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1.
通过胞质内注射法将牛和山羊胎儿耳朵成纤维细胞分别注入去核牛卵母细胞中构建同种胚胎和异种胚胎。采用mCR2aa和mSOF分别培养, 然后在mSOF中按不同培养时间添加8mg/mL BSA或者10%FBS,培养前3d和培养3d后添加的补充物质及次序为:(1)BSA+FBS;(2)BSA+BSA; (3)FBS+BSA;(4)FBS+FBS。根据培养胚胎的卵裂率、8/16-cell发育率、囊胚发育率及囊胚细胞数筛选出最好的培养方法。结果:(1)mSOF中培养同种胚胎和异种胚胎的卵裂率,8/16-cell发育率以及囊胚发育率均明显高于在mCR2aa中的培养结果(P<0.05 )。(2)添加BSA+FBS组的mSOF培养胚胎的卵裂率、8/16-cell发育率、囊胚发育率和囊胚细胞数同种依次为79.8%±7.1%、49.7%±3.5%、21.5%±1.8%和115.2±4.3,异种依次为40.1%±6.3%、29.2%±2.0%、13.4%±2.1%和100.1±3.0,均明显高于其他培养组(P<0.05)。结论:山羊-牛异种克隆胚胎可以用优化的牛胚胎培养体系进行培养。同种胚胎和异种胚胎的最佳培养方法均为前3d用mSOF+BSA培养液,3d后用mSOF+FBS培养液。 相似文献
2.
牛体细胞克隆胚胎类ES细胞集落的筛选及其核移植 总被引:2,自引:0,他引:2
对第7d的牛体细胞克隆囊胚进行体外增殖培养,分离筛选类ES细胞,并对其进行了传代培养,接种在饲养层上的体细胞克隆囊胚细胞,在传代的24h内增殖形成小集落,2~3d有雀巢状的集落出现,筛选形态相同的细胞集落进行传代培养,4~5代后,皿底出现多个大小不等的多细胞单层集落,将传4~5代的细胞集落接种到无饲养层的4孔培养皿中培养,24h出现多细胞单层集落,4~7d长满皿底,并形成上皮样细胞,呈网状,将其作为核供体细胞进行核移植实验。结果有80%(40/50)核-质融合的移核重构胚发生卵裂,5%(2/40)发育至桑椹胚期,2.5%(1/40)发育至囊胚期,92.5%(37/40)停止在2~4细胞期,结果表明:采用牛体细胞克隆胚胎的类ES细胞进行核移植,具发育形成早期胚胎的潜能。 相似文献
3.
牛胚胎生殖细胞的分离与培养 总被引:2,自引:0,他引:2
胚胎生殖细胞 (Embryonicgermcells,EG)是由生殖嵴原始生殖细胞 (Primordialgermcells,PGCs)中分离得到的一种未分化而多潜能的干细胞。牛EG细胞的研究在EG细胞核移植、转基因及建立生物反应器方面具有广阔的应用前景。本研究从 2 9- 70日龄牛胎儿PGCs分离得到EG细胞 ,经过抑制分化培养 ,其中一个细胞系传至 6代。所分离得到的EG细胞具有典型的EG细胞形态 ,AP及PAS染色呈阳性 ,核型正常 ,同时观察到这些细胞在体外进行自发性分化 ,可形成类胚体、成纤维样细胞及神经样细胞 相似文献
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培养条件对牛体外受精胚胎核仁及线粒体发育的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
牛体外受精胚胎分别在SOF FCS、SOF BSA和SOF PVA三种培养系统内进行培养,然后分别取三个系统中发育到原核期、2细胞、4细胞、8细胞、桑椹胚和囊胚阶段的胚胎进行透射电镜的观察,了解培养系统中血清和BSA的添加与否对胚胎发育过程中核仁和线粒体发育的影响。观察结果表明:与已报道的体内受精胚胎研究结果相比,体外受精胚胎核仁的发育比较迟缓,培养系统中血清及BSA的添加与否不会显著影响核仁的发育过程。在SOF FCS和SOF BSA培养系统中线粒体的发育明显滞后,表明培养系统中血清和BSA的添加可能是造成这种现象的重要原因。 相似文献
5.
核移植技术克隆动物胚胎研究的现状及展望 总被引:2,自引:0,他引:2
胚胎克隆,即建立胚胎的无性繁殖系,最有效的方法是通过用核移植技术将一枚多细胞胚胎的每一细胞核移植到一个去核的、激活的成熟卵母细胞中,重新构成新的胚胎,重组胚胎移植后,发育成与供体胚胎基因型相同的后代。Spemann 最先提出将多细胞胚的每一细胞核分别转移到去核的卵母细胞中这一想法。Brig-gs 和 King 沿用 Spemann 的想法及实验技术, 相似文献
6.
影响牛胚胎干细胞分离克隆因素的研究 总被引:24,自引:0,他引:24
采用与同源胎儿成纤维细胞共同培养及传统饲养层培养方式,以高糖DMEM,添加0.1mM2-巯基乙醇,犊牛血清,细胞因子为培养基,以4-13周龄屠宰牛胎儿为实验材料,探讨影响牛原始生殖细胞分离克隆胚胎干细胞的相关因素,结果发现:当犊牛血清为15%时效果最好;细胞因子添加与否对胚胎干细胞的分离及同源牛胎儿成纤维细胞的贴壁与生长影响并不显著,而在传代过程中中有一定影响;以0.2%胰酶 0.04?TA为细胞消化液效果最佳;以同源胎儿成纤维细胞共培养的方式分离克隆牛胚胎干细胞,本研究观察到效果最好。 相似文献
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对关中奶山羊配种后6~7天的桑椹胚和囊胚,分别采用全胚培养法、酶消化法和免疫外科法进行处理.将处理后的胚胎培养于小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)饲养层上,分离培养山羊胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC).对分离传代的山羊ESCs分别进行免疫组化染色,RT-PCR检测和体外诱导分化试验.结果表明.全胚培养法易于胚胎贴壁形成原代集落,采用全胚培养法获得的ESCs有一株目前已传至18代.山羊ESCs Nanong、Oct4、SSEA-3免疫组化染色呈阳性,SSEA-1免疫组化染色呈弱阳性,SSEA-4免疫组化染色呈阴性,RT-PCR检测显示其表达Nanog、Oct4、端粒酶、CD117.山羊ESCs经DMSO体外诱导可以向心肌细胞分化.这些试验均表明该细胞具有ESCs的生物学特性. 相似文献
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目的 在SOF +PVA(合成输卵管液 +聚乙烯醇 )这一化学成分明确培养系统条件下 ,观察了葡萄糖、丙酮酸和乳酸三种碳水化合物对牛体外受精胚胎体外发育的影响 ,以便为今后进一步探讨影响牛早期胚胎体外发育的因素提供实验依据。方法 牛卵母细胞体外成熟和体外受精后 ,在化学成分明确培养系统内进行体外发育培养。结果 实验 1将牛体外受精卵培养于不含有葡萄糖的SOF +PVA培养系统中 ,培养 12 0h后分别移入含有 0、1 5 0、3 30、5 0 0mmol L的SOF +PVA培养系统中 ,对照组胚胎一直在含有 1 5 0mmol L葡萄糖的SOF +PVA中培养 ,结果囊胚的发育率分别为 9 2 % a、12 1%、19 2 % b、18 9%和 11 7% (a