rhIL-12二硫键、N-糖基化位点及C端氨基酸序列分析

重组人白细胞介素12（rhIL-12）是一种已经用于治疗肿瘤,寄生虫、病毒性感染及造血障碍等疾病研究的异二聚体糖蛋白。结构确证是质量控制的重要内容,此研究对CHO细胞表达的rhIL-12二硫键配对方式、N-糖基化位点以及C端氨基酸序列进行了分析,使用Trypsin、Chymotrypsin和Glu-C三种酶分别对rhIL-12进行非还原酶解,尽可能地在其所有半胱氨酸残基之间断裂而形成二硫键相连的肽段,然后使用LC-MS/MS对酶解后的肽段样品进行分析,确定了rhIL-12样品中存在和理论配对方式相符的7对二硫键。将rhIL-12二硫键还原后并烷基化修饰保护,分别采用Trypsin,Chymotrypsin和GluC进行酶解,并用LC-MS/MS对酶解后肽段进行了质谱肽图及C端氨基酸序列分析,确定了rhIL-12 p35亚基C端氨基酸序列的8个氨基酸、p40亚基C端氨基酸序列的15个氨基酸。对rhIL-12样品还原及烷基化后用Trypsin变性酶解,所得肽段在H₂O及H₂¹⁸O水中分别用PNGase F糖苷酶处理酶切产物。并通过二级质谱分析脱糖后糖肽段分子量变化,从而确定了rhIL-12的3个N糖基化修饰位点,分别为p35亚基的71位和85位以及p40亚基的200位。通过建立酶解结合二级质谱鉴定的方法,证明了新药rhIL-12的二硫键位点、C端氨基酸序列和糖基化位点与理论一致。     

不同产地红毛鸡(Centropus sinensis)氨基酸成分的分析

目的:评价不同产地红毛鸡药材的质量。方法:采用日立L-8800型全自动氨基酸分析仪测定12批不同产地红毛鸡总氨基酸的含量。结果:12个样品均含有17种总氨基酸,其中必需和半必需氨基酸占总氨基酸的49.42%～53.16%。结论:不同产地的红毛鸡均含有丰富的氨基酸,具有较高的药用价值,但含量随产地不同而异。     

条斑紫菜(Porphyra yezoensis)游离氨基酸组成分析

采用邻苯二甲醛/9-氯甲酸芴甲酯(OPA/FMOC)柱前衍生反相高效液相色谱法(RP-HPLC),对江苏南通海区栽培的12个条斑紫菜(Porphyra yezoensis)样品游离氨基酸组成进行分析.结果显示:供试样品游离氨基酸总量在19.82～38.91 mg·g-1之间,共检出16种游离氨基酸,其中Ala、Arg、...     

氨基酸和微量元素在虫草菌感染虫草蝠蛾幼虫中的影响

本文收集了虫草蝠蛾2—6龄五个龄期组幼虫,四组处于不同发育阶段的虫草菌丝体、被虫草菌感染后的僵虫体、全虫草体及子实体共计12组样品的氨基酸,微量元素分析资料,应用聚类分析方法对各样品变量的分类单元及其贡献值进行初步探讨。结果显示:各样品间的氨基酸、微量元素组成水平各不相同,5、4龄幼虫的总体组成水平在比例关系上更接近全虫草体,虫草菌丝体愈培养至晚期就愈接近子实体的组成。分析认为,5、4龄虫易被感染与其氨基酸、微量元素的组成背景值有关;以培养至晚期的菌丝体或有性生殖孢子更易感染幼虫。     

不同产地藏红花游离氨基酸比较分析

目的：研究不同产地藏红花中游离氨基酸含量，为藏红花的研究、产品设计和开发提供理论支持。方法：以云南维西、上海、西藏、伊朗等地藏红花为实验材料，采用氨基酸自动分析仪对藏红花中游离氨基酸进行了测定。结果：（1）供试样品中除上海样品中检出17种游离氨基酸，其余样品均检出18种氨基酸，各样品中氨基酸总量分别为维西3号样品（编号为W3）981.464(mg/100 g)、维西2号样品（编号为W2）882.646 (mg/100 g)、维西1号样品（编号为W1）785.140 (mg/100 g)、西藏样品（编号为XZ）325.106 (mg/100 g)，上海样品（编号为SH）312.369 (mg/100 g)、伊朗样品（编号为YL）310.427 (mg/100 g);(2)在游离氨基酸中，有赖氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸等6种人体必需氨基酸；有谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺和天门冬氨酸等4种鲜味氨基酸；有丝氨酸、甘氨酸和丙氨酸等3种甜味氨基酸；有冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、酪氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等9种药效氨基酸；（3）藏红花游离氨基酸中，丙氨酸含量最...     

棉花不同部位器官中的氨基酸含量比较

有关氨基酸的问题过去在粮食和饲料作物上研究得较多口，棉花生长过程中氨基酸含量变化的研究也有一些。氨基酸含量变化不仅直接反映氮的代谢过程，也间接地影响光合作用等生理过程。本文对棉株不同部位器官的氨基酸含量差异进行了检测。材料与方法试验在本所试验农场进行，于1996年4月20日播种。供试棉花（Gossypiumhirsutum）品种为中棉所12和转基因抗虫棉品系R93－4。土壤为砂质壤土，管理按常现生产进行。分别于开花前（7月5日）和吐絮前（9月10日）取样测定氨基酸。将样品放火样品皿中，置60℃烘箱中烘24h后碾碎。每样品称取50mg，于…     

冬虫夏草鲜品及干品游离氨基酸比较分析

采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生高效液相色谱法,测定并比较烘干、晒干所得的冬虫夏草干燥样品及未经处理的鲜冬虫夏草样品的游离氨基酸含量。结果表明:3类样品均含有19种游离氨基酸,其中鲜冬虫夏草的游离氨基酸总量、药效氨基酸、呈味氨基酸及必需氨基酸含量均最高,显著高于晒干和烘干冬虫夏草(P0.01),晒干和烘干冬虫夏草之间无显著差异。冬虫夏草的游离氨基酸在晒干、烘干过程中会造成损失。该研究为冬虫夏草加工工艺的提升提供了科学依据。     

群分析在研究虫草蝠蛾幼虫生长发育中的应用初探

在进行人工饲养虫草蝠蛾幼虫的研究过程中,我们测定了2～6龄各五个龄期组的幼虫,四个不同发育阶段的虫草菌丝体组(分别培养45、60、80、100天)、子实体、僵虫体和全虫草等12个样品组的氨基酸和微量元素组成,每组各测18个微量元素和17个氨基酸指标共35个变量。发现各样品与变量间存在一些关系,将测定取得的12×35=420个原始数据,借助IBM-PC型电子计算机,用Besic语言编制程序进行计算分析。试图揭示其中的某些规律,以期为饲养该幼虫提供可资参考的依据。     

云南盈江县不同产地草果氨基酸和矿质营养元素分析

用氨基酸自动分析仪、等离子体发射光谱仪(ICP法)等方法测定云南盈江县三个草果Amomum tsaoko主产乡的草果氨基酸、矿质营养元素等成分。结果显示,不同产地草果中氨基酸和矿质营养元素含量有明显差异。盈江县各地的草果氨基酸含量均比文山产草果低,其中苏典乡劈石村的2号样品(海拔1540 m,土壤pH 6.58)氨基酸含量与文山样品最为接近;微量营养元素总含量则相反,盈江县产草果均高于文山样品。     

相思子属三种药材中的氨基酸分析比较

利用全自动氨基酸分析仪和高效液相色谱仪分析比较相思子属三种药材中氨基酸成分及含量。结果9个样品都检测出17种氨基酸和2种色氨酸衍生物。结论:不同样品中的氨基酸含量有所差异,但其中门冬氨酸、谷氨酸、亮氨酸和赖氨酸的含量相对较高。     

L-异亮氨酸产生菌的选育

为检测不同产地天麻中氨基酸的含量差异,采用日立L-8800氨基酸自动分析仪对7个分别产自四川荥经县、剑阁县和云南小草坝的野生及引种天麻品种的氨基酸含量进行了测定.结果显示,7种天麻的氨基酸种类丰富且含量均较高,其中以四川荥经县野生样品中氨基酸含量最高,四川荥经县引种云南小草坝样品中氨基酸含量最低.结果表明,不同产地的天麻中氨基酸的含量存在差异.     

山东栽培瓜蒌氨基酸的含量测定

利用氨基酸自动分析仪对10个山东栽培瓜蒌样品中的水解氨基酸和游离氨基酸进行含量测定.结果发现山东栽培瓜萎中氨基酸的种类较为丰富,均含有19种相同的游离氨基酸和水解氨基酸;氨基酸含量在各个样品之间差异显著,从游离总氨基酸的含量考虑,糖瓜蒌略优于仁瓜萎,仁瓜蒌优于地瓜萎.     

非转基因和转基因小麦中氨基酸含量的分析及比较

目的：对小麦中氨基酸分析的水解方法进行研究,比较非转基因和转基因小麦中氨基酸的含量。方法：样品用含0.1%巯基乙酸的盐酸溶液水解提取,样液经定容、过滤、浓缩、复溶、过膜后,用氨基酸分析仪测定,外标法定量。结果：应用含巯基乙酸的盐酸水解液对小麦样品进行水解的同时有效防止了含硫氨基酸（蛋氨酸和半胱氨酸）的氧化,相对氧化水解方法节省前处理时间,方法的回收率为93%~99%,相对标准偏差小于2.4%。非转基因和转基因小麦样品的17种氨基酸分析,氨基酸含量不存在显著性差异。结论：该方法准确快速、重现性好,适用于小麦中氨基酸含量分析的检测要求。     

中药鳖甲及两种炮制品的氨基酸营养学

本文报导了鳖甲及其炮制品的氨基酸营养分析情况。结果表明,生品含17种游离氨基酸,传统炮制品含15种游离氨基酸,食用菌炮制品含16种游离氨基酸,且生品总氨基酸的含量明显高于炮制品,经盐酸水解后,炮制前后的样品均测得17种氨基酸,生品的含量略高于炮制品,炮制品前后样品中所测游离氨基酸和水解后氨基酸均含有8种人体必需氨基酸。     

牛乳基和羊乳基奶粉中16种氨基酸含量的测定及比较

目的：对乳粉中氨基酸分析的水解方法进行研究,比较牛乳基奶粉和羊乳基奶粉中氨基酸的含量。方法：样品用含巯基乙酸的盐酸溶液水解提取,经定容、过滤、真空浓缩、复溶、过膜后,用氨基酸分析仪测定,外标法定量。结果：应用含0.05%巯基乙酸的盐酸水解液对奶粉样品进行水解的同时有效防止了蛋氨酸的氧化,相对氧化水解方法节省前处理时间,方法的回收率为94%~97%,相对标准偏差小于3.0%。通过对牛乳基和羊乳基奶粉样品中的16种氨基酸分析,牛乳基奶粉中赖氨酸含量略高于羊乳基奶粉,其他相应氨基酸含量不存在显著性差异。结论：该方法准确快速、重现性好,适用于奶粉中氨基酸含量分析的检测要求。     

用DANS反应-聚酰胺薄膜层析-荧光方法对小鼠尾壳核γ-氨基丁酸和牛磺酸的超微量测定

本工作将DANS反应和微量薄膜层析技术与荧光测量加以修改后联用,并注意了组织样品的去蛋白和DANS-牛磺酸洗脱剂的改进,获得了满意的定量测定氨基酸的结果。GABA、牛磺酸的浓度(GABA:0—60×10~(-12)克分子;牛磺酸:0—300×10~(-12)克分子)与其相应的DANS衍生物的荧光强度成线性关系。回收率分别为95—113％和82—94％。灵敏度比原有荧光方法提高了近100倍(10~(-12)克分子数量级)。用此法测得小鼠尾壳核中的GABA和牛磺酸分别为1.26±0.06和15.5±1.0微克分子/克湿重,组织样品只需0.5毫克或更少些。这为测定微量神经组织中的自由氨基酸提供了一种简便的超微量方法.     

高效液相色谱法对农业样品中氨基酸含量的测定

介绍了采用一种新型的国产氨基酸色谱柱ＹＷＧＡ—Ａ柱,对与农业有关的多种样品进行氨基酸测定的方法。这种色谱柱可使全部氨基酸得到完全的分离,且柱效高,柱压低,价格便宜。农业样品的品种多,比较复杂,文中还对不同样品的前处理做了简要叙述。氨基酸的分析方法采用的是柱前衍生ＯＰＡ法,还对此方法测定中的一些问题进行了讨论。     

高效液相色谱法分析虾头中的氨基酸

采用OPA柱前衍生氨基酸,用高效液相色谱法,经多步洗脱,用荧光检测器检测,分析虾头中各类氨基酸。用时短,样品用量少,灵敏度高,适用于分析大量样品     

PT-C_(18)小柱在食物氨基酸分析中脱色效果观察

<正> 在进行食物样品的氨基酸组分和含量分析时,需用盐酸水解处理,在此过程中,由于色氨酸和碳水化合物的破坏,产生有颜色的分解产物,从而干扰了正常的氨基酸分析,尤其是当水解样品中颜色较深而氨基酸含量较低时,影响更为明显。因此,对水解样品脱色引起人们的十分关注,很多学者在     

商品鹿鞭中氨基酸含量比较

采用氨基酸自动分析仪测定不同品种与产地的9份鹿鞭药材中氨基酸成分的种类及含量。这9份样品中均含17种氨基酸,其中人体必需氨基酸6种。17种氨基酸中以甘氨酸含量最高,必需氨基酸中亮氨酸含量最高;比较不同样品的含量,以辽宁西丰的梅花鹿鞭的总氨基酸含量最高,黑龙江梅花鹿鞭的必需氨基酸含量最高。结论为不同产地鹿鞭中氨基酸含量有一定差异,该方法可用于鹿鞭药材的质量评价。