule. Examination of mRNP complexes containing a unique mRNA has suggested that not all mRNA contain the same family of associated RNA binding proteins. The function of mRNA associated proteins may include a role in providing stability for mRNA, and/or in modulating translation. With the recent demonstrations that both free and polysomal mRNPs are associated with the cytoskeletal framework, specific mRNP proteins may play a role in determining the subcellular localization of specific mRNPs.     

用差异显示PCR技术克隆冬小麦春化设定cDNA克隆实验系统的建立

差异显示PCR技术是一种新近发展起来的在真核细胞中检测与克隆特异表达基因的手段。本文建立了用此技术克隆春化相关基因的研究系统,并提供了诸如总RNA的提取、污染DNA的去除、sscDNA的逆转录、PCR参数、扩增cDNA的电泳、特异cDNA的收集与重扩增等在方法上的细节。用这种技术分离了一个仅在春化20天这一特异时期表达的春化设定cDNA克隆VPC28。这些结果也适用于更加广泛的类似研究。     

差异显示法分离赤霉素调控的水稻(Oryza sativa)cDNA(英文)

赤霉素(gibberellins)是植物生长发育过程中一类重要的调节激素。本文运用反转录和聚合酶链式反应建立了一套旨在分离差异表达cDNA的差异显示方法。以籼稻珍汕97 B为材料,将赤霉素GA_3处理后的苗期水稻与对照的cDNA片段进行比较,鉴定了15个差异cDNA,并将它们从测序胶中回收和再次扩增获得差异表达的cDNA;用其中一个差异cDNA片段DDF1为探针的Southern和northern杂交证实,DDF1所对应的基因是一个单拷贝基因,可被高浓度的GA_3诱导并获得高水平表达。     

用银染mRNA差异显示进行基因筛选

介绍一种简便、快速的mRNA差异显示法银染法。并对在逆转录时总RNA加入的量、dNTP的浓度、银染的条件、差异条带的回收及再扩增等方面作了探讨和改进。实验表明,用银染进行mRNA差异显示具有快速、简便、经济、可靠性高等优点。为新基因的发现和克隆提供了有用的手段。