同种异体心脏移植中急性排斥反应免疫学机制及进展

目前,同种异体心脏移植已成为一种应用于临床治疗终末期心脏病的较为有效方法.急性排斥反应是目前同种异体心脏移植中最常见的一种移植免疫排斥反应,是心脏移植第一年失败的主要原因.因此,解决和研究心脏移植中急性排斥反应及其发生机制,己成为当今临床移植研究的紧迫课题.现就其免疫学机制,目前研究现状及进展等作一综述.     

联合应用共刺激通路阻断剂诱导小鼠记忆性心脏移植耐受的研究

目的 探索联合应用共刺激通路阻断剂诱导记忆性心脏移植耐受的方法。方法 皮肤预致敏小鼠,过继转移同种反应性记忆性T细胞(Tm),构建小鼠同种异体心脏移植模型后再联合阻断效应及Tm激活途径,通过观察各组移植物平均存活时间、移植物排斥程度,检测脾脏中CD44高表达细胞数、脾细胞增殖情况和移植物中相关基因相对表达量等指标探讨其可能的作用机制。结果 (1)未处理小鼠脾脏中Tm占6.52﹪,而预致敏小鼠脾脏中Tm占26.5﹪;(2)平均存活时间为对照组5.17d,联合应用CTLA4Ig和anti-CD40L(二联用药)组10.33d,再联合应用anti-LFA-1和anti-OX40L(四联用药)组均>100d;(3)移植物排斥对照组均为4级,二联用药组?3B级,四联用药组为0级;(4)只有对照组脾脏物中CD44高表达;(5)对照组与二联用药组脾细胞增殖程度(t=2.91,P=0.027)明显高于四联用药组;(6)治疗组的移植物中IL-2、IFN-γ和Foxp3基因的表达量明显低于对照组(t=6.51,t=9.94,t=6.15,P=0.00,P=0.00,P=0.00),并且四联用药组IL-10基因表达量明显升高(t=4.71,P=0.003)。结论 对于记忆性心脏移植模型,只有联合阻断效应和Tm才可获得移植物长期耐受,其机制可能是明显降低移植物和移植受者细胞免疫应答水平的同时,诱导移植物中表达大量IL-10分泌性Tr1细胞。     

石韦对小鼠免疫功能及异基因皮片移植排斥的抑制作用

目的 研究石韦对小鼠免疫功能和同种异基因皮片移植的影响.方法 分别给小鼠灌胃高、中、低3个剂量石韦水煎液,研究其对正常小鼠和由左旋咪唑引起的免疫亢奋模型小鼠脾脏重量指数、巨噬细胞的吞噬活性、淋巴细胞转化、IgM分泌量的影响;观察石韦对小鼠同种异基因皮片移植的影响.结果 石韦可抑制正常小鼠巨噬细胞吞噬活性、T淋巴细胞转化率和IgM的分泌量(P＜0.05).3个剂量的石韦均可调节免疫亢奋小鼠脾脏重量指数、巨噬细胞吞噬活性、T淋巴细胞转化率恢复至正常水平,中剂量组可以显著降低IgM的分泌量至正常水平.小鼠移植皮片的存活时间:石韦低剂量组为(16.13±1.13)d,中剂量组为(15.62±1.01)d,高剂量组为(14.89±2.01)d,显著长于对照组的(9.75±0.89)d.结论 石韦可抑制正常小鼠的免疫功能,调节免疫亢奋小鼠免疫功能恢复至正常水平,减轻机体对同种异基因皮片移植的排斥反应.     

山萘酚通过增强Treg细胞免疫抑制功能延长移植物生存时间

目的:探讨应用山萘酚增强Treg细胞免疫抑制功能,从而抑制大鼠移植物排斥反应并改善移植物生存的作用和机制。方法:以Wister大鼠和SD大鼠分别为供、受体,建立同种异体皮肤移植排斥反应动物模型。观察受体老鼠皮肤移植物的情况,记录移植物失功时间(移植物皮片80%面积发生排斥)。RT-PCR检测移植7天后脾细胞、淋巴细胞FOXP3、CTLA-4和IL-10的mRNA水平,用HE染色组织病理学观察术后7天移植皮片的淋巴细胞浸润程度。体外实验T细胞增殖抑制试验加入山萘酚作为对照,观察Treg功能情况。结果:1.山萘酚能增强移植后同种异体移植物的生存时间(DMSO组6.3±0.3天,山萘酚组13.7±0.39天,P<0.01);2.RT-PCR显示山萘酚可增强细胞CTLA-4(对照组9.24±0.17,山萘酚组12.48±0.145,P<0.05)、FOXP3(对照组0.96±0.07,山萘酚组1.41±0.07,P<0.01)和IL-10(对照组0.95±0.12,山萘酚组1.50±0.16,P<0.05)的mRNA水平;3.体外T细胞增殖抑制实验中,山萘酚可增强Treg细胞的免疫抑制功能。结论:在大鼠皮肤移植模型中,山萘酚可延长皮肤移植物的生存时间,提高Treg细胞相关IL-10、FOXP3和CTLA-4的mRNA水平;体外实验中,能抑制效应T细胞的增殖,表明山萘酚在提高移植物生存方面存在一定的价值。     

近交系小鼠不同品系颈部心脏移植

目的:建立近交系小鼠同种异品系颈部心脏移植模型.方法:用袖套法进行小鼠颈部心脏移植,选BALB/c小鼠(供体)和用C57小鼠(受体),进行同种异品系移植25例.结果:供心热缺血2～5 min,冷缺血20～25 min,手术总时间为60～70 min,手术成功率为96%.移植心脏平均存活期为(8.44±1.25)d,n=12.结论:运用改进的套管技术建立小鼠颈部心脏移植模型是一种成功率高而且可靠的方法,可用于移植免疫方面的研究.     

玻璃化法与低温冷冻法保存兔关节软骨异体移植的实验对比研究

目的:观察玻璃化法保存同种异体软骨移植修复兔关节软骨缺损的效果,并与低温冷冻法作比较.方法:18只健康成年日本大白兔,其中6只用于异体骨软骨柱的制备,另外12只随机分成2组,每组各6只.软骨移植物标本取材后,采用低温冷冻法和玻璃化法保存2w.同种异体骨软骨移植物相应复温后移植于兔膝关节软骨缺损模型的相应软骨缺损区.移植术后12w处死动物,移植区软骨组织后固定、切片、脱钙及石蜡包埋.采用苏木精-伊红染色及蕃红-O染色后进行组织学观察及Mankin评分.结果:玻璃化组软骨移植区颜色与周围正常软骨组织基本一致,软骨完整,无坍陷及裂纹;镜下观察可见其组织深层透明软骨样组织,浅层软骨区可见纤维样软骨组织,细胞成熟,大量分泌软骨基质.低温冷冻组软骨移植区表面欠光整,存在裂隙及轻度坍陷;镜下观察可见少量纤维样软骨组织,大部分为纤维结缔组织,细胞排列相对紊乱,软骨基质分泌量少.两组的组织学Mankin评分分别为9.6± 2.4和3.0± 1.0,低温冷冻组显著高于玻璃化组(t=2.014,P=0.000).结论:采用玻璃化法保存兔同种异体软骨移植物是一种可行的方法.相比低温冷冻法,玻璃化法保存的同种异体软骨其移植术后,软骨修复区的组织更接近正常软骨.     

不同手术方法对小鼠同种异基因移植皮片存活的比较

目的采用不同手术缝合方式观察小鼠移植皮片存活及生长情况,以建立一种简单易行、快速经济的小鼠同种异基因皮肤移植方法.方法 受体BALB/c小鼠随机分为3组(Z组、J组和T组),每组20只,通过背-背法进行供体C57BL/6的皮片移植,Z组、J组和T组分别采用四周缝合、对角缝合和粘贴固定的皮片缝合方法.每天监测小鼠体重变化及生长状态,观察26天,实验第3、7、15和26天观察各组受体移植皮片存活情况,其中皮片变硬、结痂脱落或坏死判定为移植排斥.第26天取小鼠皮肤移植组织以及肝脾组织进行病理检测.结果 各组小鼠移植物平均体重变化趋势类似,第6天达到最低水平,移植皮片病理检测结果显示,各组均见移植皮片真皮内淋巴细胞浸润,3组病理结果类似,肝脾病理检测发现淋巴细胞大量浸润,说明造模成功.实验26天后,Z组、J组和T组小鼠皮片分别有7、5和3只受体小鼠皮片仅观察到炎症反应.结论 3种手术方式建模均成功,但采用粘贴固定方式进行小鼠背部皮肤移植具有手术方式简单有效、对皮肤损伤小的优点,是一种较好的小鼠同种异基因皮肤移植手术方法.     

胸腺内注射供体BMSCs对同种异体腹部皮瓣移植排斥的影响

目的:将供体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)胸腺内注射(intrathymic injection,IT)至受体胸腺,探讨其对同种异体腹部皮瓣移植排斥的影响及机制。方法:全骨髓贴壁培养法培养并纯化BN大鼠BMSCs,流式细胞术对其表型进行鉴定。受体Lewis鼠随机分为A组(空白对照组)、B组(BMSCs组)、C组(60Coγ射线4Gy全身照射组)、D组(全身照射+BMSCs组),每组6只。各组大鼠第0天进行同种异体腹部皮瓣移植,A组移植前14天IT PBS,B组移植前14天IT供体BMSCs,C组移植前15天给予60Coγ射线4Gy全身照射,移植前14天IT PBS,D组除移植前15天4Gy全身照射外,移植前14天IT供体BMSCs。大体观察移植皮瓣存活情况并绘制生存曲线,排斥终点流式检测脾细胞调节性T细胞(Treg)比例变化,体外混合淋巴细胞反应检测受体脾淋巴细胞对供体抗原反应性变化。结果:全骨髓贴壁培养法能够很好培养出BMSCs,其P3代流式细胞术表型鉴定结果为CD11b/c、CD45阴性,CD29、CD90阳性。B组的移植皮瓣存活时间与A组相比无明显差异(P>0.05),而D组的移植皮瓣平均存活时间较C组延长3.4天,差异具有统计学意义(P<0.01),脾细胞Treg比例显著增高(P<0.01),脾淋巴细胞对供体抗原反应性显著降低(P<0.05)。结论:IT供体BMSCs联合60Coγ射线4Gy全身照射通过上调受体脾细胞Treg比例能有效降低受体脾淋巴细胞对供体抗原的反应性,显著延长同种异体腹部皮瓣移植物存活时间。     

移植后糖尿病与钙调神经蛋白免疫抑制剂使用的危险分析

目的:探讨移植后糖尿病(PTDM)的危险因素与钙调神经蛋白免疫抑制剂使用的关系.方法:分析近9年613例同种异体尸体肾移植术后患者年龄、性别、体质量指数(BMI)、糖尿病家族史、钙调神经蛋白免疫抑制剂(环孢霉A,CsA;他克莫司,FK506)使用与PTDM发生的危险程度.结果:PTDM的发生率为24.1%,PTDM发生与患者年龄、糖尿病家族史及BMI明显相关,PTDM患者钙调神经蛋白免疫抑制剂血药浓度剂量比明显高于移植后非糖尿病患者(non PTDM),且服用FK506后空腹血糖高于服用CsA.结论:与患者年龄、糖尿病家族史、BMI相比,服用钙调神经蛋白免疫抑制剂是导致PTDM发生最重要的危险因素,且FK506较CsA更易发生PTDM.     

不同移植物对兔前叉韧带重建术后血运变化的影响

目的：比较自体和同种异体半肌腱重建兔前叉韧带对血管生成的影响。方法：选择48 只骨骼发育成熟的新西兰种属兔作为 研究对象,将其随机分为自体组(A 组)和异体组(B 组),每组24 只,分别接受半肌腱重建前叉韧带手术。从手术日期开始,分别记 录手术后第3 周、第6 周、第12 周和第24 周重建韧带的血管生成情况同时对血管生成数量进行定量。结果：手术后两组实验兔 关节均无肿胀,关节囊无炎性反应发生。在手术后第3 周,两组血管生成无明显差异(P>0.05);术后第6 周和第12周,自体移植组 新生血管数量明显高于异体移植组(P<0.05);术后第24 周,异体组新生血管数量明显高于自体组(P<0.05)。结论：在兔前叉韧带的 重建过程中,异体移植物重建的血管生成速度和数量明显慢于自体移植物,提示在临床上选择自体移植物对术后恢复更理想.