轮叶党参的组织培养及植株再生研究

以轮叶党参为材料,研究了不同外植体、激素组合、培养基及光照条件对愈伤组织诱导及植株再生的影响.结果表明,叶片是轮叶党参组织培养较为合适的外植体.外植体在添加0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+1.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) KT的MS培养基上愈伤组织诱导率最高可达100%;愈伤组织转移到附加0.75 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) NAA的MS培养基进行继代培养,增殖后的愈伤组织转移到附加0.5 mg·L~(-1) 6-BA+0.2 mg·L~(-1) NAA的1/2MS分化培养基进行分化,其分化率达89.4%;将分化出的芽转接到附加0.2 mg·L~(-1) IAA+0.2 mg·L~(-1) NAA的1/2MS培养基,生根率达92.5%.暗培养诱导出愈伤组织后转到16 h·d~(-1)光照条件下,愈伤组织增殖倍数和分化率显著提高,再生苗健壮,长势强.     

催吐萝芙木离体培养和植株再生体系的建立

为建立催吐萝芙木(Rauvolfia vomitoria Afzel.)的快繁再生体系,以茎段为外植体,比较了植物生长调节剂对其愈伤组织诱导、分化及生根的影响。结果表明,诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+2,4-D 1.0 mg L~(–1)+TDZ 0.5 mg L~(–1)或MS+2,4-D2.0 mg L~(–1)+TDZ 0.5 mg L~(–1),出愈率达100%且生长状况良好;诱导丛生芽的最佳培养基为MS+6-BA 3.0 mg L~(–1)+NAA 0.1 mg L~(–1),出芽率为46.6%,平均出芽数为3.04。这为催吐萝芙木的快速繁殖和遗传转化研究奠定了基础。     

诺丽叶片的离体再生

以诺丽(Morinda citrifolia)叶片为外植体,在添加不同激素种类和浓度的MS培养基上进行离体培养,建立两种离体再生模式:模式Ⅰ为先脱分化愈伤组织,再分化不定根和不定芽;模式Ⅱ为直接培养生根后分化不定芽。结果表明:在模式Ⅰ中,诱导诺丽叶片产生愈伤组织的最优培养基为MS+0.1 mg·L~(-1)6-BA+2.0mg·L~(-1)2,4-D;诱导叶片愈伤组织再分化出不定根和不定芽的最优培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA或MS+2.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA,其中MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA生根时间最早为10 d左右,根系较发达,而MS+2.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA生根时间在15 d左右,根系发达。在模式Ⅱ中,诱导叶片直接生根长芽的培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.4 mg·L~(-1) NAA。将模式Ⅰ和模式Ⅱ中,完成诺丽叶片离体再生的苗切下后接种到MS+0.2 mg·L~(-1) NAA培养基中诱导生根,15 d左右分化出不定根,45 d获得完整植株。该研究结果为后续的遗传转化和基因改良研究奠定了基础。     

射干真叶、花蕾诱导愈伤组织的研究

目的:建立射干愈伤组织的诱导体系。方法:采用MS培养基为基本培养基,研究不同浓度激素配比及不同AgNO_3浓度对射干真叶、花蕾诱导愈伤组织的影响,并利用显微技术鉴定其愈伤组织类型。结果:射干无菌苗真叶愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+2,4-D 1. 0 mg·L~(-1)+6-BA 1. 5 mg·L~(-1)+NAA 1. 0mg·L~(-1)+AgNO_315mg·L~(-1),花蕾愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+2,4-D 1. 0 mg·L~(-1)+6-BA 1. 0 mg·L~(-1)+NAA 1. 0 mg·L~(-1),诱导率均高于60%,其中2,4-D对射干愈伤组织诱导至关重要,AgNO_3对射干真叶胚性愈伤组织的形成有一定的影响。结论:花蕾是射干愈伤组织诱导较理想的外植体材料,获得的高效愈伤组织诱导条件将为后续射干细胞悬浮体系的成功构建奠定基础。     

藏药匙叶翼首草高频组织培养再生体系优化研究

以匙叶翼首草种子为材料,探索种子最佳消毒方法,对影响无菌苗外植体愈伤组织诱导、增殖及植株再生的因素进行了研究。结果表明:(1)剥去外种皮的种子,经75%乙醇1min+0.1%HgCl_27min+50%多菌灵500倍液30min消毒后,在1/2 MS培养基中的发芽率达60.67%,无污染。(2)无菌苗的叶片和茎段都适宜诱导愈伤组织,在培养基MS+5.0mg·L~(-1) 6-BA+2.0mg·L~(-1) 2,4-D中可在10d内诱导出生长旺盛的愈伤组织,愈伤诱导率分别为84.00%、97.33%。(3)适宜的愈伤组织增殖培养基为MS+3.0mg·L~(-1) 6-BA+2.0mg·L~(-1) IAA,培养20d的叶片和茎段愈伤组织的生长率分别为74.37%、70.52%。(4)适宜的丛生芽诱导培养基为MS+3.0mg·L~(-1) 6-BA+2.0mg·L~(-1) IAA+250mg·L~(-1) L-脯氨酸+150mg·L~(-1)水解酪蛋白,30d后茎段和叶片的丛生芽发生率分别达到100%、94.44%。(5)再生苗在1/2 MS+0.5mg·L~(-1) NAA培养基中生根培养30d,生根率为100%。匙叶翼首草高效稳定的再生体系为保护其野生资源和工厂化育苗提供了有效途径。     

藏药山茛菪组织培养技术研究

以田间栽培两年生山莨菪幼芽(休眠芽)、带叶柄幼叶为外植体,通过器官培养分化芽的途径达到快速繁殖的目的。MS基本培养基附加NAA0～1.0mg·L~(-1)+6-BA2.0～3.0mg·L~(-1)+ZT0～3.0mg·L~(-1),适于丛生芽的诱导与增殖;附加2,4-D2.0mg·L~(-1)+NAA0.2mg·L~(-1)+6-BA0.2mg·L~(-1),适于愈伤组织的诱导与继代培养,诱导率高达93.2%;1/2MS培养基附加NAA1.0mg·L~(-1)+3.0%的蔗糖,适于生根诱导,生根率为100%。     

绿花百合胚性愈伤组织诱导与植株再生研究

建立绿花百合(Lilium fargesii Franch.)胚性愈伤组织诱导体系,为保护和合理利用这一重要植物资源提供高效、稳定的再生技术途径。以绿花百合鳞片为外植体,通过正交实验研究不同激素种类及其质量浓度对绿花百合胚性愈伤组织诱导、胚状体和小鳞茎分化及植株再生的影响。结果表明:较适宜诱导胚性愈伤组织的培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1)+2,4-D 0.1 mg·L~(-1),出愈率达89.29%,小鳞茎发生系数亦达4.7;胚性愈伤组织增殖及小鳞茎发生培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+2,4-D 0.1 mg·L~(-1),繁殖倍数5.0/35 d;根的诱导则在1/2MS+NAA 0.2 mg·L~(-1)的培养基上进行,生根率达100%,幼苗移栽至排水良好的沙土中,保温保湿培养35 d后,成活率可达90%以上。本研究为保持绿花百合优良品种特性、种苗繁育提供了有效途径,也为保护其野生资源,发展人工栽培和利用胚状体进行无性育种奠定了基础。     

枇杷叶荚蒾的愈伤组织诱导及植株再生

以枇杷叶荚蒾幼叶为外植体,MS为基本培养基,研究不同种类和浓度的植物生长调节物质对愈伤组织诱导、分化及生根的影响,建立了枇杷叶荚蒾再生体系。结果表明:枇杷叶荚蒾最佳灭菌组合为75%酒精预处理20s,再用0.1%HgC12浸泡12min;最佳愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.25mg·L-1+2,4-D1.0mg·L-1,诱导率最高达92%;最适芽分化培养基为MS+6-BA1.5mg·L-1+NAA0.2mg·L-1,分化率达87.25%;适宜的生根培养基为1/2MS+NAA1.0mg·L-1,生根率达85%。     

澳洲鸽子石斛组织培养快速繁殖研究

以澳洲鸽子石斛(Dendrobium kingianum Bidwill)幼嫩假鳞茎为外植体进行组织培养和快速繁殖研究。结果表明:采用合适的消毒方式,外植体消毒成功率可达92.5%。MS培养基添加5.0 mg·L~(-1) 6-BA适合用于不定芽的诱导和前期增殖,MS培养基+0.5 mg·L~(-1) NAA+2.0 mg·L~(-1) KT的增殖倍数最高,为6.96。丛生芽诱导出愈伤组织的最佳培养基为MS+0.25 mg·L~(-1) 2,4-D,诱导率为80%;愈伤组织分化的最佳培养为MS+1.0 mg·L~(-1) 6-BA,愈伤组织分化芽数为381.99个·g~(-1)。MS+2.0 mg·L~(-1) IBA+10%香蕉泥+1 g·L~(-1)活性炭最适合于生根壮苗培养;试管苗在兰石:泥碳土(1:1)的混合基质中移栽3个月后,成活率达100%,且生长速度快,基质成本较低,适合澳洲鸽子石斛试管苗的商业化栽培。     

草麻黄植株再生体系的建立

目的:以草麻黄的子叶为材料,建立草麻黄植株再生体系.方法:采用组织培养的方法进行了愈伤组织诱导、愈伤组织分化和不定芽生根研究.结果:MS+2,4-D 2.0mg/1+6-BA 1.0mg/l为诱导子叶形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基;MS+2,4-D 1.5mg/l+6-BA 1.5mg/l是愈伤组织的最佳继代培养基;MS+IAA 0.2mg/l+TDZ 2.0mg/l是愈伤组织不定芽分化的最佳培养基,分化率为75%;试管苗生根培养基为MS+2,4-D 1.0mg/l.结论:建立了草麻黄子叶再生系统,为开发和保护麻黄野生资源提供一定的材料来源和技术方法.     

盘龙参组织培养与快繁研究

以野生花卉植物盘龙参Spiranthes sinensis的芽、花序为外植体,探讨不同消毒处理及植物生长调节剂对盘龙参组织培养的影响,建立组织培养快繁体系。结果显示,以0.1%升汞消毒6 min处理效果较好;丛生芽形成、花序愈伤组织诱导最适合的培养基组合为1/2MS+6-BA 2.5 mg·L~(-1)+NAA 0.25 mg·L~(-1);最佳增殖培养基组合为1/2MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.75 mg·L~(-1);最佳生根培养基为1/2MS+NAA 1.25 mg·L~(-1)。     

红叶石楠离体植株再生频率的影响因素研究

以红叶石楠带芽茎段及叶片为外植体,分析激素和培养条件等因子对愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明,MS+0.10mg/L 2,4-D+0.50mg/L NAA+0.50mg/L 6-BA+0.50mg/L KT为最佳愈伤组织诱导培养基,暗培养的愈伤组织诱导率高于光培养,其愈伤组织诱导率可达100%(带芽茎段)和98%(叶片)。MS+0.50mg/L IBA+2.00mg/L 6-BA+2.00mg/L KT为最佳分化增殖培养基,分化率91%以上,增殖倍数6.8以上,均达到最高。1/2MS+0.50mg/L IBA+0.01mg/L NAA为最佳生根培养基,生根率92%,生根量4.4根/株,均达到最高。     

新疆雪莲植株再生体系研究初探

以新疆雪莲叶片、叶柄和根为外植体,诱导新疆雪莲植株再生,获得愈伤组织诱导、分化和生根最佳培养基,并初步建立其再生体系.研究结果表明:所用培养基均能诱导出愈伤组织且诱导率最高可达100%,分化率最高可达78%.对不同外植体的愈伤组织诱导结果表明:叶片和叶柄的诱导效果最好,根的诱导效果较差.其中对叶片愈伤组织诱导效果最好的培养基是MS+NAA0.50 mg/L+2,4-D0.10 mg/L+6-BA1.00mg/L,对叶柄的诱导效果最好的培养基是MS+NAA1.00mg/L+2,4-D0.10mg/L+6-BA0.10mg/L;分化培养基以MS+NAA0.20 mg/L+6-BA1.00mg/L较适宜,生根培养基以1/2MS0+NAA1.00mg/L较适宜.     

红花草莓的组织培养与快繁技术研究

以红花草莓叶片为外植体,通过筛选诱导愈伤组织、不定芽及壮苗、生根的培养基,建立一套实用且易推广的红花草莓组培快繁技术体系。结果表明:在愈伤组织的诱导过程中TDZ的诱导效果优于6-BA,TDZ与NAA配合使用效果优于与IBA的组合。6-BA浓度为0.5 mg·L~(-1)时不定芽诱导率高达86.6%。低浓度的6-BA和8 g·L~(-1)的琼脂更有利于壮苗培养,NAA比IBA更有利诱导生根。综上述,最适红花草莓愈伤组织的诱导培养基为MS+1.0 mg·L~(-1)TDZ+0.5 mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+7 g·L~(-1)琼脂;最适不定芽分化的培养基为MS+0.5 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+7 g·L~(-1)琼脂;最适壮苗培养基为MS+0.1 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+8g·L~(-1)琼脂;最适生根培养基为MS+0.5mg·L~(-1)NAA+30 g·L~(-1)蔗糖+8 g·L~(-1)琼脂。试管苗移栽生长20 d后,成活率高达93%,且后期草莓苗生长壮健。此体系的建立为优质红花草莓种苗大规模生产提供了科学依据和技术支持。     

褐纹报春苣苔组织培养与快速繁殖

褐纹报春苣苔(Primulina glandaceistriata)是一种极具观赏价值的喀斯特地区野生花卉,目前尚未有褐纹报春苣苔组培快繁的研究报道。该研究以褐纹报春苣苔的叶片为外植体,通过两种途径建立其组培快繁体系。结果表明:适宜的不定芽诱导培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10 mg·L~(-1),适宜的不定芽增殖培养基为MS+ZT 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10 mg·L~(-1)+活性炭0.05 g·L~(-1),增殖系数为11.09;适宜的愈伤组织诱导培养基为MS+TDZ 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10 mg·L~(-1),适宜的愈伤组织分化培养基为MS+ZT 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.10mg·L~(-1),分化系数为12.46;适宜的生根培养基为1/2MS+IBA 0.1 mg·L~(-1)+活性炭0.05 g·L~(-1)或1/2MS+IBA0.5 mg·L~(-1)+活性炭0.05 g·L~(-1),生根率为100%。该研究结果成功建立了褐纹报春苣苔的组培快繁体系,为今后褐纹报春苣苔的种苗繁殖和遗传转化提供了技术支持。     

马蔺幼胚高效再生体系的建立

以马蔺(Iris lacteal var. chinensis)幼胚为外植体,探究不同时期幼胚及不同植物生长调节剂对愈伤组织、体胚和不定芽诱导的影响。结果表明：在本试验条件下最佳取材时间为授粉后35～45 d,此时,幼胚发育完全但胚乳尚未完全硬化,幼胚剥取容易;愈伤组织最适诱导培养基为MS+1.0 mg·L^-1 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+0.2 mg·L^-1 6-苄氨基嘌呤(6-BA),诱导率为83.33%;最适体胚诱导培养基为MS+0.25 mg·L^-1 2,4-D+0.05 mg·L^-16-BA,诱导率71.67%;最佳不定芽诱导和增殖培养基为MS+1.0 mg·L^-1噻苯隆(TDZ)+0.2 mg·L^-1萘乙酸(NAA),诱导率为78.33%,增殖系数为3.65;在添加0.1 mg·L^-1 NAA的MS培养基上诱导生根,4周后的生根率达95%以上;生根培养4周的植株清洗掉根部培养基后,移栽至经高温消毒的蛭石中培养,成活...     

青海野生黑果枸杞再生体系的建立及遗传稳定性分析

以野生黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)的无菌苗叶片作为外植体,建立了两条再生体系:一条是经愈伤组织再分化的间接再生体系,一条是不经愈伤组织再分化的直接再生体系。并采用流式细胞术(FCM)及ISSR分子标记技术对两种途径再生苗进行了遗传稳定性分析。结果表明:(1)最佳愈伤组织诱导培养基为MS+1.5 mg·L-12,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D),诱导率达100%;最佳分化培养基为MS+1.5 mg·L-16-苄氨基腺嘌呤(6-BA)+0.1 mg·L-1吲哚-3-丁酸(IBA),1 g愈伤组织上的平均不定芽数为39.4个。(2)叶片直接诱导不定芽的最佳培养基为MS+0.5 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1α-萘乙酸(NAA),不定芽诱导率为92.9%,每个外植体上平均不定芽数为18.1个。(3)两条途径再生的不定芽在不含植物生长调节剂的MS培养基上,2周内均可正常生根。(4)FCM结果显示亲本苗及2种再生苗均为二倍体。(5)ISSR分析表明,间接再生苗的平均遗传相似性系数为0.84,直接再生苗的平均遗传相似性系数为0.91,直接再生体系是一种更加快速高效的繁殖方法。     

沙拐枣的组织培养

1 植物名称沙拐枣(Calligonum mongolicwn Turvz.). 2 材料类别由种子获得的小苗茎段. 3 培养条件愈伤组织诱导培养基:(1)MS+6-BA0.05 mg·L-1(单位下同)+IAA 0.01;愈伤组织增殖培养基:(2)MS+6-BA 0.4;愈伤组织分化培养基:(3)MS+6-BA 0.4+2,4-D 0.5;继代培养基:(4)MS+IAA 0.1+6-BA 0.05;生根培养基:(5)MS+IAA 0.1.     

向日葵离体再生体系的建立

为了建立高效的向日葵离体再生体系,从基因差异、外植体取材、生长素和细胞分裂素浓度、附加物的添加等方面出发,对向日葵愈伤诱导、分化、生根等过程进行了系统优化。结果表明：杂交材料相对于自交材料更容易实现再生;最佳外植体是生长4 d的子叶;最佳愈伤诱导培养基是MS培养基 (MS) +2.0 mg/L 6-苄基腺嘌呤 (6-BA)+0.5 mg/L奈乙酸 (NAA)+1.0 mg/L激动素 (KT),诱导率最高可达100％;最佳分化培养基是MS+0.2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.3 mg/L KT+0.3 mg/L硝酸银 (AgNO3)+0.2 g/L活性炭 (AC),芽分化率可达71％;最佳生根培养基是1/2 MS+0.6 mg/L吲哆丁酸 (IBA),生根率最高为77％。方差分析表明,材料基因型、外植体生长时间、激素、AgNO3、AC对向日葵再生呈现显著性影响。     

水杉组织培养研究

以水杉的带腋芽茎段和茎尖为外植体进行植物组织培养,探究外植体形成无菌苗体系的过程最佳激素配比及影响因素。在MS基本培养基中添加不同激素,制备不同培养配方,筛选水杉愈伤组织诱导与分化的最适培养基配方。诱导愈伤组织形成的最佳培养基配方为MS+2,4-D (2.0 mg/L)+NAA (3.0 mg/L)+6-BA (1.5 mg/L);适宜再分化的最佳培养基为MS+NAA (0.2 mg/L)+6-BA (1.5 mg/L);最佳生根培养基组合为1/2MS+NAA (3.0 mg/L)+IBA(0.1 mg/L),生根率为18.8%以上,培养15 d后平均根数可达到45条,平均根长达2.56 cm。