深黄被孢霉发酵生产γ—亚麻酸的研究

以深黄色被孢霉ＡＳ３．３４１０（ＭｏｒｔｉｅｒｅａｌｌａｉｓｄｂｅｌｌｉｎａＡｓ３．３４１０）的变异株Ｍ６为出发菌株,γ－亚麻酸含量２１０ｍｇ／Ｌ。经紫外线和微波处理得到变异株Ｍ６－２２,摇瓶发酵γ－亚麻酸含量１１８１ｍｇ／Ｌ,２００升发酵罐发酵γ－亚麻酸含量达到１３５０ｍｇ／Ｌ,对２００升罐发酵的后提取工艺进行了研究,以乙醇和正己烷分步抽提效果最好,脲素包合法的实验结果表明,在７０～７５℃,３ｈ     

拉曼被孢霉F_5发酵生产γ—亚麻酸的研究

对拉曼被孢霉突变株F5发酵生产γ—亚麻酸的最适碳源、氮源、发酵时间及温度、无机盐离子添加、最适碳源浓度及补加碳源时间等发酵条件进行了研究探讨。最适发酵培养基组成为 (g/L) :葡萄糖 1 0 0 ,酵母浸出粉 4 ,蛋白胨 1 ,K2 HPO4 1 ,CaCl2 1× 1 0 - 2 ,MgSO4 5× 1 0 - 2 ,FeSO4 1× 1 0 - 2 ,ZnSO4 7.5× 1 0 - 3,CuSO4 0 .5× 1 0 - 3,MnSO4 2× 1 0 - 3,pH 6.0。培养温度为 2 5℃ ,1 4 0r/min振荡培养 1 0天 ,培养 8天后 (即收获前 2天 )补加 5 %葡萄糖。发酵结果为 :DC 2 4 .5 9g/L ,TL 1 0 .84g/L ,TL/DC 4 4.0 9% ,GLA/TL 1 0 .67% ,GLA产量为 1 1 5 6.63mg/L。GLA产量较初始结果提高 1 5 6.1 5 %。该菌株已达到工业化生产菌株要求     

被孢霉W_（A－90）发酵生产γ－亚麻酸的研究

本文研究了由被抱霉变株ＭＡ－９０生产了γ－亚麻酸的发酵条件．确定了最适碳源、复源及Ｃ／Ｎ．初步建立了生产γ－亚麻酸的工艺条件。葡萄糖、蔗糖及天冬酰胺和尿素为最适碳、氮源。在Ｃ／Ｎ为２０／１,葡萄糖浓度为８０ｇ／Ｌ的条件下．油脂产量和油脂中γ－亚麻酸的含量分别为８．２ｇ／Ｌ和１４．１３％,γ－亚麻酸产量及生物量分别为１．１５７ｇ／Ｌ和３１．２ｇ／Ｌ。后期适当降低培养温度和良好的通气条件均有利于γ－亚麻酸的积累。     

拉曼被孢霉F5发酵生产γ-亚麻酸的研究

对拉曼被孢霉突变株F5发酵生产γ-亚麻酸的最适碳源、氮源、发酵时间及温度、无机盐离子添加、最适碳源浓度及补加碳源时间等发酵条件进行了研究探讨.最适发酵培养基组成为(g/L):葡萄糖100,酵母浸出粉4,蛋白胨1,K2HPO4 1,CaCl2 1×10-2,MgSO45×10-2,FeSO4 1×10-2,ZnSO4 7.5×10-3,CuSO4 0.5 × 10-5,MnSO4 2×10-3,pH 6.0.培养温度为25℃,140r/min振荡培养10天,培养8天后(即收获前2天)补加5%葡萄糖.发酵结果为:DC24.59g/L,TL 10.84g/L,TL/DC44.09%,GLA/TL10.67%,GLA产量为1156.63 mg/L. GLA产量较初始结果提高156.15%.该菌株已达到工业化生产菌株要求.     

拉曼被孢霉F5发酵生产γ—亚麻酸的实验研究

对拉曼被孢霉突变株F5发酵生产γ-亚麻酸的最适碳源,氮源,发酵时间及湿度,无机盐离子的添加,最适碳源浓度及补加碳源时间等发酵条件进行了研究探讨,最适发酵培养基组成为（g/L)：葡萄糖100,酵母浸出粉4,蛋白胨1,K2HPO41,CaCl2 1*10^-2,MgSO4 5*10^-2,FeSO4 1*10^-2,ZnSO4 7.5*10^-3,CuSO40.5*10^-3,MnSO4 2*10^-3,pH6.0,培养湿度为25度,140rpm 振荡培养10天,培养8天后（即收获前2天）补加5％葡萄糖,发酵结果为：DC24．59 g/L,TL10.84g/L,TL/DC 44.09%,GLA/TL10.67%,GLA产量为1156．63mg/L,GLA产量较初始结果提高156．15％,该菌株已达到工业化生产菌株要求。     

深黄被孢霉发酵生产γ-亚麻酸的研究

以深黄被孢霉AS 3.3410(Mortierella isabellina AS 3.3410)的变异株M_6为出发菌株,γ—亚麻酸含量210mg/L,经紫外线和微波处理得到变异株M_(6-22),摇瓶发酵γ-亚麻酸含量1181mg/L,200升发酵罐发酵γ-亚麻酸含量达到1350mg/L。对200升罐发酵的后提取工艺进行了研究,以乙醇和正己烷分步抽提效果最好。脲素包合法的实验结果表明,在70～75℃、3h的条件下可以使γ-亚麻酸由7.2％浓缩到72％。     

甘草提取物对被孢霉生产γ—亚麻酸的影响

利用甘草滤液和甘草酸对被孢霉（ＭｏｒｔｉｅｒｅｌａＳＰ）原始菌株进行定量处理,结果大大提高了被孢霉对γ亚麻酸的产量,说明甘草酸对被孢霉生产γ亚麻酸有明显的促进作用。     

γ——亚麻酸生产菌深黄被孢霉原生质体的形成和再生

采用２％的溶壁酶加４％的蜗牛酶,从深黄被孢霉的菌丝中获得了大量的原生质体,同时对菌丝的培养时间,渗透压稳定性,酶解系统和酶解温度等因素了进行了系统的观察,从而获得了制备深黄被孢霉原生质体的最适条件,并对该原生质体在高渗培养基上进行了再生实验,其再生率为３２％。     

拉曼被孢霉产γ-亚麻酸的发酵条件优化

对影响发酵产γ-亚麻酸的因素（温度、N源、P源等）进行单因素考察。结果发现,各因素对拉曼被孢霉（Mortierella ramanniana NBRC 8187）产γ-亚麻酸均有不同程度的影响。通过正交试验设计对KH2PO4、NaNO3、酵母膏和温度进行了L9（34）试验设计,以γ-亚麻酸产量为优化目标,直观分析得出影响产量的因素大小顺序为酵母膏、温度、KH2PO4、NaNO3,最终确定最佳的培养条件：酵母膏5 g/L、25℃、KH2PO41 g/L、NaNO33 g/L。在此条件下,检测得出在第5天γ-亚麻酸产量达到0.968 g/L,相比优化前（0.583 g/L）提高了66%。     

γ—亚麻酸生产菌深黄被孢霉原生质体的形成和再生

采用2％的溶壁酶加4％的蜗牛酶,从深黄被孢霉的菌丝中获得了大量的原生质体。同时对菌丝的培养时间、渗透压稳定剂、酶解系统和酶解温度等因素进行了系统的观察,从而获得了制备深黄被孢霉原生质体的最适条件。并对该原生质体在高渗培养基上进行了再生实验,其再生率为32％。     

影响被孢霉产生含γ-亚麻酸油脂的几种因素

对培养条件,如氮源种类、C／N比率、pH、种子种龄与接种量对被孢霉(Mortierellasp.)M14菌株的细胞生长和油脂形成的影响作了研究。结果表明,二级发酵优于一级发酵。M14菌株二级发酵时,种子种龄以49h为适,接种量宜大(30％)。无机氮源有利于不饱和脂肪酸的产生,有机氮源有利于细胞的增殖。低C／N比率有利于菌丝体产量的提高,提高C／N比率则能促进菌体细胞内的油脂合成。pH对菌体生长、油脂产生以及γ-亚麻酸含量都有显著的影响。     

影响被孢霉产生含r—亚麻酸油脂的几种因素

对培养条件,如氮源种类、Ｃ／Ｎ比率、ｐＨ、种子种龄与接种量对被孢霉（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐ）Ｍ１４菌株的细胞生长和油脂形成的影响作了研究。结果表明,二级发酵优于一级发酵。Ｍ１４菌株二级发酵时,种子种龄以４９ｈ为适,接种量宜大（３０％）。无机氮源有利于不饱和脂肪酸的产生,有机氮源有利于细胞的增殖。低Ｃ／Ｎ比率有利于菌丝体产量的提高,提高Ｃ／Ｎ比率则能促进菌体细胞内的油脂合成。ｐＨ对菌体生长、油     

γ-亚麻酸生产菌深黄被孢霉原生质作的形成和再生

采用2％的溶壁酶加4％的蜗牛酶,从深黄被孢霉的菌丝中获得了大量的原生质体。同时对菌丝的培养时间、渗透压稳定剂、酶解系统和酶解温度等因素进行了系统的观察,从而获得了制备深黄被孢霉原生质体的最适条件。并对该原生质体在高渗培养基上进行了再生实验,其再生率为32％。     

复合诱变被孢霉原生质体获高产γ-亚麻酸的研究

以拉曼被孢霉（Mortierella remanniana）为出发菌株M₅,通过原生质体制备,经亚硝酸和激光等进行复合诱变;进行初筛,经摇瓶发酵法复筛,并测定其相关性能指标,获得一生产性能比出发菌株显著提高的突变株M_?;其干菌体收率为46.8g/L、油脂产率达34.6g/L、γ-亚麻酸的产率达12.5g/L,分别是出发菌株的1.73倍、2.02倍和2.6倍。通过基因传代实验,说明突变株的基因可稳定遗传。     

被孢霉γ-亚麻酸高产菌株选育

利用紫外线复合氯化锂诱变高山被孢霉SM96,筛选出一株高产γ-亚麻酸的菌株TM11,产量比出发菌株(25mg/L)提高了近3倍。对影响其多不饱和脂肪酸产生的因子Mg2+,VB6,营养盐溶液,磷源,碳源,氮源酵母膏进行了正交试验,选出TM11最佳的培养基配方:MgSO4·7H2O1.0g,VB6150mg/L,酵母膏6g/L,葡萄糖100g/L,营养盐溶液1mL/L,K2HPO42g/L。在上述最佳培养基中TM11的生物量达18.0213g/L,总脂达10.8128g/L,GLA量达668mg/L。     

雅致枝霉TE7—15发酵生产γ—亚麻酸的实验研究

研究了温度、时间、碳源和氮源对雅致枝霉诱变株ＴＥ７－１５的菌体生长、油脂积累ＧＬＡ合成的影响,确定了ＴＥ７－１５菌株适宜的摇瓶发酵培养条件,使其菌体生物量达到１９．０４ｇ／Ｌ,ＧＬＡ产量达到１０７９．９５ｍｇ／Ｌ,可以满足工业化生产的要求。     

丝状真菌被孢霉产生油脂的研究

被孢霉的三个菌株与Ｍ１４生长在以葡萄糖为碳源、尿素为氮源的液体培养基中,所得到的菌丝体内堆积含ｒ－亚麻酸的油脂。油脂产率以Ｍ１０菌株为高,而油脂中的ｒ－亚麻酸含量却以Ｍ１４菌株为高。这种油脂的脂肪酸中,所含饱和脂肪酸主要有豆寇酸,棕榈酸,和硬脂酸;所含不饱和脂肪酸主要有棕榈油酸,油酸,亚油酸以及ｒ－亚麻酸。上述被孢霉菌株的培养物接种在含葡萄糖、尿素的培养基中生长大约４８小时后,菌丝体顶端细胞形成鼓     

γ-亚麻酸高产菌株的选育及发酵产物的分离提取

以深黄被孢霉AS3.3410为出发菌株发醇产生γ-亚麻酸,其菌体得率为10%,油脂含量为27%,γ-亚麻酸含量为3.3%。经过紫外线诱变处理。得到变异株M_6,其菌体得率为25%,油脂含量为32.8%,γ-亚麻酸含量为8.84%。传代实验表明,M_6具有良好的遗传稳定性。经摇瓶发酵条件试验,选出了最佳培养基配方,以10升罐进行发酵,结果为:菌体得率29.3%,油脂含量44.7%,γ-亚麻酸含量9.44%。菌体油脂提取方法的研究表明,以乙醇和正己烷对湿菌体进行分步抽提效果较好。     

丝状真菌被孢霉产生油脂的研究

被孢霉的三个菌株Mortierella sp.M10,M13与M14生长在以葡萄糖为碳源、尿素为氮源的液体培养基中,所得到的菌丝体内堆积含γ-亚麻酸的油脂。油脂产率以M10菌株为高,而油脂中的γ-亚麻酸含量却以M14菌株为高。这种油脂的脂肪酸中,所含饱和脂肪酸主要有豆蔻酸(C14:0),棕榈酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0);所含不饱和脂肪酸主要有棕榈油酸(C16:1),油酸(C18:1),亚油酸(C18:2)以及γ-亚麻酸(C18:3,n-6)。上述被孢霉菌株的培养物接种在含葡萄糖、尿素的培养基中生长大约48小时后,菌丝体顶端细胞形成鼓胀球状,此后仍继续胀大。菌体细胞形态的这种特异变化,可能与胞内油脂的累积有关。     

高山被孢霉产花生四烯酸发酵条件的研究

通过一株高山被孢霉M_(20)(Mortierella alpina)产花生四烯酸的摇瓶发酵研究,确定了其最佳发酵培养基组成及最适摇瓶发酵工艺条件。摇瓶实验确定的最佳培养基组成为(g/L):玉米粉水解液葡萄糖150,酵母粉15,KH_2PO_4 3.0,NaNO_3 3.0,MgSO_4·7H_2O 0.5。最佳发酵工艺条件为:初始pH6.5,装液量为50ml/500ml摇瓶,摇床转速150r/min,温度在菌体生长前三天控制在25℃培养,以后调至20℃培养。在此条件下,发酵培养被孢霉的生物量、菌体总油脂及花生四烯酸分别高达35.5g/L、13.2g/L及2.2g/L,在15L及1000L自动机械搅拌罐进行发酵试验,AA产量分别高达1.86g/L及1.70g/L。