紫杉醇产生菌HQD33的鉴定

通过对紫杉醇产生菌HQD33的群体形态和菌丝、分生孢子梗、产孢细胞、分生孢子等个体形态的研究,确定了HQD33的分类地位,为树状多节孢.     

紫杉醇产生菌分离的研究

报道了1993年从东北红豆杉树(Taxuscuspidata Sieb.et     

紫杉醇产生菌及其工程菌株之间的AFLP遗传差异分析

采用AFLP技术对三株紫杉醇产生菌(HQD33、HQD43、HQD54)及HQD33菌株经复合诱变后再经原生质体诱变得到的两株诱变株UL50-6和UV40-19及其融合菌株J1-3进行了分析,结果表明三株紫杉醇产生菌分属不同的种属,同时首次从分子水平上证实Z35-8,J1-3为两株不同的融合子,为下一步的基因工程育种工作中的基因定位和分子克隆提供丰富可靠的分子标记。     

紫杉醇及其产生菌的研究现状与展望

紫杉醇 (Paclitaxel,商品名Taxol)是一种二萜类衍生物 ,是当前公认的广谱、活性强的抗癌药物之一。1　紫杉醇的发现紫杉醇最早是于 1 971年 ,Wani等[1] 从短枝红豆杉 (Taxusbreviifolia)的树皮中分离得到 ,命名为紫杉醇。随后 ,Schiff等[2 ] 证实紫杉醇具有独特的抗癌机制 ,它作用于细胞微管 (Microtuble) ,通过与微管蛋白N端第 31位氨基酸和第 2 1 7～ 2 31位氨基酸结合 ,诱导和稳定微管蛋白聚合 ,抑制其解聚 ,增加聚合程度 ,使维管束不能与微管组织中心相互连接 ,将细胞周期阻断于G2 M期 ,导致有丝分裂异常或停止 ,阻止癌细胞增殖[3,…     

紫杉醇产生菌的细胞总核酸提取

树状多节孢（Nodulisporium sylviforme)为中国新记录属种,首次发现它可产生特效抗癌药物紫杉醇,国内外尚未见其DNA提取等方面的研究报道。为了获得高质量的DNA,利用单因素试验对其细胞总核酸的提取方法进行了探索。找到了一套适合紫杉醇产生菌DNA的提取较为简便易行可靠的方法。用此法直接从紫杉醇产生菌中提取DNA,并将所提取DNA进行随机引物扩增（RAPD）,得到了较清晰的扩增图谱。     

南方红豆杉组织培养及紫杉醇的产生

南方红豆杉茎段愈伤组织在不同基本培养基及激素组合的培养基上,其平均鲜重生物量具显著差异,而干重生物量无差异。适宜浓度的ＮＡＡ可以取代常用的、但致癌活的２,４－Ｄ。     

RAPD技术应用于紫杉醇产生菌的分类鉴定

紫杉醇是一种用于癌症治疗的特效药物,微生物发酵法是生产紫杉醇的有效方法,采用RAPD技术对4株紫杉醇产生菌的遗传差异进行分析,重新从分子水平对其进行了进一步的分类鉴定;并将为下一步的基因工程育种工作中的基因定位和分子克隆提供丰富可靠的分子标记。     

脱落酸产生菌的遗传育种

从南京蔬菜研究所植物致病株中分离到３株脱落酸（ＡＢＡ）产量较高菌株,经初步鉴定均为灰葡萄孢。分别命名为Ａ２３,Ａ１０１,Ａ１６０。通过紫外诱变及菌株生长状况比较,选出一株菌Ａ１０１作为出发菌,经紫外,硫酸二乙酯多次诱变,在ＡＢＡ合成代谢关键酶抑制剂平板上定向选育出一株ＡＢＡ高产菌ＵＵＤ－１,该菌固体发酵可产生ＡＢＡ３７４μｇ／ｍｌ,是出发菌株产量的１４倍,且其产量连续培养５代稳定。     

南方红豆杉产紫杉醇内生真菌的分离

对从广东乳源县的南方红豆杉(Taxus chinensis var. mairei)内生真菌中分离和筛选产紫杉醇的内生真菌进行了研究。从南方红豆杉的树皮、茎部、叶片及叶片研磨物中分离纯化了145株内生真菌,对其中的53株内生真菌采用摇瓶发酵培养的方法筛选产紫杉醇的内生真菌。发酵物和菌丝体经研磨、离心、乙酸乙酯萃取和浓缩,经硅胶薄层层析(TLC),高效液相色谱(HPLC)以及液相色谱-质谱(HPLC-MS)分析和检测,结果表明,从茎部分离的1株内生真菌能够产紫杉醇或其异构体, 产量达180 μg L^-1。通过对产紫杉醇内生真菌进行诱变、筛选以及优化培养条件等措施,大规模培养生产紫杉醇是具有可行性的。     

培养基组成对树状多节孢(Nodulisporium sylviforme)紫杉醇产量的影响

采用正交试验法 ,研究了醋酸钠、苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸对紫杉醇产生菌HQD3 3 产生紫杉醇的影响。结果表明 ,它们之间的协同作用对提高紫杉醇产量有显著影响。在改良的S - 7培养基基础上 ,再加入醋酸钠 1 0g/L、苯丙氨酸 5 0mg/L、酪氨酸 1 5mg/L、亮氨酸 6 0mg/L ,可以使紫杉醇产生菌HQD3 3 产生紫杉醇产量提高到 2 0 3 6 5 6 μg/L。     

产紫杉醇(Taxol)内生真菌的生物多样性

主要阐述了产紫杉醇内生真菌的分离和生物多样性的研究状况 ,紫杉醇产生菌的生物多样性意义及微生物发酵法生产紫杉醇的研究进展 ,并结合内生真菌的特点 ,阐述了紫杉醇产生菌的宿主、生境和生态以及物种的生物多样性     

一株产没食子酸的茶条槭内生真菌的分离鉴定

从采自黑龙江省植物园的茶条槭(Acer ginnala Maxim.)的种子和枝条中分离内生真菌,用形态学和分子生物学方法鉴定分离菌株,应用高效液相色谱法检测内生真菌中没食子酸含量。结果从分离得到的链格孢属(Alternaria)菌株中选出没食子酸含量为9.52mg/g的高产菌株CP11。     

苹果斑点落叶病致病菌的鉴定及生物学特性研究

目的:明确l株分离于感病苹果株系群体的供试菌株AML0801的种类,探讨其生物学特性,为苹果抗病分子育种研究奠定基础.方法:通过形态特征描述,显微形态、超微结构观察等方法,从形态学上明确AML0801的分类.室内模拟侵染试验,了解AML0801致病性.ITS序列测定分析辅助验证供试菌株AML0801.结果:菌株AML0801的分生孢子、产孢表型等形态特征,符合苹果链格孢(Alternaria mali Roberts,A.mali)种的描述,ITS序列分析表明,AML0801与A.mali标准菌株同源性达99％.通过比较病原菌侵染试验证实AML0801具备一定的致病性.结论:结合供试菌株AML0801形态特征、ITS序列分析结果,以及室内模拟的致病性研究,可将供试菌株AML0801鉴定为苹果链格孢(A.mali).     

1株产紫杉醇内生真菌LNUF014的鉴定及产物检测

从红豆杉的韧皮部组织中分离得到的360株内生真菌中,通过对发酵粗提的检测,共筛选到11株产紫杉醇的真菌。其中1株内生真菌LNUF014的发酵液采用有机试剂抽提紫杉醇,经薄层层析和高效液相色谱分析,初步表明该菌株的紫杉醇类物质含量为53.68μg/L。根据形态学研究和真核生物18S rDNA基因序列分析,将其鉴定为镰刀菌属(Fusarium)。产紫杉醇内生真菌的研究将对紫杉醇类抗肿瘤药物的研制具有重要意义。     

Adenylate cyclase from the phytopathogenic fungus Alternaria solani

Abstract Adenylate cyclase activity of Alternaria solani bound to the particulate cell fraction was solubilized by 2.5% Ficoll. The apparent K _m of the solubilized enzyme for adenosine 5'-triphosphate was 2.5 mM, and it required Mn²⁺ for maximum activity. M _r as determined by gel filtration was approximately 500. Fluoride ions at millimolar concentrations, GTP, adenosine, and N⁶-phenylisopropyl adenosine at micromolar concentrations did not stimulate adenylate cyclase activity. The enzyme was inhibited 25–55% by millimolar concentrations of 2'-deoxyadenosine, 2'-0 methyl adenosine, 9-β- d -arabinofuranosyl adenosine and 2'-3'-isopropylidene adenosine. Partially purified enzyme obtained after DEAE-BioGel chromatography was very unstable. The amount of extractable enzyme activity varied during the fungal growth cycle.     

滇牡丹内生真菌Alternaria sp.PR-14的代谢产物研究

从滇牡丹内生真菌交链孢霉属(Alternaria sp.)菌株PR-14的发酵液提取物中分离得到6个化合物,通过波谱技术分别鉴定为交链孢酚(1)、djalonensone(2)、脑苷酯B(3)、脑苷酯C(4)、(2S,3S,4R,2’R)-2-(2’-hydroxytetracosanoylamino)octadecane-1,3,4-triol(5)和甘露糖醇(6),以上化合物均为首次从滇牡丹内生真菌中分离得到。     

In VivoAddition of Telomeric Repeats to Foreign DNA Generates Extrachromosomal DNAs in the Taxol-Producing FungusPestalotiopsis microspora

Transformation of the taxol-producing filamentous fungusPestalotiopsis microsporawith a plasmid containing the bacterial hygromycin resistance gene fused toAspergillusregulatory sequences resulted in thein vivoformation of extrachromosomal DNAs with telomeric repeats in the majority of transformants. Repeats of the telomeric sequence 5′-TTAGGG-3′ were appended to nontelomeric transforming DNA termini. No fungal sequences other than telomeric repeats were detected in extrachromosomal DNAs. Transformants contained three to six different sizes or conformational forms of extrachromosomal DNAs. The DNAs showed no change in size or internal structure during 6 months of growth with selection, but were lost after 20 days of growth without selection. Transformation of wild-typeP. microsporawith a PCR-amplified extrachromosomal DNA having terminal telomeric repeats produced up to 50-fold more transformants than the original transformation vector. The addition of telomeric repeats to foreign DNA is unusual among fungi and may have important adaptive or developmental implications.     

产紫杉醇内生真菌EFY-21的鉴定与生物学特性研究

利用PCR技术克隆了产紫杉醇内生真菌EFY-21的18S rDNA序列,通过同源性分析,初步确定该菌与拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)有较高的同源性,相似性为99%。为了进一步了解EFY-21的有关生物学特性,分别选用PDA、PSA、查氏、玉米粉琼胶、牛肉膏蛋白胨5种培养基,按照常规方法培养,用十字法测量菌落直径;同时选用查氏培养基为基本培养基,分别观察不同碳源葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、果糖、可溶性淀粉,不同氮源KNO3、Ca(N03)2、(NH4)2SO4、NH4N03、(NH4)2HPO4、蛋白胨、尿素,不同培养温度10,15,20,25,28,30,37℃,不同pH值4,5,6,7,8,9对内生真菌菌丝的影响。试验结果表明:EFY-21在PDA培养基上生长最快,生长状况最好;供试的碳氮源中,对EFY-21菌丝生长影响的大小顺序为葡萄糖甘露醇果糖麦芽糖可溶性淀粉;蛋白胨KNO3Ca(N03)2NH4N03(NH4)2HPO4(NH4)2SO4尿素;最适培养温度为25～30℃;最适pH为5～7。     

一株产色素真菌的形态及分子鉴定

从云南高原地区的竹叶病理组织上分离到1株可产生红棕色素的丝状真菌ZL07-8。通过对分生孢子梗、分生孢子、喙等的形态学研究及对ITS和5.8S rRNA序列的分子系统学分析,发现此菌为链格孢属小孢子种群成员。然而该菌具有区别于已知种的特征,如分生孢子梗常单生,少数成簇,无分枝;分生孢子大多单生,较少链生,孢身较大;寄主为华西箭竹,故立为竹链格孢新种。干制培养物ZL07-8D保藏于山东理工大学生命科学学院实验室。     

大花金挖耳内生真菌H-18菌株的鉴定及其抑菌活性研究

对大花金挖耳内生真菌H-18菌株的菌丝提取物进行了抑菌活性研究并对菌株进行了鉴定.离体试验结果表明,H-18菌株菌丝体丙酮提取物在500mg/L浓度下对玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌和辣椒疫霉病菌的菌丝生长抑制率均大于80%;组织法和盆栽试验结果表明,H-18菌株菌丝体丙酮提取物在2000mg/L浓度下对番茄灰霉病和辣椒疫霉病的保护效果和治疗效果均在50%以上.结合形态分类学和ITS-5.8S rDNA序列分析结果鉴定菌株H-18为同色镰孢菌(Fusarium concolor).