家兔胚泡ICM在体外培养系统中的行为

一、用显微外科方法从兔早期胚泡分离来的ＩＣＭ在所用的体外培养系统中的行为,因ＩＣＭ的生长状态而不同。呈带状生长的ＩＣＭ从近端向远处延伸,而细胞的分化则从远端逐渐向近端进行,它具有明显的极性。细胞的分化秩序井然,层次分明。因此呈状生长的ＩＣＭ适艇于进行细胞分化和细胞谱系的研究。二、呈团块状生长的ＩＣＭ,没有明显的极性,细胞分化开始于团块的外表面,逐渐向中央进行,分化开始稍晚一些,速度也较慢,这种生长     

慈姑根尖细胞微管骨架的免疫荧光观察

分别用考马斯亮蓝染色和间接免疫荧光标记,并运用荧光倒置显微镜和激光共聚焦显微镜,对慈姑根尖固定后酶解获得的去壁细胞和细胞团块以及根尖细胞分裂周期中微管骨架列阵进行详细观察,以探索高等植物微管周期的普遍性。结果表明:慈姑根尖固定后酶解可获得大量结构完整的去壁细胞与细胞团块;考马斯亮蓝染色观察可见,慈姑根尖细胞中丰富的蛋白物质以及处于不同分裂期的细胞核染色体;免疫荧光观察可见,慈姑根尖细胞周期中微管骨架保存较好,主要有周质微管、早前期带微管、纺缍体微管和成膜体微管4种循序变化的排列方式,构成了高等水生植物分裂细胞中典型的微管周期。实验结果证明,高等水生植物与陆生植物微管周期具有相似性,为植物微管周期概念提供了新的实例。     

红豆杉悬浮细胞放大培养的细胞生长与紫杉醇合成动力学

研究了在Murashige&skoog s(MS)和 6 2号两种不同的培养基中 ,红豆杉细胞悬浮细胞从摇瓶到 1 0L机械通气搅拌式反应器放大培养过程中细胞生长与紫杉醇合成动力学 .结果表明 :尽管在不同的培养条件下 ,细胞生长曲线均呈现“S”型 .紫杉醇在延迟期与指数生长期中基本上没有积累 ,而且随着培养规模的增大 ,紫杉醇的含量逐渐降低 .进一步对各级放大培养的细胞生长 ,比生长率与胞内外紫杉醇合成量进行分析 ,发现MS利于细胞生长但不利于紫杉醇合成 ,而 6 2号则相反 .根据此文的结果 ,提出了红豆杉细胞培养条件的优化和大规模细胞培养生产紫杉醇应采取的策略     

红豆草根瘤侵染细胞核在细胞凋亡中的超微结构变化

用透射电镜观察红豆草根瘤侵染细胞核在细胞凋亡过程中的超微结构,以探讨红豆草根瘤侵染细胞核在发育过程中的超微结构变化及其与细胞凋亡的关系.结果表明,红豆草根瘤侵染细胞核的超微结构随细胞发育程度不同而不同.在幼龄侵染细胞中,细胞核体积较大,近似圆形.在即将成熟和成熟的侵染细胞中,细胞核膜有内陷现象,其核仁常具有核仁泡和核仁联合体.在早期凋亡的侵染细胞中,细胞核体积减小,形状变得不规则,核膜出现大量内陷,在其表面形成许多大的突起和深的沟槽,有时还有内质网、线粒体、小液泡和细菌等位于核膜的内陷处,而且核仁也开始裂解.在后期凋亡的侵染细胞中,除细菌解体外,还出现核仁消失,核膜破裂,核质外流,并在细胞质中形成一些电子密度很高,无一定形状的团块状物质.     

枸杞悬浮培养条件下的胚状体发生

在MS培养基上诱导宁夏枸杞下胚轴切段形成愈伤组织,并进行细胞悬浮培养。观察了悬浮培养条件下胚状体的发生过程。<1>观察发现,细胞经悬浮培养几天以后,先形成胚性细胞团,再有胚性细胞团块形成一个或几个胚状体。较大的胚状体也可以形成新的次生胚状体。<1>影响胚状体形成的关键因素是激素的种类及其含量。实验采用的基本培养基为MS,比较适宜胚状体发生的激素是0.2mg/L 2,4-D。同样浓度的2,4-D,会抑制胚状体的进一步发育,用0.2mg/L6-BA代替2,4-D, 则胚状体可以进一步发育并形成小植株。     

植物细胞培养的生物反应器

本文介绍了植物细胞培养的特点及其生物反应器的设计原理,概述了植物细胞悬浮培养和固定化细胞系统中各类生物反应器的传氧、混合和流体力学特性与植物细胞生长和次生代谢物生产的关系。     

杂交瘤细胞的大量培养

杂交瘤细胞的大量培养是一项迅速发展的技术。本文评述了杂交瘤细胞培养条件和代谢调控方面的研究进展,包括反应器培养中的过程参数优化、细胞损伤和保护、营养物质利用和有害副产物的形成、细胞生长和单抗分泌的动力学以及长期培养的稳定性等问题。同时,本文也讨论了在生物反应器中培养杂交瘤细胞和操作模式和控制策略的研究工作,特别是近年来备受重视的灌注培养和补料培养。     

体外培养细胞的加力实验装置

机械力对细胞生物学行为的影响是目前细胞生物学和细胞力学研究的一个重要课题。体外分离细胞和加载培养技术是细胞力学的基础之一和目前细胞力学研究的重要方法。大致可分为离心力加载、流体加载、单细胞加载、压力传导加载和基底形变加载技术。     

抗凋亡策略在细胞大规模培养中的应用

随着阐明凋亡发生的分子机制,现在可运用多种方法阻止细胞凋亡的发生。在大规模细胞培养过程中应用这些方法可促进细胞的存活,实现细胞大规模高密度培养,从而提高细胞生产有价值生物技术产品的能力。     

豌豆根瘤侵染细胞衰老过程的电镜观察

用透射电镜观察了豌豆根瘤侵染细胞在衰老过程中的超微结构变化,结果表明,侵染细胞和拟菌体的衰老有一定的规律和特征,首先是一些包裹拟菌体的包囊变得疏松,包囊和拟菌体之间出现较大间隙,间隙中常有一些纤维状和泡状物质。然后,细胞质失去正常结构,逐渐凝聚为染色很深的团块,进而完全泡状化,伴随着拟菌体的衰老,寄主细胞质染色由深变浅,细胞器逐渐减少,最后,液泡和质膜相继破裂,细胞完全瓦解,有时在衰老细胞的胞间隙,或在衰老的细胞质中有一定年轻的细菌,甚至在一片崩溃的拟菌体中还有侵染丝,有的还正在向寄主细胞质释放细菌。     

用多孔微载体大规模培养rCHO细胞

多孔微载体是近年来发展起来的一种用于大规模高密度培养动物细胞的支持物,具有许多优点,如：容易固定细胞,适合于贴壁细胞和悬浮细胞的固定化连续灌流培养;细胞生长在载体内部,增加了细胞固定化的稳定性,可降低血清用量,适合长期培养;能保护细胞免受机械损伤,增加搅拌强度和通气量,强化反应器的传质;比表面积大,为细胞提供了充分的生长空间;细胞固定化过程简单无害,细胞能从长满细胞的微载体中自动转移到未长细胞的新载体中生长,接种方便,操作简单。特别适合于搅拌式、气升式、周定床和流化床等生物反应器的大规模培养〔1,2。尿激酶原(pro-UK)是一种重要的溶栓药物．与一般的生物医药制品相比,pro-UK给药量较大(约20mg／人～80mg／人),小规模生产不能满足市场需求。本文报道利用20L搅拌式反应器培养分泌pro-UK的重组CHO细胞的工艺条件,取得了初步结果。     

半夏细胞悬浮培养中生理生化指标的测定

目的：了解半夏细胞悬浮培养中生理生化指标的变化以及它们之间的关系。方法：以半夏幼嫩叶片和叶柄为材料,诱导和筛选愈伤组织,在光照和黑暗条件下进行细胞悬浮培养。每3d取样,冰浴匀浆,于4℃、10000g离心20min,取上清液进行测定。结果：光照条件利于半夏悬浮细胞的生长,其最佳收获期为24d,细胞的生长曲线呈“S”形;在不同的条件下,其培养液pH都呈先上升后下降趋势;培养细胞中可溶性蛋白质和过氧化物酶的活性均出现两个峰值,但出现的时间不同;MDA(丙二醛)的含量先升高后下降随后又上升。结论：光照有利于半夏细胞的生长并且蛋白质含量和酶活性呈正相关性,MDA含量和细胞的生长、分化呈负相关性。     

人毛乳头细胞组织化学研究

毛乳头细胞是一种高度特殊化的成纤维细胞。本文通过对体外培养的毛乳头细胞进行组织化学染色研究发现,它对阿新蓝、甲苯胺蓝和PAS染色均呈阳性,并对甲苯胺蓝显异染性．与原位时的细胞染色结果相同,表明在体外培养下．毛乳头细胞合成和分泌酸性、中性粘多糖的能力仍能维持较长时间;在细胞聚集区和多层化细胞团中有丰富的细胞外基质,阿新蓝和PAS染色呈强阳性,说明细胞外基质的存在与毛乳头细胞的聚集有很大关系;另外毛囊真皮鞘细胞对阿新蓝、甲苯胺蓝染色呈阳性反应．无甲苯胺蓝的异染性,PAS染色阴性,而真皮成纤维细胞这些染色均阴性,说明它与毛乳头细胞关系密切。     

家蚕原代细胞有丝分裂观察

在28℃,pH值6.4-6.8的条件下,用Grace培养基辅以20%的标准胎牛血清培养半消化法接种的家蚕晚期胚。原代培养细胞能够长期存活,观察到了家蚕原代培养过程中分化细胞的有丝分裂过程,发现了原代细胞分裂过程中赤道板的异常和染色体分离的异常现象;培养6个月和10个月的原代细胞分裂百分比分别为0.02±0.01和0.35±0.10,原代细胞异常的有丝分裂细胞百分比逐渐减少,分别为8.0±1.6和3.2±1.0。     

体外培养恶性滋养细胞P53蛋白表达与细胞生物学特性的研究

本文对23例恶性滋养细胞和19例正常早孕绒毛滋养细胞进行了原代培养。分别采用免疫组化、反转录PCR、放免法和酶联免疫吸附法,检测了体外培养滋养细胞P53蛋白和β-hCGmRNA的表达、β-hCG、hPL和IL-6含量的变化。体外培养的恶性滋养细胞中,细胞滋养细胞增生异常活跃,细胞核呈明显异型。恶性滋养细胞P53蛋白阳性表达,且阳性强度与正常早孕绒毛滋养细胞比较均有显著差异(P<0．01)。体外分泌β-hCG和IL-6的含量均显著高于正常滋养细胞(P<0．05)。P53蛋白的表达以及IL-6的分泌可能与恶性滋养细胞的异常增殖和低分化有关。     

低氧对NG108—15细胞生长及分化的影响

神经母细胞瘤和神经胶质瘤细胞融合的克隆细胞系ＮＧ１０８－１５细胞在含分化剂双于基环化单磷酸腺苷的培养液培养后分化,成为具神经细胞特征的细胞。本实验利用四唑盐微量比色法,并结合焦油紫染色,测定和观察细胞的生长及分化状况,研究了低氧（２％Ｏ２＋９３％Ｎ２＋５％ＣＯ２）对未分化的,分化中的和已分化完成的ＮＧ１０８－１５细胞的影响。获得的主要结果是：低氧明显降低未分化细胞增殖和存活率,使分化完成的影响大量     

大蒜细胞悬浮培养生产SOD的初步放大

研究了大蒜细胞在发酵罐培养过程中pH变化、细胞生长、SOD合成及培养基中各种基质的消耗规律。结果发现,大蒜细胞发酵罐中悬浮培养的pH变化趋势为先降后升,波动范围为4 25～5 37,获得最大生物量和SOD总酶活分别为16 3gDW/L和7 72×104U/L,相应为摇瓶培养的73 69%和71 35%。同摇瓶培养相比,发酵罐培养基中各种基质消耗出现滞后现象,且利用效率偏低。     

骨折愈合中骨再生的生物学和生物力学

一、骨再生的生物学1.骨骼的生长和发育骨骼的生长和发育涉及很多细胞和组织的分化和增殖,虽然其过程复杂,却精确有序。在胚胎发育阶段,长骨先形成一个间充质细胞团块,然后软骨化形成软骨基质。随着发育的渐进,软骨细胞肥大,细胞外基质开始矿化,形成初级骨化中心。软骨细胞通过     

人胎盘滋养层细胞培养与体外hCG释放的研究

本研究的目的是了解细胞滋养层细胞和合胞体滋养层细胞体外分化和生物学特性。方法:采用酶消化和Percoll密度梯度离心法,对人足月胎盘细胞滋养层细胞进行分离、纯化和体外培养。采用放射免疫法(RIA)检测细胞培养上清液hCG含量的变化。结果:经分离和纯化的细胞滋养层细胞在体外培养中生长良好,通过细胞分裂和融合形成合胞体滋养层细胞,随着合胞体滋养层细胞的生长,细胞培养上清液中hCG含量显著升高。我们认为从胎盘中分离和纯化的细胞滋养层细胞在体外培养中可分化和融合形成合胞体滋养层细胞,体外hCG含量的增加与合胞体滋养层细胞生长有关。     

贴壁培养细胞简便染色方法

细胞染色是细胞生物学研究和应用中最为常见的一种技术．使细胞的形态和结构更加明显,可以直接观察细胞某些生物学特征的变化。不仅在医学基础研究中像细胞凋亡和肿瘤细胞株的观察方面广泛应用,而且在生物医学教学与临床检验中更是不可缺少的手段,包括基本的细胞形态观察、血液细胞分类、骨髓细胞相、以及脱离细胞等的分析方面,帮助学生提高学习,以及临床医生了解就诊者的身体状况做出正确的诊断。但细胞染色技术尚存在拓展的空间,本文结合细胞制片和细胞染色技术,对生物学基础研究中的贴壁细胞进行处理．方便了贴壁细胞的染色分析,从而丰富了这一传统技术的应用。