L—精氨酸酸性琥珀酸盐

<正> 一、前言遵循上级医药工业公司新产品以治疗肺瘤、心血管病、老慢支和肝炎为主攻方向的指示。我们着手试制治疗肝炎的L—精氨酸酸性琥珀酸盐。化学文摘69:5207介绍,法国药物专利4932(Fr·M4932)有L—精氨酸酸性琥珀酸一结晶水盐     

钝齿棒杆菌精氨酸琥珀酸酶编码基因argH的克隆表达及其重组菌发酵产精氨酸研究

钝齿棒杆菌（Corynebacterium crenatum）SYPA是本实验室筛选获得的一株高产精氨酸生产菌株。精氨酸琥珀酸酶（AL）是精氨酸合成过程中的最后一个酶,催化底物精氨酸琥珀酸生成产物精氨酸。为进一步提高精氨酸产量,本文以钝齿棒杆菌基因组为模板,扩增得到其编码基因argH,全长为1434 bp,编码476个氨基酸,理论蛋白分子量大小为50.8 kDa,其与C. glutamicum ATCC 13032比对其同源性为99.4%,相差10 bp,3个氨基酸。将其在E.coli BL21(DE3)及C. crenatum SYPA中成功表达。利用载体pET-28a上的6×His?Tag选用Ni柱亲和层析纯化AL,纯化后获得的重组蛋白的比酶活达156.9mU/mg蛋白,总回收率为72.3%,对该酶的部分酶学性质进行了初步研究,并发现产物精氨酸对其具有反馈抑制作用。成功构建钝齿棒杆菌重组穿梭表达质粒pJC1-tac-argH并将其通过电击转化法转入C.crenatum SYPA中,加强其代谢途径中AL蛋白表达量,并对其发酵产精氨酸做了初步分析。结果表明与出发菌株相比,转化子在精氨酸琥珀酸酶酶活增强了66.8%的基础上精氨酸产量达40.9 g/L,比出发菌株产量的35.8 g/L提高了约14.2%。     

会议简讯

“从生产胱氨酸后的猪毛水解液中制备 L—精氨酸及 L—精氨酸盐酸盐注射液”鉴定会议在武汉举行。由湖北省科委委托湖北省外贸局和武汉大学主持召开的“从生产胱氨酸后的猪毛水解液中制备 L—精氨酸及精氨酸盐酸盐注射液”的鉴定会,于一九七九年六月十五日——十六日在武汉大学举行。参加会议的有外贸公司、湖北省、武汉市药政部门及来自十省、市十九个科研、应用、生产单位的44名代表。     

产琥珀酸工程菌株的发酵工艺条件优化

对实验室构建的产琥珀酸大肠杆菌工程菌株(E.coliQZ1111)进行发酵工艺条件研究。以AM1低盐培养基为基础,研究不同C、N源及其质量浓度,培养基初始pH和发酵温度等因素对琥珀酸的影响,并在5L发酵罐中进行了补料-分批发酵实验。优化后的发酵条件为葡萄糖20g/L,玉米浆10g/L,pH6.4,发酵温度37℃。在5L发酵罐中培养,琥珀酸产量达到47.9g/L。     

精氨酸在代谢中的作用

精氨酸(arginine)是碱性氨基酸,按化学结构,它的名称应是α-氨基-δ-胍基戊酸。这种氨基酸是人体蛋白质的正常组成成份,参与一些与氮转移、贮存和排泄有关的代谢反应,并有调节激素释放的作用。本文主要介绍精氨酸在代谢中的作用和人体对它的需要。精氨酸的生物合成一、精氨酸合成途径精氨酸以鸟氨酸、NH_3、CO_2和门冬氨酸为原料合成。合成过程中需要ATP供给能量,由氨基甲酰磷酸含成酶Ⅰ(CPSI),鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OTC),精氨酸代琥珀酸合成酶(A-SS)和精氨酸代琥珀酸裂解酶(AS-Lase)催化,这四种酶主要分布在肝脏中,其活性因摄取氮的多少而增减。     

利用嗜盐菌Salinivibrio YS生产2,3-丁二醇和琥珀酸

以从新疆艾丁湖采集的土样中分离出的中度嗜盐菌Salinivibrio YS为研究对象,利用该菌在厌氧条件下生产2,3-丁二醇和琥珀酸,在单因素摇瓶实验基础上,确定影响产物积累的各因素及其相应条件,再利用正交试验确定这些参数的最佳水平,即温度33℃,起始pH为8.0,发酵过程pH为7.0,乙酸添加量为3 g/L,NaCl浓度为l0 g/L.利用优化条件进行3L体系的发酵放大实验,经过108 h的无氧发酵,2,3-丁二醇的产量可达35.05 g/L,而琥珀酸的含量则高达22.46 g/L,且其糖的总转化率高达约50％.首次利用嗜盐菌在厌氧条件下生产2,3-丁二醇和琥珀酸,拓展了嗜盐菌的应用,同时也为生产2,3-丁二醇和琥珀酸提供了新的思路.     

会议简讯

<正> “从生产胱氨酸后的猪毛水解液中制备 L—精氨酸及 L—精氨酸盐酸盐注射液”鉴定会议在武汉举行。由湖北省科委委托湖北省外贸局和武汉大学主持召开的“从生产胱氨酸后的猪毛水解液中制备 L—精氨酸及精氨酸盐酸盐注射液”的鉴定会,于一九七九年六月十五日——十六日在武汉大学举行。参加会议的有外贸公司、湖北省、武汉市药政部门及来自十省、市十九个科研、应用、生产单位的44名代表。     

精氨酸代谢途径抗酸关键基因对乳酸乳球菌Lactococcus lactis NZ9000胁迫抗性的影响

【目的】寻找精氨酸代谢途径中与酸胁迫相关的关键作用因素。【方法】通过在Lactococcus lactis NZ9000中分别过量表达来源于Lactobacillus casei Zhang的精氨酰琥珀酸合成酶(ASS)和精氨酰琥珀酸裂解酶(ASL)改变精氨酸代谢提高酸胁迫抗性。【结果】与对照菌株对比,重组菌株在环境胁迫下表现了较高的生长性能、存活率和发酵性能。生理学分析发现,酸胁迫环境下,重组菌株细胞有较高的胞内NH4+、ATP含量和H+-ATPase活性,并显著提高了精氨酸脱亚胺酶(ADI)途径中的氨基酸浓度。进一步的转录分析发现,天冬氨酸合成、精氨酸代谢相关的基因转录水平上调。【结论】在L.lactis NZ9000中过量表达ASS或ASL可以引发精氨酸代谢流量的上调,进而提高了细胞的多种胁迫抗性。精氨酸合成途径广泛存在于多种微生物中,为微生物,尤其是工业微生物提高胁迫抗性提供了新思路。     

肾动脉内注射L-精氨酸抑制肾神经传入纤维的自发活动

研究旨在应用记录肾传人神经多单位和单位放电的方法,观察肾动脉内注射L—精氨酸对麻醉家兔肾神经传人纤维自发放电活动的影响。结果表明：(1）肾动脉内注射L—精氨酸(0．05、0．24和0．48mmol/kg)可呈剂量依赖性地抑制肾传人纤维的活动,而动脉血压不变;(2)静脉内预先注射一氧化氮合酶抑制剂L—NAME(0．11mmol/kg),可完全阻断L—精氨酸对肾传人纤维的抑制;(3)肾动脉注射一氧化氮(N0)供体SIN—1(3．75μmol/kg)也可抑制肾传入神经的活动。以上结果提示：肾动脉内应用N0前体L—精氨酸和N0供体SIN—1均可抑制肾传入纤维的自发活动。     

从鸡毛中分离 L—脯氨酸

羽毛中含有较多的L-脯氨酸。干鸡毛水解后用离子交换树脂层析分离可得到纯L—脯氨酸,产率5.6%左右。同时可以分离得到L—丙氨酸、L—丝氨酸和L—精氨酸。     

日本氨基酸市场价格

<正> 最近,许多单位向我司查询国外各种氨基酸市场价格,现根据日本万邦贸易株式会社向我司提供的资料,整理了部分氨基酸市场售价,仅供参考。(汇率按79年8月9日中国人民银行牌价,1元人民币=110.45幅日元)品名日元/公斤人民币/公斤L—Arginine L—精氨酸 7,000 63,37L—Arginine HCl L—精氨酸盐酸盐 6,000 54,32L—Cysteine L—半胱氨酸 5,000 45,26L—Cysteine HCl L—半胱氨酸盐酸盐 4,000 36,21L—Cystine L—胱氨酸 4,000 36,21Glycine 甘氨酸 1,000 9,05     

N~ω-硝基——L-精氨酸的合成

<正> N~ω-硝基—L-精氨酸是一种生化试剂,在国外已收入美国Sigma公司《试剂手册》中,在国內它是以苯甲酰甘氨酰—L—硝基精氨酸二肽产品收入于上海生化所东风试剂厂编的《生化试剂和生化药物》目录中。 1981年我室合成了N~Ф-硝基—L-精氨酸,并发现它具有抗肿瘤作用。经动物筛选     

结合缺陷型菌株显色法采用离子束诱变筛选高产L-精氨酸突变株

为快速高效筛选L-精氨酸高产突变株,建立一种缺陷菌株平板显色法并采用低能N+离子束对L-精氨酸生产用菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5进行诱变处理,通过上述平板显色法筛选获得高产突变株.对突变株进行摇瓶发酵实验,最终选育出一株L-精氨酸产量较高且产酸性能比较稳定的突变菌株钝齿棒杆菌SYPA5-5-36.该菌株摇瓶发酵L-精氨酸产量可达35.85 g/L,比出发菌株提高了19.5％.因此,缺陷型菌株平板显色法可以用于快速、高效筛选高产L-精氨酸突变株.     

一株耐受低pH、高浓度乳酸及琥珀酸菌株的筛选与鉴定

【目的】通过构建的人工耐酸系统,筛选耐受低pH值、乳酸及琥珀酸的菌株。【方法】构建人工耐酸系统长期驯化菌株,利用不同p H的酸性平板进行筛选,从环境中筛选出一株对低p H值、高浓度乳酸以及琥珀酸有很好耐受性的菌株。通过形态学特征、生理生化特征研究,并结合18S rDNA基因序列分析及分子系统发育树的构建结果,确定菌株的种类。【结果】经过酸性人工系统的长期驯化,筛选分离出一株耐受低pH值、高浓度乳酸以及琥珀酸的菌株WJ-2,经鉴定该菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),其最适生长温度为30°C。酸性平板实验显示该菌株能够耐受pH2.5的酸性环境,同时对9%的乳酸及8%的琥珀酸也有很好的耐受性。另外,耐酸菌株WJ-2在pH 2.5、9%乳酸和8%琥珀酸的培养环境中仍能保持相对中性的细胞内pH值。【结论】通过构建人工酸性系统,成功筛选出一株对低pH值、高浓度乳酸以及琥珀酸具有耐受性的菌株——酿酒酵母菌WJ-2,该方法可为筛选具有特定耐受能力菌株提供一个新思路。     

精氨酸琥珀酸合酶的研究进展

精氨酸琥珀酸合酶(Ass1)是生成精氨酸的限速酶。精氨酸又可通过多种代谢途径生成尿素和NO。因此,Ass1又是生成尿素和NO的关键酶。根据精氨酸的代谢途径不同,Ass1在组织中定位和表达水平也不同。Ass1及其催化产生的多种代谢物可调节机体的生理和病理活动。本文根据Ass1在不同组织中定位、表达调节及生理和病理功能等方面的研究进展作一简要介绍。     

利用PCR-RFLP检测中国荷斯坦牛遗传缺陷——瓜氨酸血症

瓜氨酸血症(Citrullinemia)是荷斯坦牛尿素循环发生代谢紊乱的一种常染色体隐性遗传缺陷。精氨酸琥珀酸合成酶基因外显子5发生突变(C-T)对这一紊乱负责。本研究应用PCR-RFLP方法和DNA测序技术检测济南市周边120头荷斯坦母牛和山东奥克斯生物技术有限公司种公牛站50头荷斯坦公牛的精氨酸琥珀酸合成酶基因外显子5。结果发现,所检测的公牛未发现瓜氨酸血症突变基因携带者,母牛中有2头为携带者,携带频率为1.18%。     

钝齿棒杆菌的代谢改造：L-鸟氨酸与L-瓜氨酸合成菌株的构建

【目的】对一株产L-精氨酸的钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5进行代谢工程改造,构建L-鸟氨酸和L-瓜氨酸合成菌株,并考察其发酵生产相应氨基酸的性能。【方法】分别敲除菌株SYPA5-5鸟氨酸氨甲酰转移酶(Ornithine carbamoyltransferase,OTC)的编码基因argF和精胺琥珀酸合成酶(Argininosuccinate synthase,ASS)的编码基因argG,构建能够合成L-鸟氨酸及L-瓜氨酸的重组菌株SYPA5-5△argF和SYPA5-5△argG;考察不同营养条件对上述重组菌株生长和相应氨基酸积累的影响。【结果】添加0.3 g/L L-精氨酸可满足SYPA5-5△argF的生长及L-鸟氨酸积累所需,L-鸟氨酸产量可达21.5 g/L;添加L-精氨酸有利于SYPA5-5△argG的生长,但不利于L-瓜氨酸的积累;不添加L-精氨酸时,L-瓜氨酸产量可达15.2 g/L,同时积累6.8 g/L的L-谷氨酸。【结论】分别敲除L-精氨酸生产菌株SYPA5-5的argF及argG基因,可实现L-精氨酸合成途径的中间代谢物L-瓜氨酸和L-鸟氨酸的积累,拓展了该菌株的工业应用范围。     

好氧发酵生产琥珀酸工程菌株的构建

通过分析大肠杆菌的碳源代谢途径, 利用基因敲除手段, 以Escherichia coli MG1655为出发菌株, 成功构建了琥珀酸好氧发酵生产工程菌E. coli QZ1111 (MG1655?ptsG?poxB?pta?iclR?sdhA)。检测结果表明该菌株能以葡萄糖为碳源, 在好氧发酵且不表达任何异源基因的条件下大量积累琥珀酸。摇瓶试验证明, 琥珀酸发酵产量达到26.4 g/L, 乙酸盐作为唯一检测到的副产物产量为2.3 g/L。二者浓度比达到11.5:1。     

应用阳离子交换树脂从棉籽饼粕水解液中分离、制备L—精氨酸盐酸盐

<正> 一概述L—精氨酸是棉籽饼粕蛋白中含量较为丰富的氨基酸之一。为了提高棉籽饼粕的利用价值,开辟精氨酸生产的原料来源,我们已于一九七五年从饼粕的水解液中,用苯甲醛缩合法分离、制备出 L—精氨酸盐酸盐。但是,这个分离方法有不少缺点。例如:缩合剂苯甲醛价格高、毒性大,缩合条件不易掌握,得率不够稳定等。为使这项研究工作便于在生产中推广、应用,我们遵照毛主席关于\"我们必须打破常规,尽量采用先进按术\"的教导,参照国     

肝炎平对日本血吸虫肝纤维化兔肝脏酶组织化学作用的研究

目的探讨肝炎平对血吸虫肝纤维化家兔酶组织化学的作用。方法将38只成年健康大耳白兔分为正常对照组(N)、模型组(M)及肝炎平治疗组(E)。M和E组采用腹贴法(日本血吸虫尾蚴180条/只,持续15分钟)感染血吸虫,六周后服用吡喹酮行杀虫治疗。此后,E组予以肝炎平治疗。于实验的第13周将全部动物麻醉后剖腹取肝组织。酶组织化学方法检测单胺氧化酶(MAO)、一氧化氮合酶(NOS)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)在肝组织的表达活性。结果肝炎平组中MAO为0.1966±0.04536,NOS为0.1166±0.01895,LDH为0.1355±0.04964,而模型组的MAO为0.5627±0.04849,NOS为0.1422±0.02520,LDH为0.5027±0.07783,与模型组相比,有显著性差异(P<0.05),肝炎平组的SDH吸光度为0.4197±0.10442,而模型组SDH的吸光度为0.2688±0.09435,与模型组相比有显著性差异(P<0.05)。结论肝炎平能减少肝组织中的单胺氧化酶、一氧化氮合酶、乳酸脱氢酶的活性,提高琥珀酸脱氢酶的活性。提示肝炎平具有抗血吸虫肝纤维化的作用。