大肠杆菌Sec依赖性蛋白质转运途径

与真核细胞蛋白质外运方式不同,大肠杆菌分泌蛋白的合成和跨内膜转运是不偶联的,对于一些小分子蛋白质（例如噬菌体Ｍ１３外壳蛋白）不需要其它分子协助能自发保持松散构象从核糖体定位到质膜,而对于大的蛋白质分子,尤其含有疏水结构域或疏水信号肽,需要其它分子伴侣的协助以保持转运感受状态才能被有效转运。除了这种依赖Ｓｃｃ（ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ）蛋白的一般分泌途径以外,还存在其它Ｓｅｃ非依赖性的Ｔａｔ途径等。本文对大肠杆菌Ｓｅｃ依赖性蛋白质转运途径进行综述。     

高中毕业证书HSC考试生物试题浅析

高中毕业证书ＨＳＣ考试生物试题浅析张明亮（山东省烟台教育学院生物系２６４００１）方绍英（山东省烟台市第一小学２６４００１）高中毕业证书考试（即ｈｉｇｅｒｓｃｈｏｏｌｃｅｒｔｉｆｉｃａｔｅｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｓ，简称ＨＳＣ考试）是澳大利亚新南威尔士州...     

Mn-SOD与抗癌胚抗原单链抗体基因的融合及高效表达

将Ｍｎ－ＳＯＤ与抗癌胚抗原（ＣＥＡ）单链抗体基因（Ｓｃ－Ｆｖ ｇｅｎｅ）融合,重组到含Ｔ７启动子的表达载体ｐＥＴ－２２ｂ（＋）中,构建表达质粒ｐＥＴＭｎ－ＳＯＤ－ＳｃＦｖ,并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,进行高效表达,表达物占菌体可溶性总蛋白的２４％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蛋白质和迹图谱显示表达物分子量为４５ｋＤ与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在大肠杆菌中为泌型表达有利于纯化。ＲＩＡ测定表     

从我国实际出发,大力开发单细胞蛋白资源

开发单细胞蛋白资源,发展单细胞蛋白工业,这是开辟人类食物新来源的重要途径之一,是件具有战略意义的大事。单细胞蛋白不仅蛋白质含量丰富,营养效果良好,可以用来解决蛋白质食物和饲料的匮乏,而且因它能够以多种废弃资源为原料,进行物质再循环,所以也是加强环境保护、变废为宝的好途径。     

防风悬浮培养中的体细胞胚发生

将防风（Ｓａｐｏｓｈｎｉｋｏｖｉａ ｄｉｖａｒｉｃａｔａ （Ｔｕｒｃｚ．） Ｓｃｈｉｓｃｈｋ．）试管苗幼根接种在含０．５ ｍ ｇ／Ｌ ２,４－Ｄ 的ＭＳ培养基上诱导出愈伤组织,继而在含１０％ 椰子乳和０．５ ｍ ｇ／Ｌ ２,４－Ｄ的ＭＳ液体培养基中振荡分散建立了细胞悬浮物。至胚性细胞团产生后转至无激素培养基中形成体细胞胚。观察了从单细胞直到球形胚发生的显微及超微结构的变化。在胚性细胞团阶段细胞内出现周质内质网,它的出现可能与细胞团向原胚过渡时的特殊代谢相联系。从单细胞至原胚各阶段细胞内均含有圆球体,到原胚时数量大增,而且其中央电子致密的基质变小变浅,周边部分扩大并更加透明,暗示圆球体在胚胎发生早期起着贮藏蛋白或脂蛋白的作用,后来消耗于原胚的建成而衍生为脂滴。球形胚阶段,在很多细胞的液泡中出现团块状的液泡蛋白。此外还观察到,悬浮培养时单细胞的聚集能促进体细胞胚的发生     

关于脑缺血的分子生物学研究

脑缺血的主要直接后果是脑缺氧。脑缺血或脑缺氧除引起一系列神经化学变化与蛋白质的合成降低外,还引起热休克蛋白（ＨＳＰ）和ｃ－ｆｏｓ蛋白等特殊蛋白质的特殊变化。轻度缺血可引起ＨＳＰ７０基因转录与翻译;中度缺血只引起其转录而不翻译;重度缺血时转录与翻译均终止。轻、中度脑缺血引起ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ剧烈而短暂的表达,ｃ－ｆｏｓ、ＪｕｎＢ、ｃ－ｊｕｎ等基因转录增加;严重缺血可能因神经元死伤,导致ｃ－ｆｏｓ蛋白水平降低,但局部胶质细胞ｃ－ｆｏｓ诱导增强。     

金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal Protein A,SPA)分泌型融合表达系统

金黄色葡萄球菌蛋白Ａ（ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌＰｒｏｔｅｉｎＡ,ＳＰＡ）分泌型融合表达系统李节,邱平（南京大学生物化学系医药生物技术国家重点实验室,南京２１０００８）引言十几年前,我们制备蛋白质的方法还主要依靠从天然组织或细胞中提取,而现在人们可以通过基因工程方法,在细菌中生产大量有价值的活性蛋白和多肽。外源基因在细菌中表达的一个主要问题是基因产物如何折叠成天然构象。     

人肿瘤坏死因子受体I死亡域融合蛋白基因的克隆与表达

通过设计４个引物进行重叠ＰＣＲ,由此克服了人肿瘤坏死因子受体Ｉ死亡域与氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）的融合蛋白基因（ＤｄＬｃａｔ）。该融合蛋白基因经测序,证明与设计的序列相同。构建成的重组表达质粒ｐＬＴ１０ＤｄＬｃａｔ转化大肠杆菌后发酵,ＩＰＴＧ诱导２ｈ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定ＤｄＬｃａｔ蛋白质的分子量为３９ｋＤ。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹实验进一步作了鉴定。表达产物大部分为包涵体。ＤｄＬｃａｔ经Ｑ－Ｓｅｐｈａ     

毕赤酵母表达的重组乙肝表面抗原SS1的纯化及性质鉴定

对毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）表达的重组乙肝表面抗原ＳＳ１的纯化以及蛋白质的理化性质及免疫原性进行了进一步的研究。采用单抗亲和层析的方法,一步纯化即可得到纯度为９５％的纯化蛋白质。ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹鉴定表明,纯化的ＳＳ１融合蛋白同时具有良好的Ｓ和ＰｒｃＳ１抗原性。ＣｓＣ１密度梯度离心和电镜检测的结果则表明,这一重组抗原可以形成与ＨＢＶ亚病毒颗粒类似的颗粒结构。在ＢＡＬＢ／     

半乳糖凝集素的结构和功能

半乳糖凝集素的结构和功能关键词半乳糖凝集素凝集素是能与特定糖结构结合的蛋白质,能够识别广泛分布于动物组织中的糖复合物。动物凝集素可分为４类：Ｃ类凝集素（包括选择蛋白,Ｓｅｌｅｃｔｉｎ）、Ｐ类凝集素、正五聚蛋白（Ｐｅｎｔｒａｘｉｎｓ）和半乳糖凝集素（暂...     

杆状病毒增效蛋白研究进展

昆虫杆状病毒增效蛋白（ｅｎｈａｎｃｉｎ）曾被称为病毒促进因子（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｆａｃｔｏｒ,ＳｙＦ）或病毒增效因子（ｖｉｒａｌｅｎｈａｎｃｉｎｇｆａｃｔｏｒ,ＶＥＦ）,它长期以来被认为只存在于昆虫颗粒体病毒（Ｇｒａｎｕｌｏｓｉｓｖｉｒｕｓ,ＧＶ）中的一类蛋白质,已知有８种ＧＶ中含有增效蛋白。自Ｔａｎａｄａ［１～４］１９５９年从美洲一星粘虫（Ｐｓｅｕｄａｌｅｔｉａｕｎｉｐｕｎｃｔａ,Ｐｕ）ＧＶ中分离出增效蛋白并证实它有增强ＰｕＭＮＰＶ的感染力后,一直很受人们关注。从它的作用机理到氨基酸序列…     

串联质谱数据从头解析与蛋白质的数据库搜索鉴定

蛋白质的鉴定是蛋白质组学研究中必不可少的一步。用串联质谱（ｔａｎｄｅｍ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ,ＭＳ／ＭＳ）可以进行多肽的从头测序（ｄｅ ｎｏｖｏ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）,并搜索数据库以鉴定蛋白质。用图论以及真实谱－理论谱联配（ａｌｉｎｇｍｅｎｔ）的方法对串联质谱得到的多肽图谱进行从头解析,得到了可靠的多肽序列,并应用到数据库搜索中鉴定了相应的蛋白质。同时,还用统计的方法对ＳｗｉｓｓＰ     

红发夫酵母（Phaffia rhodozyma）及其虾青素的开发研究

红发夫酵母（Ｐｈａｆｆｉａｒｈｏｄｏｚｙｍａ）及其虾青素的开发研究戴亦军,秦怀兰,袁生（南京师范大学生物系,南京）产类胡萝卜素的酵母菌具有生长速度快,发酵周期短,含有丰富的蛋白质、氨基酸,以及色素提取之后,菌体单细胞蛋白可作为饵料、饲料添加剂等优点,...     

聚球藻类金属硫蛋白的纯化及部分性质的研究

单细胞蓝藻（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｕｓｓｐ．ＰＣＣ７９４２）以５０μｍｏｌ／ＬＺｎ２＋诱导８ｄ后收集,破碎取上清液经凝胶过滤、离子交换层析及反相ＨＰＬＣ纯化得到类金属硫蛋白,产率为每升培养液收集１．５ｇ鲜藻,得２．５ｍｇ纯品．其单体分子量为８７５０,Ｎ未端测定为缬氨酸,氨基酸组成分析得每分子（５６个氨基酸）含１０个半胱氨酸,疏水氨酸较多,且含有芳香族氨基酸,原子吸收光谱测得每分子蛋白结合４个二价金属．以上表明,该种类金属硫蛋白与哺乳动物金属硫蛋白结构差异很大,可能只是一种进化上的趋同．     

高,低蛋白含量的大豆种子贮藏蛋白积累的比较研究

利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及电子显微镜等技术比较分析和观察了两个大豆品种（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍ ａｘ（Ｌ．） Ｍｅｒｒ．）种子贮藏蛋白积累的差异。结果表明,在子叶发育过程中,蛋白含量高（４５％ ）的“公交８０５９－３”比蛋白含量低（３５％ ）的“ＧＤ－１５１５”蛋白含量高,且增长速率较快;蛋白质及７Ｓ和１１Ｓ亚基积累的时期较早,尤其是７Ｓ的β亚基。电镜观察表明“公交８０５９－３”蛋白质在液泡中的积累,前期与“ＧＤ１５１５”相似,中期以后的液泡中,蛋白体占整个细胞的比例均高于“ＧＤ１５１５”。这表明：大豆蛋白含量的差异有其生化及结构上的基础     

钙网蛋白研究进展

钙网蛋白研究进展陈安和（西南师范大学生命科学系,重庆６３０７１５）关键词钙网蛋白钙网蛋白（ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ）是１９７４年命名的骨骼肌肌质网膜上的钙结合蛋白。近年的研究发现,该蛋白质在非肌肉组织中含量丰富,它是内质网（ＥＲ）主要的钙结合蛋白之一...     

湖泊富营养化灰色评价模型及其应用

湖泊富营养化灰色评价模型及其应用冯玉国（冶金部山东地质勘查局三队,烟台２６４００２）ＡＧｒｅｙＥｖａｌｕａｔｉｏｎＭｏｄｅｌｏｆｌａｋｅＥｕｔｒｏｐｈｉｃａｔｉｏｎａｎｄｉｔｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．ＦｅｎｇＹｕｇｕｏ（Ｎｏ．３ＴｅａｍｏｆＳｈａｎｄ...     

日本血吸虫26kD抗原基因在BCG中的表达

研究了外源基因日本血吸虫２６ｋＤ抗原（Ｓｊ２６ＧＳＴ）在卡介苗（ｂａｃｉｌｕｓＣａｌｍｅｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ,ＢＣＧ）、耻垢分枝杆菌（Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）和大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达．运用重组ＤＮＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ）等分子生物学技术,以表达Ｓｊ２６ＧＳＴ的Ｅ．ｃｏｌｉｐＧＥＸ衍生质粒为模板,经ＰＣＲ得到编码Ｓｊ２６ＧＳＴ的全长ｃＤＮＡ片段．将其按正确的阅读框顺序,克隆到人结核杆菌热休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ）７０的启动子下游,再将ＨＳＰ７０启动子和Ｓｊ２６ＧＳＴ基因一起亚克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭质粒ｐＢＣＧ－２０００中,得到Ｅ．ｃｏｌｉ－分枝杆菌穿梭表达质粒ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６．ｐＢＣＧ－Ｓｊ２６电转化入ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓｍｃ２１５５中表达Ｓｊ２６ＧＳＴ抗原,所表达的天然重组Ｓｊ２６ＧＳＴ（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）为可溶性蛋白,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上分子量为２６ｋＤ处可见明显的表达蛋白带．其表达量分别占ＢＣＧ和Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ菌体总蛋白的１５％和１０％．可见,Ｓｊ２６ＧＳＴ基因能在ＢＣＧ中高效表达．     

源真核生物贾第虫与原细菌着丝粒／动粒蛋白的免疫印迹检查

以抗人着丝粒蛋白Ｂ的单抗和多抗以及抗ＣＨＯ细胞动粒蛋白的单抗对源真核生物（ａｒｃｈｅｚｏａ）蓝氏贾第虫（Ｇｉａｒｄｉａｌａｍｂｌｉａ）和分别代表原细菌的３个枝的３种原细菌（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ、Ｓｕｌｆｏｓｐｈａｅｒｅｌｌｕｓ）作了免疫电泳检查,并以小眼虫和大肠杆菌作为对照。结果表明,３种原细菌都呈阳性反应;而且贾第虫的反应情况显然比纤毛虫、眼虫、典型涡鞭毛虫、尖尾虫（Ｏｘｙｒｒｈｉｓ）等单细胞后真核生物的更接近于原细菌的情况。这不仅从一个新的方面为真核细胞起源于古代的原细菌的学说提供了新的佐证,而且从着丝粒／动粒蛋白方面证明了源真核生物贾第虫的原始性。本工作还为认识着丝粒蛋白Ｂ和动粒蛋白的起源和演化提供了线索。     

酵母朊病毒的遗传与增殖

１９８２年,Ｐｒｕｓｉｎｅｒ等发现,在感染瘙痒病的仓鼠脑中有一种异常蛋白,名其为“蛋白质感染颗粒”（ｐｒｏｔｅｉｎａｃｅｏｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｐａｒｔｉ－ｃｌｅ）。Ｐｒｕｓｉｎｅｒ用ｐｒｉｏｎ（现译为朊病毒）这一名词把这类病原体与病毒、细菌、真菌以及其它已知的病原体区分开。后来发现这种蛋白质能够自我催化复制,且有两种构象,即正常态的ＰｒＰＣ和感染态的ＰｒＰＳＣ。两者的化学性质也不同：ＰｒＰＣ能溶于非变性洗涤剂而ＰｒＰＳＣ不溶;ＰｒＰＣ易被蛋白酶消化而ＰｒＰＳＣ则具部分抗性。在酵母中,朊病毒不…