家蚕卵半胱氨酸蛋白酶纯化及抗血清制备

据报道,家蚕卵中存在半胱氨酸蛋白酶(Cysteine proteinase,CP),其性质与哺乳类溶酶体半胱氨酸蛋白酶类的组织蛋白酶L相似,最佳作用pH为3.5,体外最适作用底物为牛血红蛋白,体内最适作用底物为卵黄磷蛋白。经SDS—PAGE分析,分子量47KD。其主要作用是在胚胎发育过程中降解卵黄蛋白质,供胚胎发育之需要。 在成熟卵中具很高含量的半胱氨酸蛋白酶,在胚胎发育开始前,并不发生卵黄蛋白质的水解,其作用机制尚待阐明。为了进一步研究半胱氨酸蛋白酶的组织分布、合成位点、及cDNA克隆等,作者从家蚕卵中纯化了半胱氨酸蛋白酶,并制备了抗血清。     

家蚕胚胎发育时期的蛋白质变化及构造分析

采用蛋白质双向电泳技术及蛋白质氨基酸序分析技术,从蛋白质水平研究了家蚕胚胎发育时期的基因表达情况。结果表明,从家蚕临界期胚胎直到点青期胚胎的较长一段时间内,蛋白质的双向电泳图变化不大,匹配蛋白质斑点率达６３．０％,卵特异性蛋白质,３０Ｋ蛋白质的含量很大。     

蜕皮激素对家蚕卵黄原蛋白基因表达的调控

蜕皮激素（20-hydroxy ecdysone,20E）是由前胸腺分泌的能调节节肢动物昆虫纲、甲壳纲等动物蜕皮的激素. 家蚕属于完全变态昆虫,一生经历卵、幼虫、蛹、成虫四个发育时期. 20E在家蚕发育过程中有不可替代的作用. 本研究通过酶联免疫吸附反应（ELISA）测定家蚕变态期前后血淋巴中20E滴度,发现在卵黄原蛋白基因 (Bombyx mori vitellogenin, BmVg) 高量表达前的雌雄血淋巴中20E含量没有明显差异,但含量变化趋势与BmVg表达趋势相一致. 用20E注射上蔟后60 h的家蚕和添食5龄家蚕, 能诱导雌性和雄性脂肪体中BmVg表达和蛋白合成. 调查处理后的家蚕所产卵中的卵黄磷蛋白（BmVn）含量及重量,发现蚕卵中BmVn含量及蚕卵重量都明显增加|本研究还通过脂肪体体外培养,证明了20E是直接作用于脂肪体来诱导BmVg的表达. 本研究结果表明,20E是通过诱导脂肪体中BmVg的转录来增加蚕卵中BmVn积累,从而最终使得蚕卵重量也相应增加.     

从形态学不同到基因水平差异: 家蚕与果蝇早期胚胎发育比较

昆虫的分化多样性一直是研究的一个热点, 对家蚕胚胎发育调控机制的研究将有助于加深人们对其他昆虫早期胚胎发育机制的了解。文章综述了鳞翅目昆虫家蚕和双翅目昆虫果蝇的早期胚胎发育在形态学及基因水平的研究结果。通过比较, 发现二者的早期胚胎发育存在较大差异。这一结果不但可以为家蚕胚胎发育调控机制的分子水平研究提供重要参考, 也可为昆虫分化多样性的分子机制研究提供线索。     

乌龟胚胎发育过程中钙,镁代谢的研究

本文对乌龟胚胎发育过程中钙,镁代谢特征进行了研究。结果表明：卵壳为乌龟胚胎发育提供５４．０７％的钙,１２．２６％的镁：其余的４５．９３％钙,８７．７４％的镁由 卵内容物（卵黄＋卵清）提供。     

家蚕胚胎发育过程的组织形态显微观察

胚胎发育是动物许多重要器官与性状发育的重要时期。本文利用石蜡切片法,对家蚕的胚胎发育进行了观察,并在显微镜可见光明场下拍照记录胚胎发育的形态特殊时期及其经历的发育时间,直观地获得家蚕胚胎发育完整过程。实验完整记录了家蚕胚胎发育的5个胚胎发育时期及其相对应:卵裂与胚盘形成期、胚带形成期、器官形成期和完成期及其相对应的发育时间。为进一步研究家蚕个体发育,器官的形成与分化奠定基础。     

半滑舌鳎胚胎发育中后期卵黄囊超微结构观察

在胚胎发育中期,半滑舌鳎胚胎由胚体、卵黄囊和卵周液构成.对半滑舌鳎胚胎发育中后期的卵黄囊进行超微结构观察.结果表明,卵黄囊是由卵黄囊膜和包裹其内的卵黄物质组成.在半滑舌鳎胚胎发育过程中,卵黄囊内的卵黄物质逐渐消耗产生低分子量的卵黄磷蛋白分裂小泡.分裂小泡转移到卵黄囊内部消黄细胞中,在消黄细胞的作用下分裂小泡转化成卵黄颗粒.随后卵黄颗粒在卵黄囊内表面聚集成囊状结构并转移运输到卵黄囊膜内部,最后把卵黄物质从卵黄囊膜转移并释放到卵周液中,为胚胎发育提供营养.     

家蚕催青前期胚胎蛋白质双向电泳图谱分析

为了探讨家蚕Bombyx mori胚胎蛋白质整体变化,以多化性品种P50为材料,采用蛋白质双向电泳技术及图像分析技术分析了催青前期胚胎（戊₃以前）各个时期蛋白质图谱及其变化情况。研究发现:从临界Ⅱ期（丙_２）胚胎到缩短期(戊₂)胚胎蛋白质双向电泳图谱基本稳定,存在于临界Ⅱ期胚胎的蛋白斑点在催青前期的4个胚胎中消失的个数较少,仅占22.80％,而在催青的最后2个胚胎中消失的蛋白质斑点却占48.18％;在神经沟出现（丁₁）、腹肢突起（丁₂）、上唇突起（戊₁）和缩短期（戊₂）胚胎的双向电泳图谱中能够检测到100个特异蛋白质斑点,这些特异蛋白质斑点大多在随后邻近的胚胎发育中消失,暗示了这些特异蛋白可能与相应胚胎的形体特征发育有关。     

中华绒螯蟹胚胎发育过程中主要生化成分的变化

中华绒螯蟹胚胎发育过程中三种主要生化成分中以蛋白质含量最高（44．56％－67．76％）,脂类次之（21．32％－34．07％）,碳水化合物含量最低（0．47％－3．03％）。从胚胎发育开始至结束,蛋白质降低了23．20％,脂类和碳水化合物均没有明显变化。结果表明,蛋白质是中华绒螯蟹胚胎发育过程中的主要能源物质。     

家蚕催青后期胚胎蛋白质双向电泳图谱分析

采用蛋白质双向电泳技术分析了家蚕Bombyx mori催青后期胚胎蛋白质图谱的变化。研究发现: 在头胸分化期（戊₃）、反转期（己₁）、毛瘤发生期（己₂）、点青期（己₃）、转青期（己₄）和孵化期（己₅）胚胎蛋白质的双向电泳图谱中共检测到209个特异蛋白斑点,其中己₃和己₄两个胚胎出现的特异蛋白斑点数在整个催青期胚胎中为最多,分别达55和77个。与催青前期胚胎出现的特异蛋白斑点变化规律相似,这些特异蛋白斑点大多也是在随后邻近的胚胎发育中消失。推测这些特异蛋白可能与相应胚胎的形体特征发育有关。     

家蚕Hox基因研究进展

Hox基因（homeobox genes）在昆虫躯体模式（body plan）的发育调控机制中扮演着重要角色,其表达具有严格的组织特异性和胚胎发育的程序性。家蚕Bombyx mori作为鳞翅目昆虫的代表,其Hox基因也陆续得到鉴定。在家蚕中存在一个拟复等位基因群--E群基因,其突变表型均与过剩斑纹和过剩附肢有关,这可能与Hox基因有着密切联系。家蚕全基因组测序完成后,发现其Hox基因簇中存在12个特有的homeobox基因（Bmshx1~Bmshx12）, 说明家蚕Hox基因可能具有独特的生物学意义。我们还利用家蚕基因芯片数据分析了Bmlab与Bmpb基因的组织表达特征。通过对家蚕Hox基因的研究,探索家蚕躯体模式建立机制,可望为解析其他鳞翅目昆虫的躯体模式的建立机制提供理论依据。本文就家蚕Hox基因的表达、功能及其与E群突变的关系等方面进行了综述。     

几种生态因子对拟目乌贼胚胎发育的影响

摘 要：本实验旨在研究盐度、光照周期、孵化密度、溶解氧对拟目乌贼（Sepia lycidas）胚胎发育的影响,以确定其胚胎发育最佳生态条件。在室内控制条件下,采用单因子试验研究了不同盐度（18、21、24、27、30、33、36）,光照周期L:D（0 h:24 h、6 h:18 h、12 h:12 h）,孵化密度(3、6、9、12、15 ind/L)等对其胚胎孵化率、培育周期、孵化周期、卵黄囊完全吸收率和初孵幼体大小的影响。结果表明：不同盐度对胚胎发育影响显著（P＜0.05）,适宜盐度为27～33,最适盐度为30,最适盐度下孵化率达（93.33?2.89）%、培育周期为（25.67?0.58）d、孵化周期为（5.33?0.58）d、卵黄囊完全吸收率达（89.27?0.33）%、初孵幼体体重达（0.247?0.006）g;光照周期对孵化周期影响不显著（P>0.05）,对其它指标影响显著（P＜0.05）,适宜光照周期为L:D（6 h:18 h）,最适光照周期下孵化率达（80.33?2.89）%,培育周期为 (35.67?0.57) d、孵化周期为（4.67?0.57）d、卵黄囊完全吸收率达（82.18?7.72）%、初孵幼体体重达（0.243?0.012）g;在各孵化密度下充气与否,对胚胎发育有显著影响（P＜0.01）,水中含氧量≤5.55 mg/L时,胚胎发育受阻。在充气情况下不同孵化密度对胚胎发育影响显著（P＜0.05）,适宜孵化密度3～9 ind/L,最适宜孵化密度6 ind/L,最适孵化密度下孵化率达（96.67?2.89）%、培育周期为（29.67?0.58）d、孵化周期为（5.67?1.15）d、卵黄囊完全吸收率达（89.65?0.31）%、初孵幼体体重达（0.244?0.005）g。由此确定,其适宜的孵化盐度为27～33,光照周期为L:D（6 h:18 h）,孵化密度为3～9 ind/L。由此确定,其适宜的孵化盐度为27～33,光照周期为L:D（6 h:18 h）,孵化密度为3～9 ind/L。     

天蚕卵黄原蛋白cDNA的克隆及序列分析

天蚕卵黄原蛋白cDNA的全碱基序列由5 720个碱基构成,一个开读框有5 334个碱基序列,编码了包括由15个氨基酸组成的信号肽在内的共1 778个氨基酸的蛋白质前体。天蚕和柞蚕卵黄原蛋白的同源性非常高,氨基酸序列达到92.6%,碱基序列达到94%。天蚕、柞蚕和家蚕的卵黄原蛋白的糖链附加位点(N-linkedg-lycosylationsite):柞蚕有4个,家蚕有5个,天蚕和家蚕相同保存着5个。在N-末端区域,天蚕和家蚕有多聚丝氨酸区域和可被胰蛋白酶识别的RSRR部位;柞蚕虽然也具有多聚丝氨酸区域,但没有可被胰蛋白酶识别的RSRR部位。在C-末端区域里,大多数昆虫从G ICG功能部位至C-末端结尾具有7个~10个半胱氨酸(Cys)。鳞翅目的4种昆虫柞蚕、天蚕、家蚕和舞毒蛾(A.pernyi,A.yam am ai,B.m ori,L.dispar)都是7个半胱氨酸。     

应用离子注入技术对家蚕形态学及遗传学进行的初步研究(英文)

离子注入技术是将某种元素的原子进行电离,并使其在电场中加速,在获得较高的速度后射入固体材料表面。在离子注入过程中,被电离的离子在电场作用下加速运动,离子靠着本身获得的动能进入基体表面,在表层中运动的离子与基体原子作用损失能量后在一定的位置停留下来。该技术自６０年代问世以来,主要用于材料改性等方面。８０年代中期,我国学者开始将其用于农作物育种方面的研究,大大拓宽了离子注入技术的应用领域。所用实验材料的基因及表现型见Ｔａｂ３,我们将氢离子（Ｅ＝３５ＭｅＶ）注入处于胚胎发育后期的家蚕卵内（Ｔａｂ１）,观察其对家蚕形态及遗传方面的影响,结果表明：（１）在家蚕胚胎发育的已４期注入氢离子,其半致死剂量ＬＤ５０为１ｘ１０１０～１ｘ１０１１ｃｍ２这一区间之内;当剂量达到１ｘ１０１２ｃｍ２时,已全部致死（Ｆｉｇ．１＆Ｔａｂ．２）;（２）注入氢离子能够使家蚕在第１腹节上产生褐斑（Ｆｉｇ．２）的频率增高。并首次观察到因注入氢离子而导致家蚕出现非成对的褐斑（Ｆｉｇ．３＆Ｔａｂ．４）。（３）在氢离子注入剂量为１ｘ１０１０ｃｍ２时,能够诱变产生大量的嵌合体家蚕,并且诱变频率高达３８．５％（Ｆｉｇ．４＆Ｔａｂ．５）,这样高的     

家蚕生殖细胞相关基因nanos的克隆表达及在胚胎发育中的表达模式

【目的】探讨nanos基因在家蚕Bombyx mori胚胎发育中的表达模式,为进一步研究该基因在家蚕胚胎发育中的功能奠定基础。【方法】根据本实验室提交到GenBank中家蚕nanos的cDNA序列(登录号EF647589)设计引物,扩增出了一条长684 bp的编码片段,对该片段进行了克隆和表达,亲和纯化表达的蛋白并免疫新西兰大白兔制备抗体。Western blot检测家蚕早期胚胎nanos的表达情况,荧光定量PCR检测nanos在整个家蚕胚胎发育中的表达情况。【结果】克隆并表达了一条长684 bp的编码片段,得到了分子量约33 kD的融合蛋白。用制备的抗血清对家蚕早期胚胎蛋白的Western blot检测表明,nanos在此阶段基本是恒定表达。荧光定量PCR结果显示刚产的卵中nanos的表达量最大,第2天开始急剧下降,此后到第10天表达量几乎没有变化。【结论】本实验克隆的nanos是家蚕中的一个同源物,该基因在家蚕胚胎发育中的表达模式与蜜蜂等有很大的不同,反映了昆虫生殖细胞形成机制的多样性。     

家蚕细胞周期蛋白基因BmCcnl1的克隆及表达分析

家蚕Bombyx mori由受精卵到完成胚胎发育孵化的过程中, 细胞进行大量的分裂和分化, 然而滞育性卵的胚胎细胞分化至G2期便停滞在此阶段。为了探索这一发育阶段细胞内的分子调控, 本研究以人Homo sapiens的细胞周期蛋白基因cyclin L1为模板, 成功克隆了家蚕同源基因BmCcnl1（GenBank登录号: FJ889988）。BmCcnl1基因开放阅读框（open reading frame, ORF）全长1 254 bp, 编码417个氨基酸。利用Protean软件分析得出BmCcnl1蛋白预测分子量为49 kDa, 等电点为9.84。利用DNA重组技术构建了BmCcnl1基因的重组表达载体pET-21d-BmCcnl1, 对其进行原核表达, 其表达的蛋白以包涵体形式存在。利用RT-PCR技术分析了BmCcnl1基因在胚胎发育过程中的转录水平, BmCcnl1基因在非滞育性卵的胚胎发育阶段基本保持相对稳定的转录表达, 而滞育性卵从蛾体产下经过72 h后已经检测不到BmCcnl1基因的转录。结果提示, BmCcnl1基因与胚胎期滞育及非滞育性卵的发育调控相关。对该基因的克隆和表达分析为今后研究家蚕胚胎发育及细胞周期调控奠定了基础。     

家蚕神经肽基因的筛查及成熟肽的预测

神经肽（neuropeptide）是家蚕Bombyx mori体内重要的调控物质。为了充分理解神经肽对家蚕发育的调控, 扩充家蚕神经肽的数量, 本研究利用BLAST的tblastn程序结合OpenOffice软件的查找程序, 基于其他昆虫和无脊椎动物神经肽的同源性和保守的结构特点, 在家蚕基因、理论蛋白质数据库及NCBI中进行全面而系统的基因筛查; 并利用各种在线工具对所筛查到基因和理论蛋白质的结构和成熟肽进行预测分析。结果共获得allatostatin-A （AST-A）, allatostatin-B （AST-B）, allatostatin-C （AST-C）, allatropin (AT), ecdysis-triggering hormone （ETH）, crustacean cardioactive peptide (CCAP)和FMRFamide等31个神经肽基因家族, 包括37个神经肽基因亚家族, 共计44个神经肽基因; 预测出193个成熟的神经肽, 其中73个根据家族同源性预测在C末端发生酰胺化, 而6个被预测在N末端发生了环化, 9个被预测酪氨酸发生了硫酸化。大部分成熟神经肽都具有明显的家族结构特征, 但proctolin, CCAP及CAPA-PK成熟肽结构上与其他昆虫相比有所扩展。结果提示, 家蚕神经和内分泌细胞产生了几乎在所有昆虫中具有的神经肽前体; 进化过程中大部分成熟神经肽的氨基酸序列在种间产生了差异, 但家族特征性基序高度保守。本研究为神经肽功能研究以及神经肽对家蚕发育尤其是蛹期发育调控的研究奠定了基础。     

动物胚胎发育讲座（七）—鸟胚的早期发生

动物胚胎发育讲座（七）──鸟胚的早期发生张天荫（山东大学生物学系济南２５０１００）爬行类以上的动物其胚胎发生期间要形成一种特殊的临时器官，它称为胎膜，包括羊膜、卵黄囊膜、绒毛膜和尿囊。所以根据有无羊膜，可将脊椎动物分为无羊膜类（圆口、鱼和两栖）和有羊...     

多肽生长因子与哺乳动物早期胚胎发育

多肽生长因子与哺乳动物早期胚胎发育周琪,谭景和（东北农业大学畜牧系,哈尔滨）多肽生长因子或称生长因子（ｗｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒＧＦ）是一类具有生物活性的蛋白质的总称。它们对维持动物正常生理状态有重要的作用,如参与胚胎发育的调节,成体成长的控制,组织分...     

双向电泳法在家蚕蛋白质分离中的应用

家蚕Bombyxmori(L.)既是重要的经济昆虫,又是鳞翅目昆虫研究的典型模式生物。开展家蚕蛋白质组研究,将有助于阐明家蚕绢丝蛋白的分泌机理,也是研究鳞翅目昆虫及其他生物生命本质的需要。双向电泳是蛋白质分离的关键技术。为探讨适宜家蚕蛋白质组研究的双向电泳条件,以家蚕丝腺、丝腺内容物、蚕卵和血液为材料,在不同条件下进行双向电泳,并对分离的蛋白点进行质谱分析。结果表明:通过改进的蛋白质裂解液辅以超声破碎制备的蛋白质,双向电泳后能够得到较好的2-DE图,也能满足进行MALDI-TOFMS分析的需要。因此本研究方法适用于家蚕不同组织中蛋白质的提取和双向电泳。