重要生化反应“转移磷脂酰反应”的研究进展

转移磷脂酰反应是在磷脂酶D的催化作用下,甘油磷脂和含羟基化合物发生碱基交换生成新的磷脂的反应。该反应为磷脂酶D所特有,被广泛的应用于动物、植物和微生物的脂类代谢、脂类信号研究以及重要生化制剂磷脂的合成工艺中。本文综述了转移磷脂酰反应的反应机制、影响因素、生物学作用及应用现状,讨论了深入研究这一反应所有待揭示的问题,并展望了今后的发展方向。     

重要生化反应“转移磷脂酰反应”的研究进展

转移磷脂酰反应是在磷脂酶D的催化作用下,甘油磷脂和含羟基化合物发生碱基交换生成新的磷脂的反应。该反应为磷脂酶D所特有,被广泛的应用于动物、植物和微生物的脂类代谢、脂类信号研究以及重要生化制剂磷脂的合成工艺中。本文综述了转移磷脂酰反应的反应机制、影响因素、生物学作用及应用现状,讨论了深入研究这一反应所有待揭示的问题,并展望了今后的发展方向。     

佛波酯诱导一种新的磷脂酶D酶解产物的生成

在人肺癌表面细胞株A－549中检测到佛波酯诱导的丁醇化鞘脂分子的产生。用[^3H]－丝氨酸标记细胞,其放射性在磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺极性头部的分布很容易被检测到,而在磷脂酸及其直接代谢衍生物中并不存在,提示这种磷脂酶D的酶解产物来源于鞘脂分子的水解,而不同于以甘油磷脂为底物的磷脂酶D的酶解产物。蛋白激酶C的抑制剂或通过佛波酯长时间处理下调细胞内蛋白激酶C水平,可抑制佛波酯诱导的丁酯化鞘脂分子的产生,表明导致这种磷脂酶D的活化需要蛋白激酶C的参与。     

磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C的研究

随着人们对信号转导认识的逐步加深,各种磷脂酶在信号通路中的作用也日渐受到重视,并日趋明了。其中磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）、磷脂酰胆碱特异性磷脂酶Ｄ（ＰＣ－ＰＬＤ）的基因已克隆,对磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Ｃ（ＰＩ－ＰＬＣ）也有较深了解,而对磷脂酰胆碱特异性磷...     

磷脂酶A2的应用

磷脂酶Ａ2 (ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ2 ,ＰＬＡ2 ,ＥＣ 3 .1 .1 .4)即磷脂 2 酰基水解酶 ,是专一催化 3 Ｓｎ 磷酸甘油脂Ｃ 2位酯键的水解反应的酶 ,酶解产物为溶血磷脂和脂肪酸。ＰＬＡ2 不仅在生物体内具有很重要的生理功能 ,而且具有很高的应用价值 ,可广泛地应用在科学研究、磷脂改性、油脂精练、饲料添加剂、医疗等诸多方面。1 .用ＰＬＡ2 研究酶学、脂代谢和生物膜结构与功能ＰＬＡ2 (尤其是外分泌型的ＰＬＡ2 )的分子量较小 ,一般在 1 0～ 2 0ｋＤ之间 ,相对而言 ,结构较为简单。在蛇毒中 ,存在许多ＰＬＡ2 的同工酶 ,它们之…     

PLD 的生化特性及在信号传导中的作用

磷脂酶 D(PLD)是一种分解磷脂的多功能酶,磷脂酶可激活调控许多重要的细胞生理功能,在信号转导、小泡运输、有丝分裂、激素作用的发挥、细胞骨架组装、防御反应以及种子萌发和衰老过程中都起重要作用．主要介绍了磷脂酶基因的生化特性及在植物信号转导中的作用．     

非钙依赖性磷脂酰胆碱特异的磷脂酶C与肝癌γ-GT的关系

非钙依赖性磷脂酰胆碱特异的磷脂酶Ｃ与肝癌γ┐ＧＴ的关系吴兴中卢虹（上海医科大学生物化学教研室,上海２０００３２）关键词磷脂酰胆碱特异的磷脂酶Ｃ;γ－谷氨酰转肽酶;肝细胞肝癌磷脂酶Ｃ在细胞信息传递过程中起重要作用,磷脂酰肌醇特异的磷脂酶Ｃ（ＰＩ－ＰＬＣ...     

植物磷脂酶D基因表达与衰老的关系

磷脂酶D (PLD)是一种重要的磷脂水解酶,在植物细胞中普遍存在。磷脂酶D能激活许多重要的细胞生理功能,包括调控细胞膜的重建、跨膜信号传导及细胞内调控、细胞骨架组装、防御反应以及种子萌发和植物的衰老等。对磷脂酶D的基本特性、磷脂酶D基因特异性表达模式及其活性抑制与植物衰老的关系进行了综述,并探讨和展望了今后植物磷脂酶D基因的研究方向。     

白色念珠菌磷脂酶活性与其毒力因子关系的研究

目的 探讨白色念珠菌磷脂酶活性与其毒力因子之间的关系以及与其遗传特征的相关性.方法 蛋黄平板法检测80株白色念珠菌磷脂酶活性,并测定磷脂酶高活性组、低活性组白色念珠菌的溶血活性、细胞表面疏水性、黏附上皮细胞能力及RAPD-PCR分析2组菌株的基因型特征.结果 磷脂酶阳性检出率为97.5%,2组PZ均值分别为0.639±0.043、0.847±0.079(P<0.05);2组的溶血活性、疏水率差异均无显著性(P>0.05),而磷脂酶高活性组菌株对上皮细胞的黏附力显著高于磷脂酶低活性组(P<0.05),磷脂酶活性与黏附力呈正相关(r=0.773,P<0.01).RAPD结果 表明磷脂酶活性与RAPD各电泳条带之间的回归系数不尽相同.结论 磷脂酶活性不能直接反应菌株其他毒力的情况,且RAPD分型也不能全面地反映磷脂酶这一单一的毒力特征,而是对菌株毒力特征的一个综合反映.     

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的研究进展

羧基端结合有糖基化磷脂酰肌醇（GPI）结构的膜蛋白,称为GPI锚定蛋白;此后不久又鉴定出一种GPI锚定蛋白专一性的磷脂酶D（GPI-PLD）。GPI-PLD能特异性地水解GPI、释放出锚定蛋白并调节锚定蛋白的表达和生物功能等,本文概述了近年来有关GPI-PLD的研究状况,包括它的组织和器官来源,生理功能、病理条件下的活性改变,分子结构以及cDNA克隆等。     

自分泌运动因子-溶血磷脂酸轴的生物学功能与调控

自分泌运动因子(autotaxin,ATX)也称作磷酸二酯酶Iα,是核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶家族(nucleotide pyrophosphatases,NPPs)中的一员,因而也称作NPP2.ATX是NPPs中唯一具有溶血磷脂酶D(lysophospholipase D,lysoPLD)活性的成员,它可以将溶血磷脂...     

磷脂酰肌醇转移蛋白

磷脂酰肌醇转移蛋白(phosphatidylinositol/phosphatidylcholine transfer proteins,PITP)普遍存在于真核生物细胞中,PITP能够结合并交换一分子的磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)或磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC),并促进这两类脂分子在细胞内膜组分间的转移。PITP对细胞内膜组分间脂类的运输和代谢、分泌囊泡的形成和运输、磷脂酶C(phospholipase,PLC)调节的信号传导以及神经退化等生理生化过程具有重要的影响。综述了近年来PITP的研究进展,并对目前研究中存在的一些问题进行探讨。     

蜡状芽孢杆菌磷脂酶D的活性形式及HKD活性区域的分子改造对其活性的影响北大核心CSCD

磷脂酶D是一类特殊的酯键水解酶,它能水解磷脂生成磷脂酸和羟基化合物,并能催化某些含羟基的化合物结合到磷脂的酰基上,形成新的磷脂,在食品和医药领域应用潜力巨大。本研究实现了蜡状芽孢杆菌磷脂酶D的克隆,并在大肠杆菌中成功表达。通常情况下,磷脂酶D存在2个HKD保守序列,以单体形式产生活性;少数原核生物中磷脂酶D只有1个HKD保守序列,以二聚体形式产生活性。通过酵母双杂实验发现,源于蜡状芽孢杆菌的磷脂酶D活性存在形式是单体结构,但其只具有1个HKD保守序列,靠近N端存在1个HRD序列,即HKD中K被R取代。将HRD定点突变为HKD,恢复为经典的2个HKD保守序列,其酶活性提高了10%左右,蛋白质水平的表达量和稳定性无显著变化。通过定点突变提高磷脂酶D活性,为工业化高效生产新型磷脂奠定了理论基础。     

蜡状芽孢杆菌磷脂酶D的活性形式及HKD活性区域的分子改造对其活性的影响

磷脂酶D是一类特殊的酯键水解酶,它能水解磷脂生成磷脂酸和羟基化合物,并能催化某些含羟基的化合物结合到磷脂的酰基上,形成新的磷脂,在食品和医药领域应用潜力巨大。本研究实现了蜡状芽孢杆菌磷脂酶D的克隆,并在大肠杆菌中成功表达。通常情况下,磷脂酶D存在2个HKD保守序列,以单体形式产生活性;少数原核生物中磷脂酶D只有1个HKD保守序列,以二聚体形式产生活性。通过酵母双杂实验发现,源于蜡状芽孢杆菌的磷脂酶D活性存在形式是单体结构,但其只具有1个HKD保守序列,靠近N端存在1个HRD序列,即HKD中K被R取代。将HRD定点突变为HKD,恢复为经典的2个HKD保守序列,其酶活性提高了10% 左右,蛋白质水平的表达量和稳定性无显著变化。通过定点突变提高磷脂酶D活性,为工业化高效生产新型磷脂奠定了理论基础。     

溶血磷脂酸的信号转导途径

溶血磷脂酸（ＬＰＡ）是一种细胞间磷脂信使,它可通过Ｇ蛋白偶联受体引起多种生物学效应,如促进血小板聚集,诱导平滑肌收缩,刺激细胞增殖,抑制细胞分化等。最近研究发现Ｇ蛋白介导的ＬＰＡ信号转导途径至少有四种：（１）刺激磷胆酶Ｃ和磷脂酶Ｄ;（２）抑制腺苷酸环化酶;（３）激活Ｒａｓ及其下游的Ｒａｆ／ＭＡＰＫ途径;（４）Ｒｈｏ信号;粘着斑蛋白的酪氨酸磷酸化和肌动蛋白细胞骨架的重组。这些信号转导途径对细胞的增殖     

鼠重组磷脂酶D2腺病毒的构建及功能的初步研究

将磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D2基因及其功能缺陷点突变基因 (K75 8R)从真核表达载体pCGN中克隆至带有绿色荧光标记蛋白的穿梭质粒pAdTrack CMV中 ;再与腺病毒骨架载体一起在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组 ,成功构建磷脂酶D2重组腺病毒。该病毒颗粒感染人胚肾 2 93细胞 ,高效表达磷脂酶D2及其功能缺陷蛋白。这种表达对M3乙酰胆碱受体介导的细胞内磷脂酶D激活无影响。但磷脂酶D2功能缺陷蛋白对蛋白激酶C介导的胞内磷脂酶D激活有显著抑制作用 ;相反 ,磷脂酶D2蛋白有显著增强作用。结果表明     

重组人磷脂酶D2在体内能明显抑制慢性哮喘豚鼠血清中GPI-PLD的表达

 通过建立慢性豚鼠哮喘模型,研究重组人磷脂酶D2(rhPLD2)干预慢性哮喘豚鼠血清中糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)含量的变化,探寻可能的机制. 以rhPLD2干预慢性哮喘豚鼠,用TX-114分相法检测豚鼠血清中GPI-PLD酶活性.与正常状态豚鼠相比较,慢性哮喘状态豚鼠其血清中GPI-PLD酶活性显著升高.但以rhPLD2及地塞米松干预慢性哮喘豚鼠后,该指标显著下降. rhPLD2可通过抑制其血清中GPI-PLD酶活性表达,来抑制哮喘发生过程中的炎症反应.     

阿的平调节β—肾上腺素受体,膜磷脂代谢及预防热损伤的研究

以前研究表明,热应激可使大鼠肺组织细胞膜肾上腺素能受体明显下调、膜磷脂分解代谢加速。本研究观察了阿的平（磷脂酶Ａ２的非特异性抑制剂）对β－肾上腺素受体及膜磷脂代谢的调节作用和对机体热损伤的防护作用。结果表明,阿的平对热应激造成的β－受体的下调、磷脂分解的加速具有明显的抑制作用,并能明显提高大鼠和人对热应激的耐受能力。     

大孔树脂固定化磷脂酶D

磷脂酶D(PhospholipaseD,EC3.1.4.4,PLD)是催化磷酸酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称.利用PLD的转碱基作用是目前催化合成磷脂酰丝氨酸(PS)的最佳途径.本实验以5种大孔树脂为载体固定化磷脂酶D(PLD)进行了研究.以酶回收率为主要指标,选择了最佳载体和优化了固定化条件.结果表明:非极性阳离子交换树脂H103是最佳固定化载体;其最优固定化条件:加酶液量1.2 mL,固定时间80 min,pH 6.0柠檬酸-柠檬酸钠的缓冲液浓度为10 mmol/L.最佳固定化条件下,固定化之后的PLD比游离PLD酶活提高了三倍.     

磷脂酰丝氨酸制备的研究进展

磷脂酰丝氨酸具有改善记忆和认知能力、防治老年痴呆症、抑郁症及缓解精神头力等作用,目前在国外被用作营养补克剂广泛应用于保健食品中.着重从提取法和酶转化法2个方面综述了磷脂酰丝氨酸的制备方法,同时通过对国内外磷脂酰丝氨酸消费现状的调查,对其在食品、药品、保健品方面的应用前景进行了展望.