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广东两株人免疫缺陷病毒的分离和鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
从我省两名经性途径感染艾滋病的病人中采血,分离外周血单核细胞(PBMCs),将其与正常人PBMCs共培养分离人免疫缺陷病毒(HIV),3周后检测上清HIV-1p24抗原(ELISA法)超过阈值。将共培养第四周细胞和上清分别感染H9细胞(T细胞淋巴瘤传代细胞),一周后检测HIV-1 p24怕,证明有病毒生长。用HIV-1 ENV基因引物的套式聚合酶链反应(Nested PCR)证实,两株新分离的病毒 相似文献
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我国首次发现的HIV—1和HIV—2双重感染样品中病毒部分基因的序列特 … 总被引:1,自引:0,他引:1
上海市卫生检疫局送检了一例HIV-1和HIV-2抗体检测均呈阳性的双重感染样品,对其感染的HIV前病毒的gag和env基因区进行了序列分析,首次阐明我国发现的HIV双重感染样品的HIV部分基因特征。从HIV感染者淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中提取前病毒DNA,分别使用HIV-1和HIV-2特异性引特用套式PCR扩增HIV-1和HIV-2 相似文献
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将中国株HIV-1B亚型gp120全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacI中多角体启动子下游,构建成重组转座载体pFastBacI-gp120,利用细菌/杆状病毒(Bac to Bac)表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞Sf9中高效表达了HIV-1的外膜糖蛋白gp120,SDS-PAGE和Western blot分析结果一致,证明表达了2种糖基化程度不同的gp120。 相似文献
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HIV—1 SF2株env基因(120)在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
运用基因重组技术,将HIV-1 SF2株编码外膜蛋白gp120的env基因片段与原核载体pBV220进行重组,构建成质粒pBVSF2env,并在大肠杆菌(E.CoilDH10b)中获得表达,经Westemblot反应证实,该重组蛋白与来自HIV-1感染者的血清(含多克隆抗体)发生特异性反应。 相似文献
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人免疫缺陷病毒1型Rev单链抗体细胞内免疫抗病毒基因治疗研究 总被引:2,自引:0,他引:2
应用抗HIV-1Rev单链抗体细胞内免疫方法,研究在人T细胞和周围血淋巴单核细胞内抗病毒复制的效果,探讨细胞内免疫抗HIV-1基因治疗的可行性。克隆抗HIV-1Rev单链抗抗体(sFv)基因,以逆转录病毒为基因载体,将名装后的含靶基因的逆转录病毒转导至人CD4阳性T-细胞株CEM和SupT1,以及HIV-1阴性自愿者的周围血淋巴单核细胞(PBMC),再分别用不同剂量(MOI)的HIV-1病毒株PN 相似文献
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广西壮族自治区HIV—1流行毒株的基因序列测定和亚型分析 总被引:6,自引:0,他引:6
使用PCR技术对14份广西HIV-1阳性感染者外周血单核细胞(PBMCs)样品进行扩增,获得HIV-1膜蛋白(env)基因的核酸片段,并对其C2-V3及邻区350 ̄450个核苷酸序列进行了测定和分析。结果表明,14份样品中9份为泰国B(B')亚型,5份为E亚型毒株。其中B'亚型毒株的基因离散率为4.2%,与A-E参考亚型及部分B亚型代表株序列相比较,与包括泰国、缅甸及云南德宏在内的B亚型毒株序列十 相似文献
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牛免疫缺陷病毒 (Bovineimmunodeficiencyvirus,BIV )与人免疫缺陷病毒 (Humanim munodeficiencyvirus,HIV)同属反转录病毒科慢病毒属[1] 。BIV基因组 5′端的长末端重复序列 (LTR)起始病毒结构基因和非结构基因的转录[2 ] ,因而许多细胞因子和病毒编码的调节蛋白作用于LTR ,以调节BIV的基因表达。其中Tat蛋白是BIV的反式激活因子 ,可大大提高LTR的转录水平 ,在BIV的基因表达及基因组复制的调节中起重要作用[3 ] 。HIV、马传染性贫血病毒 (Equi… 相似文献
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应用异源双链泳动分析法快速确定(HIV-1)基因亚型 总被引:10,自引:0,他引:10
应用异源双链泳动分析法(Heterouduplex mobility assay,HMA),对来自我国云南、四川、新疆、浙江、广东、福建、天津7省市73份HIV感染者样品,进行了HIV-1膜蛋白(env)基因片段亚型分析。通过HMA能确定亚的有70份,占样品总数的95.89%(70/72)。其中A亚型2.86%(2/70),F亚型2.86%(2/70),泰国B亚型18.58%(13/70),欧美B 相似文献
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HIV—1Gag蛋白在大肠杆菌和重组杆状病毒系统中的高效表达及通用型 … 总被引:1,自引:0,他引:1
将中国株HIV-1B亚型gag全基因序列,克隆杆状病毒表达载体pfastbacI中,构建了重组质粒pfastGag,利用细菌/杆状病毒表达和筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞中高效表达HIV-1Gag蛋白。通过改造原核表达载体pBV220和pET28,构建了一种新的通用型温控原核表达载体质粒pVV5,该载体携带PrPl串联温控启动子及His-Tag纯化标签,利于目的的蛋白表达与纯化。 相似文献
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为了解HIV抗体阳性血浆中的HIV1病毒基因亚型的情况,应用逆转录PCR和DNA序列测定技术,对6份获自高危人群的抗HIV1阳性血浆进行序列分析和基因亚型分型的研究,结果表明均属HIV1B亚型。V3环氨基酸序列分析指出这些HIV1B亚型病毒株与泰国HIV1B亚型病毒株核苷酸和氨基酸序列相似;同时发现HIV1cDNA和氨基酸序列均相同,推测这6份标本可能来自同时感染同一株HIV病毒的感染者。本研究对了解高危人群中HIV1流行的遗传变异和HIV1亚型病毒株的分子流行病分析具有一定的意义。 相似文献
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人免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus,HIV)是引起艾滋病的病原。由于该病的病死率较高,目前尚没有被广泛接受的有效的医治方法,所以世界各国对艾滋病都十分重视。在感染HIV时,HIV首先与靶细胞上的受体(receptor... 相似文献
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广西壮族自治区HIV-1流行毒株的基因序列测定和亚型分析 总被引:12,自引:0,他引:12
使用PCR技术对14份广西HIV-1阳性感染者外周血单核细胞(PBMCs)样品进行扩增,获得HIV-1膜蛋白(env)基因的核酸片段,并对其C2-V3及邻区350-450个核苷酸序列进行了测定和分析。结果表明,14份样品中9份为泰国B(B′)亚型,5份为E亚型毒株。其中B′亚型毒株的基因离散率为4.2%,与A-E参考亚型及部分B亚型代表株序列相比较,与包括泰国、缅甸及云南德宏在内的B亚型毒株序列十分接近,相互之间基因离散率在3.0%-4.4%的范围内;而E亚型毒株的基因离散率为2.1%,与国际E亚型毒株的基因离散率最近,为5.6%,与其它国际参考亚型基因离散率很远,在21.1%-27.3%。根据以上数据及其它资料提示,广西存在B′和E两种亚型的HIV-1的流行,且其B′亚型毒株的传入,与流行在云南德宏州的相同亚型HIV-1毒株密切相关,而E亚型毒株则可能是由泰国经越南传入广西的 相似文献
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在人纤维蛋白原制备工艺中增加S/D处理灭活病毒步骤,TNBP和Tween80终浓度分别为0.3%和1%,在25℃处理6小时能有效灭活指示病毒VSV(〉3.75Log)、Sindbis(〉4.46Log)、HIV(〉3.67Log),盲传三代未检出病毒 相似文献
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人类免疫缺陷病毒1/2型抗体检测酶联免疫试剂盒的研制 总被引:2,自引:0,他引:2
采用二聚体合成肽(HIV-1gp41、gp120、p24和HIV-2gp36)包被酶标板条制备成固相抗原,与鼠抗人IgG单克隆抗体酶标记物、底物TMB及阴阳性参考血清配套制备成HIV抗体EIA试剂盒,专供检测人血清或血浆HIV1/2抗体之用。以荷兰、韩国及万泰试剂作为对照,用该试剂盒对检定所的Panel标准及献血员15550例(其中HCV抗体阳性128例,HBsAg阳性46例)进行检测,四种试剂对检定所Panel标准的13份阳性血清均呈阳性反应,28份阴性血清均为阴性;献血员15550例,四种试剂对其中1份血清均呈阳性反应,经Westernblot试验证实为阴性,四种试剂的阴性检出率均为99.99%。连续制备三批试剂经中国药品生物制品检定所检定,所检项目全部合格;同时委托检定所进行临床考核,47份阳性血清全部呈阳性反应,150份阴性血清全部为阴性。说明该试剂盒具有很好的敏感性和特异性。 相似文献
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Ⅰ型人免疫缺陷病毒逆转录酶在抗感染及AIDS治疗药物的设计中是一个重要的靶分子,并且可作为工具酶应用于逆转录PCR等分子生物学研究中。本研究将HIV-1RT基因经PCR扩增并修饰后克隆入大杆菌表达载体pBV220,所获重组子所表达的HIV-1RT蛋白占菌体总蛋白的8%左右,且经〔^3H〕dTTP掺入法证实该重组HIV-1RT具有RT聚合酶活性。用Q-Sepharose层析柱对重组HIV-1RT蛋白 相似文献