家蚕胚胎细胞系BmE-SWU1的建立及其生物学特性

对家蚕反转期胚胎组织进行一年多的原代培养,分离筛选出了高繁殖细胞群体,建立了BmE-SWU1细胞系。该细胞系以梭形和近圆形细胞为主,杂以少量多突起和巨型细胞。细胞系的倍增时间在28℃时为57.6h,染色体呈短杆状或颗粒状,染色体数目异倍化,具有典型鳞翅目昆虫细胞系的染色体特征。BmE-SWU1细胞系对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)高度敏感,半数组织培养感染剂量(TCID50)为2.92415×10-7。     

恒河猴肾MK—8611细胞系的建立及其生物学特性

从健康雄性恒河猴肾脏,经胰酶——EDTA二钠液消化,获得的细胞悬液,采用延长传代时间和28℃及37℃交替单层静置培养,建立一株能稳定传代的细胞系,命名为MK-8611细胞系。该细胞退变缓慢、维持正常形态时间长,未发现细菌、霉菌、支原体等微生物污染,对异种动物无致瘤性,经试验对脊灰、麻疹、腺病毒、ECHO、COXB、乙型流感、轮状病毒、呼吸道合胞、流行性出血热等病毒敏感。     

家蚕胚胎细胞系BmE-SWU2的建立及其生物学特性研究

家蚕反转期胚胎组织经过一年多的原代培养,建立了BmE-SWU2细胞系。该细胞系细胞呈短梭形或圆形,细胞较小,属上皮型贴壁生长细胞系;细胞生长速度快,铺平率高于80%,繁殖力强,细胞群体倍增时间为51.8 h。BmE-SWU2细胞系的二倍体细胞（2n=56）比例达到89.76％,属二倍体细胞系,其染色体具有鳞翅目昆虫染色体的典型特征,中期染色体呈短杆状或颗粒状。BmE-SWU2细胞系对BmNPV高度敏感,TCID₅₀为1.581×10^-7。     

云南宣威肺腺癌细胞系SLC—89的建立及其生物学特性

本文报告1例来源于云南宣威县患者的肺癌标本,经体外培养建系成功,命名为SLC-89。该细胞系细胞经HE,瑞氏染色形态符合癌细胞特征。在体外培养已两年多,传代196代,细胞冻存后复苏生长良好。第86代细胞倍增时间为26.4小时,染色体数为非整倍体,众数为超二倍体,长期培养后染色体数明显增加。细胞接种裸鼠有移植瘤生长,组织象与原发肺癌组织象相似。电镜观察细胞表面有微绒毛,浆中可见分泌颗粒,有较多板层小体,表明来源于肺泡上皮。     

Wistar大鼠自发性乳腺肿瘤细胞系的建立及其生物学特性

目的 从Wistar大鼠自发性乳腺肿瘤中分离出乳腺肿瘤细胞系(ZHL2006),并对其进行鉴定,为动物模型的开发、肿瘤发病机制的探讨提供有价值的线索.方法 对一例Wistar大鼠自发性乳腺腺癌瘤组织进行培养.对传代培养细胞进行细胞生长曲线测定、细胞形态结构分析、细胞染色体分析,检测广谱细胞角蛋白(PCK)表达、软琼脂集落形成实验等检测.将细胞接种于10只裸鼠,并对形成的肿瘤进行病理组织学检查,并进行分离培养.结果 ZHL2006细胞在体外生长迅速,群体倍增时间为43.6 h;倒置显微镜及Giemsa染色镜下观察细胞为多边形及梭形;透射电镜观察可见细胞表面有微绒毛,核高度不规则,核浆比例增大,核仁明显等;染色体数目和结构异常,具有癌细胞特性.广谱细胞角蛋白(PCK)染色阳性,说明其自上皮而非来自基质;同时ZHL2006细胞系在软琼脂中可形成克隆,具裸鼠致瘤性.该乳腺肿瘤细胞系经体外长期培养后已形成永生化细胞系,并具有明显的恶性细胞表型.裸鼠接种实验成功率为6/10,复制肿瘤细胞和原发肿瘤形态结构一致,细胞培养形态结构一致.结论 本研究成功的建立了大鼠乳腺肿瘤细胞系,该细胞系具有典型的恶性肿瘤特征,能应用于裸鼠并成功复制出乳腺肿瘤模型.     

牦牛乳腺上皮细胞系的建立与生物学特性

本研究旨在建立牦牛乳腺上皮细胞体外培养体系。采用胶原酶消化法成功地建立了牦牛乳腺上皮细胞系(YMEC),通过免疫细胞化学、超微结构观察和RT-PCR 法对YMEC 细胞进行了鉴定,并研究了其形态、活力、生长曲线以及核型等生物学特性。结果表明,YMEC 细胞染色体2n = 60,群体倍增时间为45 ～ 48 h,持续培养25 代后出现细胞分化;细胞呈典型的“铺路石样”形态,其表面有丰富的微绒毛,细胞质内含丰富的线粒体和粗面内质网。污染检测结果为阴性。在激素诱导培养时,检测到了β - 酪蛋白mRNA 的表达。表明本研究成功建立了保留泌乳功能的牦牛乳腺上皮细胞系,为研究牦牛乳腺上皮细胞的功能提供了理想的工具。     

一氧化氮合酶（NOS）在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的检测膀胱移行细胞癌中一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）的表达,并分析其表达与肿瘤病理特性的关系.方法采用免疫组织化学技术检测35例膀胱移行细胞癌标本、12例癌旁粘膜标本及8例正常膀胱粘膜标本中一氧化氮合酶三种亚型的表达情况.结果 35例肿瘤标本中nNOS、iNOS、eNOS阳性表达率分别为74.3%、85.7%、42.9%,膀胱移行细胞癌中iNOS表达较正常膀胱粘膜增高.但移行细胞癌、癌旁粘膜、正常粘膜三组间nNOS及eNOS表达无差别.nNOS、iNOS、eNOS表达与膀胱移行细胞癌分期分级可能无相关性.结论 iNOS在膀胱移行细胞癌中表达增高,可能参与膀胱移行细胞癌的发生发展.     

人胚胎角膜上皮细胞系的建立和生物学特性

为构建角膜基础研究的稳定载体和操作平台,通过合法渠道获得人胚胎,并对角膜上皮细胞进行了分离培养。经反复传代,初步建立了人胚胎角膜上皮细胞系,并对其生物学特性进行了研究。结果显示,培养细胞具有较典型的上皮细胞特征。细胞生长较快,最快时两天可传代一次。K19和PCNA在各代胚胎角膜细胞均有表达,K19的表达部位位于胞浆,而PCNA的表达部位位于胞核。处于细胞周期中S期的细胞比例大约为11%￣23%。染色体核型分析表明各代细胞染色体的数目和形态相似。因此,人胚胎角膜上皮细胞适合于建立相对稳定的细胞系。培养细胞具有分化上的幼稚性和较强且稳定的增殖能力,细胞生长状态良好,而且该细胞系的遗传特征较为稳定。     

家蝇胚胎细胞系的建立及其生物学特性

昆虫细胞系在许多领域得到广泛的应用。以家蝇Musca domestica L.卵(胚胎)为材料,用含20%胎牛血清的M3培养基培养,原代培养35d左右形成单层,每7d传代1次,连续传代60代次。细胞群体倍增时间为44h,染色体2n=12,可在液氮及4℃冰箱中保存复苏,命名为MDEC-07114。     

鲤鱼(Cyprinus carpio)体细胞系的建立及其生物学特性分析(简报)

动物细胞的培养技术是1907年哈里逊在淋巴块中对蛙的神经板培养成功开始的,其后近一个世纪以来,陆续成功地培养了哺乳动物、昆虫等各种动物细胞,并广泛用于生物科学的各个分支。鱼类的细胞培养的系统研究和建系实践大约起始于60年代,被公认的真骨鱼类的第一个永久性的细胞系——虹鳟性腺细胞系(RTG-2)是由Wolf建立的。随后各种鱼类细胞系相继建立,涉及的组织来源有吻端、肾脏、卵巢、尾鳍、性腺、肝脏、胚胎、囊胚、原肠胚、鳍条等,同时也进行了细胞体外培养条件、保存条件以及生物学特性的研究,为渔业生产和科学研究做出了重要贡献。研究者可利用来自不同种的培养细胞进行细胞杂交(融合)、核移植、DNA介导的基因转移以及一些物理图谱的建立等。细胞系在细胞生物学、遗传学的研究及培育动植物新品种等方面起着重要作用。本文首先对鲤鱼的尾鳍和吻端上皮细胞进行培养,建成鲤鱼体细胞系并对其生物学特性进行了分析。在此试验中我们侧重寻找适合做克隆供体的细胞达到最佳状态的条件, 以优化供体细胞的质量(另文报道)。此研究正在进行中。     

锦鲤鳍条组织细胞系的建立及其生物学特性

采用组织块移植培养技术,对来源于锦鲤（Cryprinus carpiod）鳍条组织的细胞进行原代培养,建立了锦鲤鳍条组织细胞系,已稳定传代60多次,命名为Koi-Fin。锦鲤鳍条组织细胞为成纤维样细胞,最佳培养基为MEME,最适血清体积分数为10%,最适培养温度为25 oC,群体倍增时间为43.5 h。该细胞经液氮冷冻保藏12个月后采用台盼蓝染色,约（80.21±5.84）%的细胞具有细胞活性,复苏细胞生长旺盛。细胞染色体分析显示,第16代锦鲤鳍条组织细胞的染色体数目为正常二倍体2n=100,第40代细胞的染色体众数为52。病毒敏感性试验结果表明,Koi-Fin细胞系对锦鲤疱疹病毒（Koi Herpesvirus,KHV）敏感,可产生典型细胞病变效应,病毒滴度为107.86±0.51TCID50/mL。针对锦鲤疱疹病毒胸苷激酶（thymidine kinase,TK）基因设计特异性引物进行PCR检测,可扩增出病毒靶基因片段。     

人黑色素瘤细胞系（HMM—239）的建立及其生物学特性

人黑色素瘤细胞系在国外虽已建立近200个[1],但在国内尚未见报道。我们于1987年首次将一活检病理诊断为左足趾黑色瘤的患     

源于129S1品系的小鼠胚胎干细胞系的建立及其生物学特性分析

从129S1小鼠早期胚胎的内细胞团分离、培养类胚胎样细胞,经反复传代,成功地建立了129S1小鼠胚胎干细胞系,命名为NM-2细胞系。形态学鉴定具有胚胎干细胞的典型形态特征,正常核型率为80％;呈碱性磷酸酶阳性、表达胚胎干细胞特异性转录因子OCT-4;体内分化后可形成源于三胚层的组织结构;经囊胚腔显微注射后所获得的子代个体中79％具有毛色嵌合表型;雄性嵌合个体中31％发生生殖腺嵌合;同时,通过育种观察到所有生殖腺嵌合体的子代小鼠表型正常。以上结果证实NM-2细胞系为一株具高生殖腺嵌合能力的小鼠胚胎干细胞系。     

人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型、细胞系建立及其生物学特性研究

目的建立人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和相应体外细胞系.方法将病理证实的人卵巢浆液性乳头状腺癌手术切除标本移植于SCID小鼠皮下,成瘤后行鼠间传代,取移植瘤细胞体外分离培养、传代和建系,并应用细胞、分子生物学手段对移植瘤和建系细胞进行一系列生物学特性检测.结果历时14个月传至5代,皮下移植瘤存活率为90%,持续6个月,体外建系(OVA-319)细胞生长稳定.镜下观察组织形态学和超微结构符合原肿瘤组织基本特征;染色体分布在12～46条之间,多为异倍体,显示人类肿瘤异常染色体;流式细胞术和RT-PCR技术分析原代、体内移植瘤和OVA-319细胞结果一致,表现为瘤细胞生长活跃、细胞周期分布相仿,MAGE-2基因在mRNA水平异常表达.结论人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和OVA-319细胞系为人类肿瘤的研究提供了良好的实验材料.     

鲤鱼（Cyprinus carpio）体细胞系的建立及其生物学特性分析（简报）

动物细胞的培养技术是1907年哈里逊在淋巴块中对蛙的神经板培养成功开始的,其后近一个世纪以来,陆续成功地培养了哺乳动物、昆虫等各种动物细胞,并广泛用于生物科学的各个分支。鱼类的细胞培养的系统研究和建系实践大约起始于60年代,被公认的真骨鱼类的第一个永久性的细胞系——虹鳟性腺细胞系(RTG-2)是由Wolf建立的。随后各种鱼类细胞系相继建立,涉及的组织来源有吻端、肾脏、卵巢、尾鳍、性腺、肝脏、胚胎、囊胚、原肠胚、鳍条等,同时也进行了细胞体外培养条件、     

C57BL／6J小鼠ES细胞系的建立及其特性分析

本文报道从C57BL/6J个鼠的囊胚中,建立了三个ES细胞系MESPU17,MESPU18,MESPU19。这些细胞的细胞学特征和强AKP反应,表明这三个细胞系具有干细胞的特征。这三个细胞系均为XY型,正常二倍体核型分别占70％、88％和59％。体外分化可形成简单类胚,体内分化可形成瘤块。与国际上通用的CCE和来自129/ter的ES细胞MESPU13相比,这三个细胞系的ES细胞较大;在体外培养时,生长较慢;细胞也较粘,进行显微注射时,很容易粘在注射针壁上。MESPU17,MESPU18进行了嵌合体制作,以BALB/c和昆明鼠的囊胚为受体,采用囊胚注射法未获嵌合体,但使用昆阴鼠的8细胞胚注射法和共培养法得到嵌合体。     

两种不同淋巴转移能力小鼠肝癌细胞亚系的建立和生物学特性

通过单细胞分离(克隆)培养和局部淋巴结转移灶筛选的方法,建立两种不同淋巴转移能力HepA肝癌细胞亚系,分别命名为HepA-H和HepA-L,并比较其生长、游走和贴壁能力等生物学特性。瘤细胞接种于小鼠足垫后,同侧腘窝淋巴结转移率,HepA-H为83.3%,HepA-L为16.7%,两者具有显著差异(p<0.01)。两种细胞亚系均未见肺、肝、脾、肾等脏器转移灶。体外实验显示,HepA-H的生长、游走和贴壁能力均强于HepA-L。HepA肝癌不同淋巴转移能力亚系的建立,为研究肿瘤经淋巴管转移机理提供了良好的肿瘤淋巴转移动物模型。     

p53基因表达沉默的稳定Vero细胞系的建立及特性分析

利用慢病毒介导的RNA干扰技术,建立稳定沉默p53基因的Vero细胞模型。设计针对p53基因的shRNA序列,构建p53shRNA慢病毒载体并感染Vero细胞;嘌呤霉素筛选阳性细胞,局部消化法挑选细胞克隆;利用RT-PCR和West-ernblot检测p53的表达水平;利用虫荧光素酶报告系统,分析p53的转录激活功能。RT-PCR和Westernblot结果显示,慢病毒介导的shRNA有效地沉默p53基因表达;与对照组细胞相比,干扰组细胞的p53的转录激活功能明显降低。慢病毒介导的shRNA高效、稳定地沉默了p53基因的表达,同时,有效地降低了p53的转录激活功能,为研究p53的生物学功能提供了有利的工具。