戊型肝炎病毒荧光定量RT-PCR快速检测技术的建立和初步应用

利用DNAMAN软件对GenBank登录的戊型肝炎病毒四个主要基因型代表株的序列进行分析, 选择其高度保守的ORF2区域设计合成引物和探针, 并用包含有扩增区域的核苷酸片段进行体外转录制备标准品cRNA。在对荧光定量RT-PCR的反应条件优化的基础上, 建立了适用于戊型肝炎病毒主要基因型检测的荧光定量RT-PCR检测技术。该检测技术可以有效检测I型和IV型戊型肝炎阳性病料, 而对猪的其它几种疫病阳性病料则为阴性结果, 证实本技术的特异性强、可靠性好。对阳性标准品的检测结果表明, 所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR灵敏度可达2.0×101拷贝/反应, 相比于巢式RT-PCR方法, 其灵敏度高10~100倍以上。在对54份临床样品的检测中, 进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好, 可满足戊型肝炎病毒早期快速诊断的需要。     

戊型肝炎病毒荧光定量RT-PCR快速检测技术的建立和初步应用

利用DNAMAN软件对GenBank登录的戊型肝炎病毒四个主要基因型代表株的序列进行分析, 选择其高度保守的ORF2区域设计合成引物和探针, 并用包含有扩增区域的核苷酸片段进行体外转录制备标准品cRNA。在对荧光定量RT-PCR的反应条件优化的基础上, 建立了适用于戊型肝炎病毒主要基因型检测的荧光定量RT-PCR检测技术。该检测技术可以有效检测I型和IV型戊型肝炎阳性病料, 而对猪的其它几种疫病阳性病料则为阴性结果, 证实本技术的特异性强、可靠性好。对阳性标准品的检测结果表明, 所建立的TaqMan荧光定量RT-PCR灵敏度可达2.0×101拷贝/反应, 相比于巢式RT-PCR方法, 其灵敏度高10~100倍以上。在对54份临床样品的检测中, 进一步证实了该方法快速、灵敏且重复性好, 可满足戊型肝炎病毒早期快速诊断的需要。     

钦州市售贝类GⅡ型诺如病毒污染调查

文章对钦州市售的16种贝类进行GⅡ型诺如病毒污染调查，在采集的342份贝类样品中，共检出阳性样品55份，平均检出率为16.08%。其中牡蛎的阳性率最高，检出率为33.33%；在阳性样品中，病毒平均感染强度为1.66×10⁵copies/g(消化腺)，病毒含量主要集中在104～105copies/g数量级之间，占比为45.45%。研究显示钦州市售贝类中存在较高的诺如病毒污染水平，需要加强对市售贝类诺如病毒污染的持续监测与风险评估，保障消费者的食品安全。     

我国戊型肝炎疫苗和诊断试剂原始创新研究

<正>戊型病毒性肝炎(戊肝)是全球最主要的病毒性肝炎之一,由戊型肝炎病毒(HEV)感染导致。戊肝多数呈自限性,孕妇罹患戊肝的病死率高达20%,慢性肝病合并戊肝、老年人戊肝症状较重、易导致肝衰竭。HEV主要通过肠道传播,常导致大的暴发流行,1986~1988年我国新疆发生一次国内外有文献记载的规模最大的戊肝大流行,共发病     

环渤海地区常见贝类消费状况调查

目的：了解环渤海地区常见贝类消费量及消费习惯等状况,为贝类毒素暴露评估提供基础数据。方法：选择山东省青岛市、山东省烟台市、辽宁省大连市等3个环渤海城市开展调查,由培训合格的调查员以面对面询问的方式填写调查问卷,主要调查消费量最高的季节平均1个月内常见贝类的消费种类、频率、消费量,消费的季节特征,购买、清洗和烹调习惯等内容。贝类的食用量以可食部生重计。采用SPSS 19.0进行数据的统计分析。结果：共调查850人,其中男性466人（54.8%）。消费品种以蛤蜊（92.5%）、扇贝（84.1%）、牡蛎（76.9%）、贻贝（50.2%）为主。烟台市调查对象贻贝的消费比例在3个地区中最高（P<0.05）;烟台和大连扇贝、牡蛎、毛蛤蜊和蛏子的消费比例高于青岛（P<0.05）,而烟台和大连之间没有差异（P＞0.05）;蛤蜊的消费比例在3个城市中没有差别（P＞0.05）。消费量方面,贻贝合计人均消费量最高,为1 370 g/月,其次是蛤蜊,为1 122 g/月。青岛蛤蜊的人均消费量最高,为1 198 g/月;烟台和大连均以贻贝人均消费量为最高,分别为1 963 g/月、826 g/月。贝类消费的卫生习惯方面,55.6%的人吃扇贝会去除内脏,95.2%的人处理完贝类会洗手。在所有调查对象中,贝类毒素的知晓率仅为17.6%（150/850）。结论：3个城市调查对象贝类海产品消费比例和消费量均较高,是贝类毒素和其他贝类相关危害因子的高风险人群,应重点关注。     

枸杞岛养殖贻贝中诺如病毒污染情况调查与分析

为了解养殖场内贻贝的诺如病毒（Norovirus,NoVs）污染情况和基因型分布特点,分别于2019年4月和9月在浙江省舟山市枸杞岛后头湾和龙泉村贻贝养殖场近岸和远岸区域进行贻贝样本采集及诺如病毒检测,共检测670只贻贝样本,诺如病毒阳性率约9.9%（66/670）。离人类活动区域较近的贻贝,诺如病毒阳性率占总阳性率的72.7%（48/66）,远岸的贻贝诺如病毒阳性率占总阳性率的27.3%（18/66）。共检测到6种诺如病毒基因型,分别为GI.3（36.4%）、GI.4（19.7%）、GII.12（18.2%）、GII.17（13.6%）、GII.3（10.6%）和GII.2（1.5%）。研究表明,枸杞岛养殖场中诺如病毒污染率较高,涉及基因型较多,人类活动对养殖场内贻贝中诺如病毒的富集量具有一定影响。     

慢性戊肝重叠急性乙肝患者一例报道并文献复习

目的:探讨慢性戊型病毒性肝炎合并急性乙型病毒性肝炎的发病机制、诊断、治疗及其预后。方法:回顾我院收治的一例慢性戊型病毒性肝炎合并急性乙型病毒性肝炎患者的临床资料,并结合文献探讨戊型病毒性肝炎及乙型病毒性肝炎的发病机制,总结其诊断及治疗经验,并评价其预后。结果:该患者戊肝抗体长期阳性,被诊断为慢性戊型病毒性肝炎,但合并急性乙型病毒性肝炎后,经治疗乙肝表面抗原转阴后戊肝抗体Ig M也阴转。结论:慢性戊型病毒性肝炎合并急性乙型病毒性肝炎患者经治疗后可同时出现乙肝表面抗原转阴,戊肝抗体阴转,预后可较好。     

戊型肝炎病毒衣壳蛋白同源二聚体的相互作用结构域

为了探讨戊型肝炎病毒衣壳蛋白同源二聚体形成的关键区域和相互作用结构域,以及二聚体形成与主要天然中和表位的形成之间的关系,通过末端缺失、定点突变技术研究戊型肝炎病毒（HEV）ORF2的aa394-aa606片段NE2的聚合现象,发现其C端的aa597-aa602（AVAVLA）疏水区是该片段同源聚合的核心区域,提高该区域氨基酸的亲水性将妨碍聚合现象的发生;半胱氨酸化学交联实验表明NE2形成同源二聚体时,aa597在空间位置上相接近,处于可生成化学键的距离,提示所处区域为疏水聚合的作用结构域;通过Blast程序估算核心区域的天然突变率,发现其疏水性高度保守;N端缺失实验表明,至少65个氨基酸既不影响同源聚合也不直接参与主要的天然中和表位的形成,但可协助中和表位构象的形成,而这种协助作用可被ORF2的末端肽段所代替。Aa597-aa602（AVAVLA）疏水区为戊肝病毒衣壳组装的第一步骤的核心区域,并与重要的天然中和表位的形成直接相关,从而为戊肝病毒疫苗的研究提供更详细的信息。     

从我国肝炎患者中检出GBV一C型肝炎病毒RNA

从我国肝炎患者中检出ＧＢＶ一Ｃ型肝炎病毒ＲＮＡ王海林,夏宁邵,谭文杰,詹美云,苏文金,侯云德（中国预防医学科学院病毒研究所,北京１０００５２）关键词ＧＢ一Ｃ型肝炎病毒,逆转录多聚酶链式反应在我国病毒性肝炎病人中,约有１０％的病人为非甲一戊型肝炎,这些...     

戊型肝炎疫苗的研究进展

戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)引起的一种非甲非乙型病毒性肝炎。HE主要在亚非拉等发展中国家流行,但在欧美等发达国家也有散发病例。HEV是一种非包膜单股正链RNA病毒,具有四种基因型,仅有一种血清型,所以有望能够研究出对HEV所有基因型均有保护性的疫苗。因HEV尚无合适的细胞培养系,目前,戊肝疫苗研究开发主要集中于基因工程疫苗。戊肝病毒开放阅读框2(ORF2)含有重要的中和抗原表位,目前已有ORF2许多片段在不同表达系统中成功地进行了表达,如原核、昆虫、酵母、植物细胞等表达系统,且表达产物均具有一定的免疫原性。虽然戊肝疫苗的研究已开展多年并取得了很大进展,迄今全球仍无戊肝疫苗被批准上市。但有两种戊肝候选疫苗现已进入Ⅲ期临床试验阶段,有望成为预防戊肝的有效手段。     

乙戊型肝炎病毒重叠感染的研究进展

戊型肝炎(简称"戊肝")是发展中国家发病率最高的急性病毒性肝炎,疾病负担较重,近年来发达国家也出现越来越多散发的本土病例。我国慢性乙型肝炎(简称"慢乙肝")人群基数大,慢乙肝患者重叠感染戊肝病毒之后,可加重患者病情,增加肝硬化、肝衰竭以及死亡的发生风险。本文拟对乙型肝炎病毒重叠感染戊肝病毒的流行病学特征、临床特征及预防措施进行综述。     

基因Ⅰ、Ⅳ型戊型肝炎病毒高灵敏度通用引物的设计和初步应用

设计针对国内流行的戊型肝炎病毒(HEV)基因Ⅰ、Ⅳ型,在这两型序列的保守区域设计了一套RT-PCR引物——E引物,并将E引物与目前较常用的3对通用引物(Meng、ConORF1和ConORF2引物)比较了检测基因Ⅰ、Ⅳ型HEV的灵敏度。对基因Ⅰ型HEV,E引物能检出的稀释度为105,参考引物能检出的稀释度为10^2～10^4;对基因Ⅳ型HEV,E引物能检出的稀释度为10^2,参考引物能检出的稀释度为10^1～10^2。在17份HEV-IgM阳性血清中,E引物检出5份,检出率为29．4％;参考引物只能检出1份或2份,检出率最高为11．8％。E引物在33份HEV-IgM阳性的隐性感染血清中检出6份,阳性率18．2％;在79份HEV-IgM阳性的临床肝炎血清中检出36份,阳性率45．6％。以上结果初步表明,对于在国内流行的基因Ⅰ、Ⅳ型HEV,E引物的检测灵敏度要高于目前常用的通用引物。     

消化道传播病毒性肝炎研究进展

病毒性肝炎是由多种不同肝炎病毒引起的,以肝脏损害为主要表现,具有广泛流行性和严重传染性的一类疾病,严重危害人类健康,是我国目前重大的公共卫生问题之一。迄今鉴定出的具有明确致病性的肝炎病毒主要是甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)和戊型肝炎病毒(HEV),分别引起甲、乙、丙、丁、戊型肝炎。病毒性肝炎按传播途径的不同可以分为两类,一类是经肠道外传播的病毒性肝炎,包括乙、丙、丁型肝炎;另一类是经肠道(即消化道)传播的肝炎病毒,包括甲肝和戊肝,其发病有季节性,可呈暴发流行。本文旨在对经消化道传播的病毒型肝炎(甲肝、戊肝)的病原学、流行病学特征及其影响因素、控制和预防作一综述,以期对其流行和科学防控研究提供参考。     

大连地区海生物中致病性弧菌及气单胞菌分布的研究

本文首次报道了大连地区海产品中致病性弧菌及气单胞菌生态分布的研究结果。从152份海产品中共检出88株致病性弧菌及气单胞菌,检出率为57.9％.在检查欧氏六线鱼、太平洋鲱鱼、蓝色马鲛;蝼蛄虾;紫贻贝、杂色蛤仔和毛蚶共7种海产品中,检出9种致病性弧菌和1种气单胞菌,即溶藻弧菌、副溶血性弧菌、麦氏弧菌、少女鱼弧菌、弗尼斯弧菌、拟态弧菌、河弧菌、非01群霍乱弧菌和创伤弧菌。鱼虾类中菌株的检出率明显高于贝类。检出菌株中溶藻弧菌所占比例最高(54.5％),其次为副溶血性弧菌(27.3％)。首次从海生物中分离出嗜水气单胞菌、少女鱼弧菌等致病原因菌株.     

山东省蚊虫乙脑病毒携带状况及分子流行病学研究

为探索中国山东省蚊虫中流行性乙型脑炎（简称乙脑）病毒的携带状况,研究其分子流行病学特征,本研究于2017年和2019年夏季,在济宁微山县、临沂莒南县、东营垦利区、淄博淄川区、烟台龙口市、济南历城区（2017年）和济阳县（2019年）等6个监测点采集蚊虫,分拣分装研磨后,提取上清RNA,使用荧光定量PCR实验检测乙脑病毒核酸,采用最大似然法估算蚊虫中乙脑病毒的携带率,并对阳性标本进行乙脑病毒PrM基因的扩增测序和系统发生学分析。共采集蚊虫标本36 015只,其中三带喙库蚊26 969只,为优势蚊种。所有蚊虫分为605份标本进行检测,共检出乙脑病毒核酸阳性标本100份,分别来自三带喙库蚊（95）、骚扰阿蚊（2）、中华按蚊（2）和淡色库蚊（1）。2017年和2019年山东省监测点蚊虫JEV总体感染率分别为4.03‰和1.98‰,不同年份不同监测点的蚊虫中乙脑病毒感染率有较大差异。基于PrM基因的系统发生学分析显示本研究的阳性标本均为基因1型乙脑病毒。本研究证明了山东省蚊虫中存在持续性的基因1型乙脑病毒循环,其感染率随时间和地区的不同而呈现动态变化,加强人群中乙脑疫苗的接种是保持全省乙脑发病处...     

应用逆转录PCR检测海产贝壳类中的甲型肝炎病毒

污染水体中生长的贝壳类是传播甲型肝炎的重要媒介之一,本文介绍了用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测贝壳类中甲型肝炎病毒(HAV)的方法。贝壳类中HAV的浓集回收采用洗脱-沉淀法并加以改进,30g贝肉中的病毒浓集回收在1.5~2.0m l上清液中。RT-PCR检出限为回收样品经二次扩增后10-2稀释度。从7种39份采自大连近海海域的贝壳类样品中,用该法检测出阳性样品4种10份,阳性率为26%。说明各种贝壳类有不同程度的污染。     

丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片的制备及临床评价

为了制备丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片,并对其临床应用价值进行评价,将基因工程表达的丙型肝炎病毒分片段抗原,点至经特殊处理的玻片上,制成蛋白质芯片.收集来自三家临床单位用于临床验证的905份血清标本.分别用丙肝病毒分片段抗体检测蛋白质芯片、ELISA丙肝病毒抗体检测试剂进行检测.部分样本同时采用进口RIBA抗体检测试剂进行了检测,分别比较蛋白质芯片法与ELISA法以及RIBA试剂的符合率.结果表明：a.905份血清标本,ELISA法检出阳性294份,阴性611份.阳性标本用蛋白质芯片法检测,融合抗原292份显示阳性结果、2份阴性结果,根据蛋白质芯片的核心抗原,以及NS3, NS4,NS5分片段抗原综合判断确定阳性样本288份阳性,阴性样本2份,4份样本结果不确定.ELISA法检出的611份阴性标本用两种蛋白质芯片法检测,检出阴性均为611份.两种蛋白质芯片法与ELISA法的阳性符合率分别为99.3%和98.9%,与ELISA法的阴性符合率均为100%.用RIBA 试剂检测6份ELISA法为阳性,蛋白质芯片法为非阳性的样本,结果均为非阳性.b.290份经 RIBA试剂确认的阳性标本104份,单片段阳性标本66份,阴性标本120份,用蛋白质芯片法检测,检出阳性标本103份,单片段阳性标本61份,阴性标本126份,二者具有很高的符合率（P＞0.01）.丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片,检测灵敏度和特异性高于ELISA法,对血清样本的确认程度与进口的RIBA试剂高度一致,具有操作简便,费用低廉的特点,是一种新型、高效的体外诊断试剂.     

不同戊肝抗原检测抗-HEV IgM反应性研究

目的比较不同戊肝抗原检测抗-HEVIgM反应性。方法用HEVE30、E42、E33合成肽和HEVORF-2重组抗原建立酶免疫试验（EIA）检测肝病患者和健康人群中抗-HEVIgM。结果60份抗-HEV阳性血清中,用E30、E42、E33及重组抗原包被检测抗-HEVIgM,阳性率分别为76.6%,26.6%,18.3%,66.7%。用E30抗原进一步检测戊肝急性期及恢复期血清,抗HEVIgM阳性率为90%及3.3%。结论以HEVE30为抗原的EIA特异性强、灵敏度高,是戊型肝炎早期诊断实用可靠的方法。     

应用抗体捕捉聚合酶链反应(AC/PCR)检测贝类甲型肝炎病毒污染

污染水体中生长的贝类是传播甲型肝炎的重要途径之一。本文介绍了一种抗体捕捉后进行ＰＣＲ扩增来检测贝肉中甲肝病毒（ｈｕｍａｎｈｅｐａｔｉｔｉｓＡｖｉｒｕｓ,ＨＡＶ）的方法。贝肉中ＨＡＶ的浓集回收采用洗脱一沉淀法井加以改进,用脊髓灰质炎病毒作为指示病毒,经二次沉淀后病毒的回收经率为２６％,３０克贝肉中的病毒浓集回收在１．０～１．５ｍｌ上清液中。此方法计算检测限＜３０－３００ＨＡＶ／３ｇ贝肉。从１４份大连海域标本中,用该法检测出阳性标本７份,阳性率为５０％。此浓集病毒的方法还可应用于检测贝肉中污染的脊髓灰质炎病毒、诺瓦克病毒、轮状病毒等其它病毒。     

乙肝疫苗的研究概况

我国是病毒性肝炎的高发区。肝炎病毒包括至少５种：甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）、乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）、丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）、戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）,其中尤其以乙型肝炎病毒危害最严重。在我国ＨＢＶ的携带率达１０％以上。目前对于乙型肝...