Mallory氏胰岛细胞染色法的改良

目的:为了更清晰地显示胰岛的A细胞、B细胞和D细胞。方法:zenker液固定,分别用苏木精-伊红和改良的Mallory氏法染色。结果:苏木精-伊红染色法,不易区分胰岛内三种细胞,而采用改良的Mallory氏染色方法,能够清晰地显示A细胞、B细胞和D细胞。结论:改良的Mallory氏染色法能够清楚的显示胰岛内三种细胞结构,为实验教学提供了优良的切片标本。     

菲牛蛭消化系统的组织学和组织化学研究

利用解剖、HE和AB-PAS染色技术研究了菲牛蛭消化系统的形态结构及组织化学特征。结果表明, 菲牛蛭消化系统由消化管和单细胞唾液腺组成。消化管包括口、咽、食道、嗉囊、肠、直肠和肛门。口开孔于前吸盘腹中部, 口腔内有3片呈三角形排列的颚片, 颚片由辐射肌和横纹肌构成, 其脊上具单列细齿, 可切开寄主皮肤。单细胞唾液腺开口于颚片两侧的乳突上, 可分泌蛭素; 咽呈短球形, 由黏膜层、肌层和外膜构成,肌层发达; 食道短而窄, 黏膜层见少量杯状细胞和大量嗜酸性颗粒; 嗉囊两侧有10对侧盲囊, 最后一对侧盲囊最长且延伸至肛门两侧; 肠部尚无明显分化, 可细分为肠和直肠。肠前段腔内有多个盲囊状的细管, 形成 肠内盲囊, 黏膜层具较多腺细胞, 黏膜下层发达, 具丰富的血管和淋巴细胞; 直肠肠腔明显大于肠的肠腔, 褶皱高度明显比肠的低, 上皮细胞间可见少量杯状细胞。AB-PAS染色结果显示菲牛蛭消化管黏液细胞有4种类型: Ⅰ型被染成红色, Ⅱ型被染成蓝色, Ⅲ型染成紫红色, Ⅳ型染成蓝紫色。口腔部黏液细胞分布以Ⅳ型和Ⅲ型为主, 少量Ⅱ型与Ⅰ型黏液细胞, 咽部以Ⅲ型为主, 食道、嗉囊、肠前部以及直肠壁均无酸性和中性黏液细胞存在, 肠中后部以Ⅰ型为主, 肛门壁存在大量的Ⅱ型黏液细胞。讨论了菲牛蛭消化管结构特点与食性的关系等问题, 发现肠是菲牛蛭整个消化管最主要的消化和吸收场所, 且消化管特殊的结构特征决定了菲牛蛭主要以血液作为食物来源。     

香蕉33个品种的RAPD研究

利用RAPD技术对香蕉（Musa nana Lour.)33个品种的遗传变异进行了研究,从249个随机引物中筛选出18个有效引物,用它们共扩增出192条DNA带,其中183条为多态性带,占95．31％,平均每个引物扩增的DNA带数为10．67条,利用18个有效引物扩增的192条DNA带对香蕉33个品种间的亲缘关系进行UPGMA聚类分析,计算出33个品种间的平均遗传距离为0．3412。在此基础上建立了香蕉33个品种的DNA分子系统树状图。该系统将香蕉33个品种划归A,B,C和D4个群,其中A群20个品种,B群5个品种,C群2个品种,D群6个品种;A群又可以分为3个亚群。对香蕉遗传多样性分子基础进行了探讨。     

异育银鲫上皮瘤中黏液细胞类型、分布和分泌方式

采用苏木精.伊红(H.E)和阿利新蓝.过碘酸雪夫试剂(AB-PAS,AB染液pH 2.6)染色方法对异育银鲫(carassius auratus gibelio♀×Cyprinus carpio var.singuonensis♂)上皮瘤组织中黏液细胞的类型、分布、大小和分泌方式进行了研究.根据AB-PAS的染色结果,上皮瘤组织中黏液细胞分为4种类型:染成红色的I型黏液细胞,只含有PAS阳性的中性黏多糖;染成蓝色的Ⅱ型黏液细胞,只含有AB阳性的酸性黏多糖;染成紫红色的Ⅲ型黏液细胞,主要含有PAS阳性的中性黏多糖,同时含有少量AB阳性的酸性黏多糖;染成蓝紫色的Ⅳ型黏液细胞,主要含有AB阳性的酸性黏多糖.同时含有少量PAS阳性的中性黏多糖.Ⅰ型和Ⅱ型黏液细胞的数量相对较少,以分散状态分布于上皮瘤组织的上皮细胞之间,以其整个细胞破坏的全浆分泌方式进行分泌.Ⅲ型和Ⅳ型黏液细胞的数量较多,成团的形式分布在上皮瘤组织小叶中央,同样以整个细胞崩解死亡而消失的全浆分泌方式进行分泌.当患病鱼受到刺激时,Ⅲ型和Ⅳ型黏液细胞分泌十分旺盛,分泌物排出后覆盖在上皮瘤组织表面,形成白色的黏液层,黏液细胞崩解死亡消失后在上皮瘤组织中留下许多空洞.患病鱼黏液细胞中.Ⅲ型黏液细胞最大,大小为(19.02±3.21)μm×(14.42±2.69)μm;其次是Ⅳ型黏液细胞,大小为(15.97±3.31)μm×(12.96±2.81)μn;Ⅱ型黏液细胞较小,大小为(13.35±3.81)μm×(11.05±3.00)μm;Ⅰ型黏液细胞最小,大小为(11.73±2.45)μm×(7.71±0.97)μm.各类型黏液细胞的长轴之间及短轴之间均存在显著性差异(P＜0.05).     

观察"胞间连丝"实验的改进

观察“胞间连丝”是生物学专业及中学生物学演示不可缺少的实验。实验材料一般选用柿核胚乳 ,作徒手切片及染色来观察。本人在多年实验教学过程中 ,曾在前人介绍处理染色基础上进行改进 ,切片用 1%龙胆紫 - 1%次甲基兰(或甲基兰 ) - 1%酸性品红复染法进行观察 ,可当堂完成 ,方法简易 ,效果较好 (《徽州师专学报》自然版 ,1990 .1.)。近两年来 ,又在此基础上对染色方法进一步改进 ,切片改用 0 .2 %龙胆紫溶液染色 10 min左右 ,然后水洗观察 ,可见柿核胚乳细胞壁被染色浅紫色 ,而胞间连丝被染成紫色 (或深紫色 )。此染色方法更简便单一 ,效果…     

北京鸭产卵期输卵管管状腺细胞超微结构研究

用电子显徽镜对北京鸭输卵管管状腺细胞进行观察。鸭输卵管由五部分组成:漏斗、蛋白分泌部、峡部、壳腺和阴道。蛋白分泌部的管状腺细胞有四种类型。A型细胞有电子密度深色颗粒;B型细胞充满了无定型低电子密度物质;C型细胞具有非常明显的粗面内质网和高尔基复合体;D型细胞是由致密的颗粒和低电子密度的颗粒所组成,腔内充满分泌颗粒。我们在这篇文章中分析了蛋白分泌周期的四个不同阶段。     

介绍用洋葱进行质壁分离和复原实验的一种方法

做高中生物实验“观察植物细胞的质壁分离和复原”时,如果没有紫色洋葱,可以用白色洋葱做实验材料。白色洋葱表皮细胞在显微镜下显得比较透明,破损的细胞和完整活细胞的颜色差别不大,所以,学生寻找活细胞和辨别质壁分离与复原状态有些困难。实验时,先将撕取的洋葱表皮用碱性活体染色剂进行短时间染色,就能使被撕破而暴露的细胞质和细胞核染成深色,而活细胞则着色不明显。这样,以破损细胞的深色衬托活细胞的淡色就可以弥补上述的不足之处。实验方法：载片中央滴l～2滴1％。亚甲蓝溶液或1％0龙胆紫溶液,盖上盖玻片,染色lmin左右,…     

神经元限制性沉默因子与胰岛素在成年小鼠胰腺中的表达

目的:观察神经元限制性沉默因子(NRSF)在正常成年小鼠胰腺组织中的表达情况。方法:以6～8周BALB/c小鼠胰腺为实验材料,制备冰冻切片,与地高辛标记的NRSF cDNA探针进行原位杂交,观察mRNA表达,并结合免疫组织化学方法检测NRSF和胰岛素的表达。结果:原位杂交显示,NRSF mRNA仅表达于胰腺组织外分泌部腺泡腺细胞中,胞浆呈蓝紫色,与免疫荧光组织化学检测NRSF蛋白表达的部位一致,而胰岛细胞中无NRSF mRNA及蛋白的表达。免疫酶组织化学染色显示,胰岛大部分细胞中表达胰岛素,胞浆染成黄棕色,而腺泡腺细胞则不表达胰岛素。结论:NRSF与胰岛素不存在共定位关系,即成年小鼠胰岛细胞不表达NRSF,而表达胰岛素。提示NRSF蛋白表达的消失可能是建立完全分化成熟、具有完好分泌反应的胰岛细胞所必需的。     

紫色甘薯品系6种酶的同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,选用过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、细胞色素氧化酶(CYT)、淀粉酶(AMY)、酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)等六种酶的同工酶系统对14个紫色甘薯品种(系)进行了同工酶分析.结果表明:过氧化物酶(POD)、细胞色素氧化酶(CYT) 、超氧化物歧化酶(SOD)等三种酶的同工酶酶谱很丰富,分别有13、11、10条酶带;淀粉酶(AMY)、酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)等三种酶的同工酶酶带相对较少,分别为4、7、7条.聚类分析结果表明,所有供试紫色甘薯品系或品种分成7类:I类包括品系A1、A2、A7;II类包括品系B1～B3;III类包括品系B7和B8;IV类只有品系B9;V类包括品系A3、A4、A6;VI类只有品系A5;VII类只有品种"山川紫".     

黄颡鱼脑垂体的组织学和超微结构的研究

利用组织切片和超薄切片对性成熟雌黄颡鱼的脑垂体进行了组织学和超微结构的研究.黄颡鱼的脑垂体由垂体神经部和垂体腺部组成,垂体腺部又由前叶、间叶和后叶三部分构成.舍有嗜酸性和嗜碱性细胞.促肾上腺皮质激素细胞和催乳激素细胞组成腺垂体前叶,促性腺激素分泌细胞、促生长激素分泌细胞、促甲状腺激素分泌细胞组成腺垂体间叶,腺垂体后叶由促黑色素激素细胞构成.     

基于线粒体基因对细痣疣螈种组系统发育关系的探讨及物种修订建议

该文基于两段线粒体基因COI和ND1 -ND2部分序列片段构建了细痣疣螈种组的系统发育关系,结果显示该单系群内包含了四个明显的进化支系(A、B、C、D).A支系与B、C支系构成姐妹群关系;A支系包含了细痣疣螈、海南疣螈、老挝疣螈和“越南疣螈”以及另外两个来自越南未被命名的种群;C支系代表了一个新的独立进化支,可能是一个隐存种;C支系与B支系构成姐妹群关系.此外,来自模式产地的越南疣螈单独构成支系D.该文结果不支持以往细痣疣螈种组部分物种的划分,建议对该种组进行新的分类修订.该文强调了在分类研究中应该重视使用来自模式产地的样品并进行广泛的地理居群采样.     

杏仁核注射Aβ 25-35后大鼠脑内细胞周期蛋白、tau蛋白和Bax蛋白的异常表达

近年来研究发现,阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)病人脑内神经元细胞周期相关蛋白的异常表达与AD相关病理改变存在关联。为探讨β-淀粉样蛋白(β—amyloid,Aβ)的毒性作用能否导致成年脑神经元表达细胞周期相关蛋白,以及细胞周期相关蛋白表达与神经损伤之间的关系,我们运用免疫组化、积分光密度分析等方法对Aβ25-35多肽片段单侧杏仁核注射的大鼠脑进行了研究。结果显示,Aβ25-35注射的大鼠脑内除了有与神经纤维缠结相关的磷酸化tau蛋白和凋亡相关蛋白Bax蛋白水平增加外,术后7d细胞周期相关蛋白cyclin A和cyclin B1蛋白在神经元内异常表达,但术后21d时cyclin A的表达有所降低,而cyclin B1在脑内神经元中已检测不到;免疫荧光双标结果显示Aβ25-35注射后7d的大鼠脑内有较多的cyclin B1和Bax、cyclin B1和磷酸化tau蛋白共存的神经元,而Bax与磷酸化tau蛋白阳性信号很少共存在同一细胞上。以上结果提示,Aβ可导致成年脑神经元表达细胞周期相关蛋白,这些神经元可能会通过与Bax相关的凋亡途径死亡,或首先导致与AD神经纤维缠结相关的tau蛋白磷酸化。     

在胚胎发育中第三脑室室管膜细胞表达乙酰胆碱转移酶

目的在研究胚胎14天（E14）大鼠端脑放射状胶质细胞与胆碱能前体细胞的关系时发现,第三脑室室管膜细胞和侧脑室脉络丛上皮细胞均表达胆碱能神经元标志性蛋白,即乙酰胆碱转移酶（Choline acetyltransferase,ChAT）。方法E14大鼠端脑冠状连续切片,采用免疫组织化学染色法,分别对放射状胶质细胞标志性蛋白,即波形蛋白（Vi men-tin）和乙酰胆碱转移酶进行免疫组织化学染色。结果E14大鼠端脑室管膜细胞呈单层衬于第三脑室,在背中侧的室管膜细胞由单层增殖为复层。上皮基底部与邻近组织分界不清,这些细胞的游离面胞质呈乙酰胆碱转移酶免疫反应阳性,在邻近的第三脑室周围局部形成乙酰胆碱转移酶阳性细胞群。在相邻切片的同一区域内复层室管膜细胞波形蛋白免疫反应阴性。结论第三脑室背中侧室管膜细胞作为神经干细胞分裂、增殖,产生胆碱能前体细胞,并向第三脑室周围组织迁移,形成基底前脑神经核团的Ch5,Ch6胆碱能神经细胞群。     

体外培养主动脉细胞钙化作用研究

目的：初步探讨主动脉钙化的机制。方法：外殖块法分离培养家兔主动脉平滑肌细胞,进行vonKossa染色以显示钙化,生化法检测细胞内外不溶性钙。放兔法测定培养上清骨钙素的含量。RT-PCR方法检测X型胶原mR-NA的表达。结果：25-羟基胆固醇（A组）和β-甘油磷酸盐（B组）分别培养的传代细胞均可见多个细胞结节,且细胞结节von kossa染色阳性;而对照组（C组）无细胞结节形成,von kossa染色阴性,前二者每孔不溶性钙沉积量,以及培养上清中骨钙素含量明显高于后者,且A、B两组X型胶原mRNA的表达为阳性。结论：25-羟基胆固醇、β-甘油磷酸盐均可促进主动脉中膜细胞发生钙化,主动脉中膜在钙化过程中与成骨细胞相似,骨钙素分泌增多且有X型胶原mRNA的表达。     

关于"观察DNA和RNA在细胞中的分布"实验的改进建议

人教版高中新课标教材“分子与细胞”中“观察 DNA和RNA在细胞中的分布”这一实验效果不理想, 即细胞核内的DNA很难被染料染成实验预期中的绿色。笔者反复重做该实验后得出以下结论:实验失败的关键在于实验前的酸处理对染色效果的影响以及酸对DNA的结构的影响。     

中国某些野生和栽培茶的核型研究

研究了茶的4个变种和广东野生毛叶茶等共12个材料的核型。所有材料的染色体数目均是2n=30,为二倍体。所有中国大叶变种(越南大叶除外)(Cametlia sinensis var. macrophylla)和阿萨姆大叶变种(C. sinensis var. assamica)均具比较对称或原始的“2A”核型;中国小叶变种(C.sinensis var.bohea)(“铁观音”品种除外),掸部变种(C.sinensis var. shan form)和广东野生毛叶茶(C. ptilophylla)均具较不对称或较进化的“2B”核型。根据核型特征,植物习性和地理分布,作者认为中国四川和云南可能是茶的起源中心,向东或北迁移,演变为中国小叶变种;向南移则演变为阿萨姆变种和掸部变种。     

柞蚕幼虫期神经系统一氧化氮合酶的NADPH-d组织化学

运用NADPH-d组织化学整体染色方法研究柞蚕Antheraea pernyi Gu rin-Meneville幼虫神经系统中一氧化氮合酶阳性细胞的分布、数量及形态特征。结果表明,柞蚕各龄期幼虫中枢神经的脑及各神经节中都有一氧化氮合酶阳性反应,阳性神经元根据其形态大小和染色特性可分为A,B,C3种类型:A型细胞沿神经节中线分布,阳性反应较强,胞体长径约30~70μm,各神经节中的数量恒定。B型细胞多分布于神经节周边部分,阳性反应较弱,胞体长径约8~20μm,各神经节中的数量变化较大,随着龄期增加有减少的趋势。C型细胞分布于咽下神经节和第8腹神经节,在3种细胞中阳性反应最强,胞体长径约16~50μm。     

脑膜炎奈瑟氏菌血清学分群的研究III．不同血清群菌株的毒力研究

采用小鼠Lnc的方法测定各血清群脑膜炎奈瑟氏菌株的毒力,得到了较理想的结果。从我崮分离出的1 06株地方菌株的毒力结果如下：57株A群、B群和c群菌株(其中从痫人脑脊髓液或血液分离的z3株,其余菌株从带菌者鼻咽部分离的)比49株新血清群菌株(包括7个新血清群)的毒力强,I一2．905,0．005>P> 0．001;32株A群菌株(其中从jiii人分离的1 7株)与13株B群菌株(其中从病人分离的5株)的毒力无差别, t=1．0279,0,4>p>0．2;32株^群菌株与l 2株c群菌株的毒力无差别,t=1．0032,0．4>p>0．2;32株^群菌株比49林新血清群菌株的毒力强,f=2．68 6,0 I)I>P>0．005;A群17株病人株与15株带菌者菌株的毒力无差别,t=0．48,0．7>p>0．6。1966—1977年间不同年份分离出的A群,B群和c群菌株的毒力无差别;从我国“南方”和“北方”各地分离出的A群,B群和c群菌株的毒力也相同。从病人脑脊髓液分离出的菌株亦有毒力较弱的菌株,而从带菌者鼻咽部分离出的至今未发现病人的1486群菌株有毒力较强的菌株。毒力和发病的关系尚需深入研究。     

小鼠胚胎及生后发育的肾上腺皮质的组织学与组织化学研究

胚龄１３日小鼠肾上腺结构尚未形成,在肾附近可见两群细胞。１５日两群细胞融合,呈一新月形小体,外包被膜,内含两类细胞,一类胞体较大,染色较深,另一类胞体较小,染色浅。１７日,胞体大染色深的细胞形成团索状,发育成皮质细胞;另一类细胞则迁移至中央,形成髓质。组织化学研究显示,胎龄１５日及以后的肾上腺皮质细胞３β－羟甾体脱氢酶（３β－ＨＳＤＨ）、脂类、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、亮氨酸氨基肽酶（ＬＮＡｓｅ）均为阳性。以上一些酶活性的出现提示１５日及其后胚鼠,生后１～６０天小鼠的肾上腺皮质都有分泌甾体激素之功能。     

慢性低O2高CO2对大鼠脑组织的损伤作用及川芎嗪对其影响的研究

目的：探讨慢性低O2高CO2条件下脑烯醇化酶（NSE）、蛋白S100、超微结构等改变及川芎嗪对其影响。方法：将SD大鼠分为正常对照组（A组）,低O2高CO2组（B组）,低O2高CO2＋川芎嗪组（C组）,采用免疫组织化学、透射电镜方法,观察平均肺动脉压（mPAP）、颈动脉压（mCAP)、血清NO浓度、脑NSE、S100变化及脑超微结构等改变。结果：①B组mPAP明显高于A组,C组低于B组,三组间mCAP无明显差异。②B组血清NO浓度低于A组（P＜0．01）,C组血清NO浓度高于B组（P＜0．01）。③B组比A组NSE、S100吸光度值降低,C组比B组NSE、S100吸光度值增高。④B组神经元、神经胶质细胞水肿,C组神经细胞损害明显减轻。结论：慢性低O2高CO2脑NSE、S100降低,川芎嗪对脑损害有保护作用。