一组丝瓜籽小分子核糖体失活蛋白LuffinS的分离,纯化 …

通过硫酸铵分级沉淀、ＣＭ－５２阳离子交换层析、ＨＲＬＣ分子排阻层析及ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ Ｓ离子交换层析等步骤,从丝瓜籽中分离到一组分子量为８ｋＤ左右的小分子核糖体失活蛋白－ＬｕｆｆｉｎＳ１、ＬｕｆｆｉｎＳ２、ＬｕｆｆｉｎＳ３。末端分析结果表明,它们的Ｎ端氨基酸分别为Ａｌａ、Ｐｒｏ和Ｔｈｒ。氨基酸序列分析确定了ＬｕｆｆｉｎＳ２的Ｎ端９个氨基酸的序列是Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ａ     

八棱丝瓜籽核糖体失活蛋白的分离纯化及其生化性质

通过盐溶液抽提、硫酸铵分级沉淀、CM 5 2纤维素阳离子交换层析、反相毛细管液相色谱 (re verse phasecapillaryliquidchromatography ,RP CLC)等步骤 ,从八棱丝瓜籽中分离到 2种单链核糖体失活蛋白luffaculin 1和luffaculin 2 .在SDS PAGE和IEF上均显示为单一条带 ,表观分子量均为 2 8kD ,其等电点分别为 8 86 (luffaculin 1)和 9 0 5 (luffaculin 2 ) .实验表明 ,它们具有RNAN 糖苷酶活性 .蛋白质合成抑制活性测试表明 ,它们对蛋白质合成具较强的抑制作用 .体外抑制肿瘤细胞生长活性检测表明 ,luffaculin 1和luffaculin 2对人白血病细胞株K5 6 2有较强的毒性 ,IC50 分别为 1 1×10 -6mol L和 2 0× 10 -7mol L .八棱丝瓜籽核糖体失活蛋白具有可以用于或构成免疫毒素治疗癌症的应用前景     

丝瓜核糖体失活蛋白的分离与纯化

采用一种改进的方法,简便快速地从丝瓜(Luffa cylindrica)籽中得到丝瓜蛋白α和β.它们在SDS-PAGE上均呈一区带,其分子量分别为28000和29000.等电聚焦测定等电点均为10.它们对无细胞体系蛋白质合成都有强烈的抑制活性,其ID₅₀分别为10μg/L和50μg/L,是目前发现的单链核糖体失活蛋白中活性最高的.     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的理化性质及生物活性

采用硫酸铵分级分离,假配基亲和层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００分子筛层析等方法,从苦瓜籽中获得核糖体失活蛋白（ＲＩＰ）．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ和ＰＡＳ方法分析均表明为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带．根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０分子筛层析结果计算其相对分子质量为３．０×１０４,经ＩＥＦ－ＰＡＧＥ结果计算其ｐＩ为８．９～９．０．对无细胞系统中蛋白质生物合成抑制活性明显,其ＩＣ５０为５．３×１０－ １０ ｍ ｏｌ／Ｌ左右．体外生物活性试验结果表明其对人肝癌细胞、Ｖｅｒｏ、ＳＰ２／０、３Ｔ３、Ｋｂ、Ｎａｖａｎａ 等肿瘤细胞株均表现有不同程度的抑制作用．而对完整细胞人胚肺二倍体细胞却毒性极小．因此,上述实验结果为该ＲＩＰ的进一步深入研究和有可能开发成免疫毒素的高效弹头药物提供了一定的工作基础．     

核糖体失活蛋白及核糖体拓扑结构的研究进展（续完）

核糖体失活蛋白及核糖体拓扑结构的研究进展（续完）李向东刘望夷（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词核糖体失活蛋白核糖体拓扑结构ＲＮＡＮ－糖苷酶２．核糖体拓扑结构的研究核糖体是由数十种生物大分子（ＲＮＡ和蛋白质）构成的。早期普遍接受的...     

核糖体失活蛋白及核糖体拓扑结构的研究进展

天花粉毒蛋白使核糖体失活的分子机制是它有ＲＮＡＮ－糖苷酶的作用。从樟树种子中纯化的两种新的核糖体失活蛋白（ＲＩＰ）——辛纳毒蛋白和克木毒蛋白也都具有ＲＮＡＮ－糖苷酶和依赖超螺旋结构的核酸内切酶活性。辛纳毒蛋白还有杀虫活性;克木毒蛋白还有超氧化物歧化酶活性。被ＲＮＡＮ－糖苷酶失活的核糖体用硼氢化钠还原或氨基酸加成反应可部分地复活,这表明失活的核糖体ＲＮＡ上产生的一个活泼醛基对其失活起着重要作用。工作中建立了荧光标记在凝胶上测定小分子ＲＮＡ序列和定性测定糖蛋白的两种新方法。     

一种金针菇核糖体失活蛋白的分离纯化研究

获得一种为研究其他菌类核糖体失活蛋白的对照品,并论述一种金针菇核糖体失活蛋白的分离纯化及其活性的研究结果。实验中采用了DEAE和CM-离子交换纤维素与Bio-Gel 100柱层析方法。从1 000 g新鲜金针菇中得到5.58 mg的核糖体失活蛋白-Velutin,并证明其具有明显的抑制蛋白质的翻译作用,同时简要介绍了它的应用及展望。分离纯化到具有活性的Velutin,分子量为13.8 ku。     

植物的核糖体失活蛋白及其应用

对植物的核糖体失活蛋白的分类、性质、功能和应用的研究进展作概述。     

核糖体失活蛋白的结构功能与分布

核糖体失活蛋白是一类在植物中较广泛存在的毒蛋白。植物核糖体失活蛋白具有RNAN-糖苷酶活力,可作用于核糖体RNA,使核糖体失去蛋白质合成的功能。根据一级结构,核糖体失活蛋白可分为两种类型。Ⅰ型核糖体失活蛋白由一条链组成,分子量在25—30 kDa之间。Ⅱ型核糖体失活蛋白由两条以二硫键相连的链(A、B链)组成,分子量在60 kDa左右。B链可以与细胞表面含半乳糖的受体结合,有助于A链进入细胞,作用于核糖体。目前至少已从9个科31种植物中分离纯化了Ⅰ型RIP。Ⅱ型RIP较少,仅在6科8种植物中发现。除了具有RNA N-糖苷酶活性,还发现一些核糖体失活蛋白可以切割超螺旋双链DNA,产生缺口环状和线状DNA。此外,一种Ⅰ型RIP,克木毒蛋白还具有超氧化物歧化酶活性。     

樟树核糖体失活蛋白在种子成熟过程中的动态变化与特性

樟树种子中存在着ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ两种新的核糖体失活蛋白,电泳分析与Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交结果表明ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ在９、１０、１１月份种子中的含量分别是８．９％,２６．８％和１１．５％,以１０月份种子的含量为最高。ｃａｍｐｈｏｒｉｎ的含量则分别为１．７％,２．５％与４．６％,随着种子的成熟而不断增加。８月份的幼嫩种子中检测不出ｃｉｎｎｍａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ．这表明樟树核糖体失活蛋白的表达受到了发育进程的时态调控．樟树叶片中可能不存在ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ,即两者的合成似乎具有一定的组织特异性．ｃｉｎｎａｍｏｍｉｎ与ｃａｍｐｈｏｒｉｎ均为糖蛋白。     

栝楼种子中一种新型小分子核糖体失活蛋白——S—tric …

通过硫酸铵分级沉淀、ＣＭ－５２阳离子交换层析、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－１００凝胶过滤和ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ－Ｓ离子交换层析等步骤,从栝楼种子中分离到一种核糖体失活蛋白－－Ｓ－ｔｒｉｃｈｏｋｉｒｉｎ,经１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定分子量为８ｋＤ左右,１３．５％聚丙烯酰胺凝胶酸性电泳结果显示其等电点在ｐＨ９．５左右。通过对大鼠肝核糖体作用的研究,表明Ｓ－ｔｒｉ－ｃｈｏｋｉｒｉｎ属于ＲＮＡ Ｎ－糖苷酶催化型     

核糖体失活蛋白抗HIV-1作用的研究进展

核糖体失活蛋白(RIPs)抗HIV-1活性研究已有十几年的历史。RIPs类化合物代表了抗HIV/AIDS天然产物或先导化合物发展的一个重要方向。本文从介绍RIPs的酶活性及其抗HIV-1活性入手,对RIPs抗HIV-1的可能机制,从与RIPs酶活性的关系、诱导HIV-1感染细胞的凋亡及相应的信号转导、诱发活性氧的产生,以及对HIV-1整合酶的抑制作用等几个方面做了较详尽的阐述,并对RIPs的结构修饰和抗HIV-1构效关系进行了综述。对RIPs类化合物在抗病毒领域进行深入而系统地研究,能拓宽其在抗HIV/AIDS临床上的进一步应用。     

麻疯树核糖体失活蛋白基因的克隆和表达

麻疯树(Jatropha curcas L.)核糖体失活蛋白(curcin)是存在于麻疯树种子中的一种毒性较强的蛋白,它与蓖麻毒蛋白和相思子毒蛋白的性质相似,属Ⅰ型核糖体失活蛋白.从麻疯树种子中分离得到一种分子量为28.2 kD的蛋白质,其对无细胞系统中蛋白质合成的抑制活性较强,IC50为(0.19±0.01)nmol/L,具有RNA N-糖苷酶活性.依据curcin的N端部分氨基酸设计简并引物,通过RT-PCR和5'-RACE技术从未成熟种子总RNA中克隆到curcin全长cDNA序列.该cDNA全长由1 173个碱基组成,包含一个编码293个氨基酸的前体蛋白,前42个氨基酸为信号肽.推测的多肽序列与测定的蛋白质N端序列相同,与多种己发表的Ⅰ型核糖体失活蛋白和Ⅱ型核糖体失活蛋白的A链有一定的同源性.将curcin的编码区与表达载体pQE-30相连后,转入大肠杆菌(Escherichia coil)M15菌株中得到了有效的表达.将表达的融合蛋白纯化后发现,它具有抑制无细胞系统蛋白质合成的能力.     

苦瓜核糖体失活蛋白的分离纯化及其抑制烟草花叶病毒活性

目的:探讨分离纯化苦瓜种子核糖体失活蛋白(RIP)的方法,并研究利用纯化后的RIP抑制烟草花叶病毒(TMV)的活性。方法:用盐溶液抽提总蛋白后,经30%～90%的(NH4)2SO4分级沉淀,制成粗提液。用CMSepharoseFastFlow离子交换层析结合SephadexG-75凝胶柱分离纯化RIP。结果与结论:经SDS-PAGE检测及RNAN-糖苷酶活性鉴定,确定最终得到的蛋白为苦瓜RIP;所纯化的RIP对感染黄瓜和番茄的TMV有明显的抑制作用,但RIP的浓度并不与其抑制TMV的活性呈正相关。     

核糖体失活蛋白抗HIV-1作用的研究进展

核糖体失活蛋白(RIPs)抗HIV-1活性研究已有十几年的历史。RIPs类化合物代表了抗HIV/AIDS天然产物或先导化合物发展的一个重要方向。本文从介绍RIPs的酶活性及其抗HIV-1活性入手，对RIPs抗HIV-1的可能机制，从与RIPs酶活性的关系、诱导HIV-1感染细胞的凋亡及相应的信号转导、诱发活性氧的产生，以及对HIV-1整合酶的抑制作用等几个方面做了较详尽的阐述，并对RIPs的结构修饰和抗HIV-1构效关系进行了综述。对RIPs类化合物在抗病毒领域进行深入而系统地研究，能拓宽其在抗HIV/AIDS临床上的进一步应用。     

天花粉蛋白等五种核糖体失活蛋白的5′－AMP－磷酸酯酶活性

用ＨＰＬＣ和薄层层析等方法,分析了不同反应时间天花粉蛋白（ＴＣＳ）和５＇－ＡＭＰ的反应产物成分,结果显示在０．５ｈ内生成腺嘌呤核苷,随着反应时间的增加,同时有腺嘌呤核苷和腺嘌呤生成,４８ｈ后则反应产物主要是腺嘌呤,α－苦瓜子蛋白、肥皂草蛋白、丝瓜素毒蛋白和多花白树毒蛋白等单链核糖体失活蛋白也有类似结果,紫外差光谱研究结果也表明ＴＣＳ与５＇－ＡＭＰ相互作用显示出明显的时间过程,提示单链核糖体失活蛋白除了Ｎ－糖苷酶活性外,还具有５＇－ＡＭＰ磷酸酯酶活性．