大鼠再生肝抗CCl4损伤与其线粒体呼吸活性变化的关系

本工作观察了肝部分切除(68%)后96h 大鼠再生肝的抗 CCl_4损伤作用,并用氧电极法测定了再生肝线粒体的呼吸活性。结果如下: (1)CCl_4(50%,10ml/kg)引起的动物死亡率,肝切除组大鼠较假手术组明显降低;(2)CCl_4(50%,5 ml/kg)损伤后,肝切除组大鼠血清胆红素、血清谷丙转氨酶(sGPT)均明显低于假手术组,组织学检查损伤程度也明显减轻;(3)无论是否伴有 CCI_1损伤,肝切除组大鼠肝线粒体的呼吸活性均强于假手术组,且肝线粒体呼吸活性的变化与血清胆红素、sGPT 及肝组织损伤程度的改善是一致的。上述结果提示:再生肝线粒体呼吸活性增高,同时不易受 CCl_4损伤,可能在再生肝抗 CCl_4损伤机制中起一定作用。     

小鼠肝再生过程中ROS及线粒体代谢变化规律的研究

目的:肝脏是维持人体发挥功能的重要器官,同时肝脏再生能力十分强大。本文通过部分肝切除术后小鼠肝再生模型,观察肝再生过程中氧化应激及线粒体代谢变化规律,以期为将来的调控肝再生提供新的干预靶点。方法:选择雄性健康体重均匀的Balb/c小鼠,采用经典70%肝切除模型,随机分为假手术对照组(Sham组)以及70%肝切除组(70%PH组)。肝切除术后6 h、1d、2 d、3 d、5 d、7 d不同时间点取肝组织,制备冰冻切片检测活性氧(ROS)水平,Western blot分别检测细胞增殖相关蛋白PCNA、Cyclin D1;氧化应激相关蛋白SOD1、SOD2、CAT、GPX1;以及线粒体代谢相关蛋白PGC-1α、Nrf1、TFAM、Drp1、Fis1、Mfn1、Mfn2、OPA1的表达并分析其变化规律。结果:70%肝切除术后小鼠肝脏增长迅速,细胞增殖关键蛋白PCNA和Cyclin D1表达显著增加;在此过程中细胞ROS水平呈现先升高后降低的变化,细胞主要抗氧化酶SOD1、SOD2、CAT、Gpx1与ROS相一致出现先升高后降低的变化。线粒体生物合成调控因子PGC-1α、Nrf1、TFAM呈现先降低后升高的趋势,而线粒体分裂蛋白Drp1和Fis1呈现先降低后显著升高的趋势,线粒体融合相关蛋白Mfn1、Mfn2和OPA1总体为先降低后恢复至正常水平。结论:在小鼠70%肝切除再生过程中,存在着明显的氧化应激,线粒体生物合成增加,线粒体分裂/融合平衡偏向分裂,并且这些变化呈现具有一定的时间变化规律,这些变化及规律很可能作为将来调控肝再生的重要的潜在干预靶点。     

激素型肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组与能量代谢相关性

应用凝胶内差异显示电泳技术研究肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组,并从肝线粒体蛋白质组角度阐述肾阳虚与能量代谢的关系.8个分别来自于肾阳虚大鼠和正常大鼠的肝线粒体蛋白质样品(各4个)分别用荧光染料Cy3、Cy5标记,以及8个样品等量混合物用Cy2标记作为内标,每一Cy3、Cy5标记样品与Cy2标记的内标等量混合后在同一胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder软件结合内标分析,以肾阳虚组动物与正常组动物肝线粒体蛋白质相差1.2倍以上的蛋白作为差异蛋白,实验共获得16个差异蛋白质,经质谱测定和与蛋白质文库比对,鉴定11个蛋白质.其中,肾阳虚动物热休克蛋白60和70、肌氨酸脱氢酶、氨甲酰磷酸合成酶、亚硫酸盐氧化酶、ATP合酶、醛脱氢酶和NADH脱氢酶表达量增加,而丙酮酸脱氢酶、α酮戊二酸脱氢酶、脂酰辅酶A脱氢酶和鸟氨酸氨基转移酶表达量降低.实验表明,肾阳虚动物能量代谢相关酶的变化与肾阳虚的临床虚寒症状有关.     

线粒体蛋白质组及蛋白质量控制

线粒体是哺乳动物细胞内重要细胞器,不仅通过氧化磷酸化产生ATP为细胞提供能量,也参与调节钙离子稳态、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生、细胞应激反应和细胞死亡等过程,其功能障碍不仅导致多种人类疾病的发生,而且也能降低动物卵母细胞质量和早期胚胎发育能力.大量证据表明,线粒体的功能依赖于...     

肝再生增强因子研究进展

肝再生增强因子是新近克隆的蛋白质因子,能特异地刺激肝源细胞的增殖,并对ＣＣl4所引起的急性肝衰竭有效治作用。本文综述了肝再生增强因子的发现、基因克隆及组织分布等。目前已开始了该因子的基因工程产品研制,它有望成为一种治疗肝病的新药。     

用量热法研究水稻线粒体不同条件下的能量释放

用精密微热量计（ＬＫＢ－２２７７生物活性检测系统）和差示扫描量热仪分别测定了广丛４１Ｂ水稻线粒体体外能量释放热谱和ＤＳＣ曲线。探讨了它在恒温和变温条件下能量释放的规律和特性,建立了广丛４１Ｂ水稻线粒体在不同条件下能量释放的动力学模型,计算了它在能量释放过程中的动力学模型,计算了它在能量释放过程中的热力学和动力学参数,并比较了它们之间的差异。结果表明,温度愈低,线粒体能量释放速率愈慢。线粒体在零上低     

大鼠肝再生过程中肝再生刺激物及其mRNA的动态变化

本实验先制备大鼠肝再生模型,在该模型中大鼠成活率达９５％以上,肝再生情况良好,适合于进行下一步的研究。随后,通过耐热性和肝细胞特异性的检测,初步认为从该模型中所提取的活性成分即为肝再生刺激物（ＨＳＳ）。用３Ｈ胸腺嘧啶核苷测定ＨＳＳ及其ｍＲＮＡ体外翻译产物的生物活性,结果表明二者在肝再生过程中均存在动态变化,但前者在肝部分（２／３）切除后７２ｈ活性最高,后者则在２４ｈ达高峰。这一结果为后续的分子克隆工作奠定了基础。     

肝大部切除后肝再生调节的研究

肝再生调节因子主要有促使肝细胞增殖的刺激因子和抑制因子两大类。前者如ＥＧＦ、ＩＧＦ－α、ＨＳＳ、ＨＰＴＢ、ＨＰＴＡ／ＨＧＦ等,它们是肝细胞增殖的完全促分裂原;后者主要有肝抑素、ＴＧＦ－β等,它们对肝细胞增殖具有负性调节作用。本实验室已提取纯化了大鼠肝抑素并证明了它的生物效应。肝大部切除后的动物在上述两类因子的调控下,肝细胞增殖迅速而有规律,肝再生完成后肝细胞增殖趋于停止。     

CCL2促进肝再生中细胞外基质的形成

为阐明CC趋化因子配体2〔chemokine(C-C motif)ligand 2,CCL2〕对肝再生(liverregeneration,LR)的影响,构建CCL2的表达载体CCL2-N1及其干涉载体CCL2(255).为确定合适的转基因时间,观测内外源性CCL2的表达高峰.Rat Genome 230 2.0芯片、实时定量PCR和Western印迹显示,内源性CCL2的表达高峰在部分肝切除(partial hepatectomy,PH)后72 h.与CCL2融合表达的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达和实时定量PCR显示,外源性CCL2的表达高峰在转基因后的24 h.所以,为使内源性和外源性CCL2的作用叠加,选择PH后48 h进行转基因.此时将CCL2-N1质粒转入大鼠体内,发现转基因后大鼠肝系数、增殖细胞核抗原(PCNA)表达量显著高于对照,透明质酸和层粘连蛋白含量显著升高.相反,干涉质粒CCL2(255)能降低肝系数,减少PCNA表达量,并且Ⅲ型前胶原肽、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白含量与对照相比,有显著或极显著降低.综上所述,CCL2是肝再生相关基因,它能提高肝系数,可能通过调节细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成而促进肝脏再生.     

大鼠肝再生过程中肝细胞质膜微区差异蛋白质鉴定与分析

动物肝是具有极强再生能力的器官,研究并阐明肝再生的机制可为肝移植等与肝损伤相关的疾病治疗提供理论依据.质膜包括“脂筏(lipid rafts)”和“质膜微囊(caveolae)”的微区,具有参与胞吞胞饮、信号转导、运输胆固醇等重要功能.肝再生过程中,肝质膜微区脂筏蛋白质受到内部调控的影响会发生改变. 捕获脂筏微区信号蛋白分布的变化,对于理解和阐明肝再生过程中信号通路途径有重要意义.本研究应用成熟的大鼠2/3肝切除模型结合蔗糖密度梯度离心法,提取假手术组与肝再生组大鼠肝细胞质膜,并进一步纯化获得质膜微区蛋白质.通过SDS-PAGE分离以及ESI-Q-TOF质谱鉴定,对获得的质膜微区蛋白质进行差异分析. 结果显示,有30个微区蛋白质差异表达,其中13个上调、17个下调.生物信息学分析表明,所鉴定到的蛋白质主要参与细胞增殖、程序性死亡、细胞凋亡等调控,同时涉及到与肝再生密切相关的血管生成等信号通路.本文为质膜微区蛋白质的研究提供了方法上的参考以及相关基础数据,为后续临床肝再生的研究奠定了一定的基础.     

Proteins of Mitochondrial Synthesis

Proteins synthesized in vitro by mitochondria isolated from 48-h germinating seeds of Vigna sinensis (L.) Savi and incubated in the presence of ¹⁴C-labelled amino acids from Chlorella protein hydrolysate, have been found associated with nine products separable by acrylamide gel electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulphate. Cytoplasmic contribution to these products was practically eliminated by the use of cycloheximide. Most of the radioactivity was incorporated into proteins having molecular weights between 10,000 and 65,000 as determined by comparing their electrophoretic mobilities with those of standard, reference proteins.     

线粒体蛋白质的转运

线粒体含有约1000种蛋白质,其中99%由细胞核DNA编码,在细胞质核糖体上合成后被分别转运至线粒体的内膜或外膜上、基质或膜间隙中。由众多分子机器组成的线粒体蛋白质转运系统参与了该生物学过程的执行。线粒体DNA编码的13种蛋白质也由该系统转运至线粒体内膜。本文就线粒体蛋白质转运系统中线粒体前体蛋白质的定位分选信号、转运复合物和转运途径作简要介绍。     

Mitochondrial Proton Leak and the Uncoupling Proteins

An energetically significant leak of protons occurs across the mitochondrial inner membranesof eukaryotic cells. This seemingly wasteful proton leak accounts for at least 20% of thestandard metabolic rate of a rat. There is evidence that it makes a similar contribution tostandard metabolic rate in a lizard. Proton conductance of the mitochondrial inner membranecan be considered as having two components: a basal component present in all mitochondria,and an augmentative component, which may occur in tissues of mammals and perhaps ofsome other animals. The uncoupling protein of brown adipose tissue, UCP1, is a clear exampleof such an augmentative component. The newly discovered UCP1 homologs, UCP2, UCP3,and brain mitochondrial carrier protein 1 (BMCP1) may participate in the augmentativecomponent of proton leak. However, they do not appear to catalyze the basal leak, as this isobserved in mitochondria from cells which apparently lack these proteins. Whereas UCP1plays an important role in thermogenesis, the evidence that UCP2 and UCP3 do likewiseremains equivocal.     

细胞因子与肝脏再生

肝脏再生是肝在受到损伤时产生的重要反应,该从细胞因子的角度,阐述了细胞因子和肝脏再生之间的关系。     

ALR and Liver Regeneration

Liver possesses the capacity to restore its tissue mass and attain optimal volume in response to physical, infectious and toxic injury. The extraordinary ability of liver to regenerate is the effect of cross-talk between growth factors, cytokines, matrix components and many other factors. In this review we present recent findings and existing information about mechanisms that regulate liver growth, paying attention to augmenter of liver regeneration.     

Release from Endoplasmic Reticulum Matrix Proteins Controls Cell Surface Transport of MHC Class I Molecules

The anterograde transport of secretory proteins from the endoplasmic reticulum (ER) to the plasma membrane is a multi‐step process. Secretory proteins differ greatly in their transport rates to the cell surface, but the contribution of each individual step to this difference is poorly understood. Transport rates may be determined by protein folding, chaperone association in the ER, access to ER exit sites (ERES) and retrieval from the ER‐Golgi intermediate compartment or the cis‐Golgi to the ER. We have used a combination of folding and trafficking assays to identify the differential step in the cell surface transport of two natural allotypes of the murine major histocompatibility complex (MHC) class I peptide receptor, H‐2D^b and H‐2K^b. We find that a novel pre‐ER exit process that acts on the folded lumenal part of MHC class I molecules and that drastically limits their access to ERES accounts for the transport difference of the two allotypes. Our observations support a model in which the cell surface transport of MHC class I molecules and other type I transmembrane proteins is governed by the affinity of all their folding and maturation states to the proteins of the ER matrix.      

肝再生增强因子

肝脏是机体具有强大再生能力的脏器 ,目前已知的肝再生相关因子如肝细胞生长因子 (ＨＧＦ)、转化生长因子 α(ＴＧＦ α)、表皮生长因子 (ＥＧＦ)等 ,均难以解释具有器官特异性的肝再生调控机制 ,因此寻找新型肝再生调控因子一直是该领域的热点[1] 。1994年 8月 ,Ｈａｇｉｙａ等[2 ] 从初断乳大鼠肝组织中克隆到一种新型的促肝细胞增殖因子 ,称为肝再生增强因子 (ａｕｇｍｅｎｔｅｒｏｆｌｉｖｅｒｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ,ＡＬＲ)。近来研究发现 ,ＡＬＲ是一种特殊的促肝细胞分裂原 ,在肝损伤修复过程中发挥重要作用。1.ＡＬＲ基因大鼠…