miR-374b-5p靶向调控UHMK1对前列腺癌PC-3细胞的影响

[目的]探讨miR-374b-5p调控UHMK1表达对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移及凋亡的作用。[方法]萤光霉素报告检测miR-374b-5p对UHMK1的调控作用,将miR-NC、miR-374b-5p inhibitor和miR-374b-5p mimic转染到前列腺癌PC-3细胞。采用CCK-8法检测细胞存活率,改良的Matrigel Boyden室测定对细胞的侵袭性实施检测,划痕实验对细胞的具体迁移力实施检测,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-qPCR检测miR-374b-5p和UHMK1 mRNA表达,Western Bloting检测UHMK1蛋白表达。[结果]与对照组比较,miR-374b-5p inhibitor组细胞存活率、迁移率、侵袭数、miR-374b-5p表达水平、UHMK1 mRNA表达和蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.05);miR-374b-5p mimic组细胞存活率、迁移率、侵袭数、miR-374b-5p表达水平、UHMK1 mRNA表达和蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。与miR-374b-5p ...     

miR-125b-5p对人血管瘤内皮细胞HemES增殖和凋亡的影响及其机制

目的:研究miR-125b-5p对人血管瘤内皮细胞HemECs增殖、凋亡的影响.方法:RT-qPCR检测人血管瘤内皮细胞HemECs及其旁系组织细胞中miR-125b-5p与MCL-1 mRNA的表达;选取HemECs细胞分为对照组、miR-NC 组、miR-125b-5p mimic 组、miR-125b-5p in...     

miR-125b-5p对创伤性脑损伤诱发大鼠认知功能障碍的干预作用及其机制

目的:研究miR-125b-5p对创伤性脑损伤(TBI)引起的大鼠认知功能障碍的影响及其分子机制。方法:将大鼠随机分为Control组、TBI组(模型组)、NC agomir组(假阴性组)、miR-125b-5p agomir组(高表达组),每组5只。假阴性组和高表达组分别脑室注射NC agomir和miR-125b-5p agomir,除Control组外各组均用改良Feeney法建立脑损伤模型。通过行为学实验对大鼠的运动协调、学习记忆、神经损伤程度等进行评估。通过ELISA和Western blot对各组大鼠海马组织中miR-125b-5p、炎性因子,以及神经相关因子的表达水平进行检测。最后使用生物信息学结合RT-PCR和Western blot对miR-125b-5p的下游靶基因进行预测和验证。结果:与对照组相比,模型组和假阴性组大鼠miR-125b-5p的表达水平显著下调、mNSS评分显著升高、运动协调能力及学习记忆能力显著下降、白介素(IL-1β、IL-6)及肿瘤坏死因子(TNF-α)表达水平显著升高、BDNF和NGF的表达水平显著下降、GFAP的表达水平显著升高(P<...     

miR-181b-5p对胃癌细胞HGC-27增殖和凋亡的影响

该文检测了人胃癌血清和胃癌细胞HGC-27中miR-181b-5p的水平,并研究了miR-181b-5p对胃癌细胞HGC-27增殖和凋亡能力的影响,以探讨miR-181b-5p在胃癌发生和发展中可能的作用。荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q RT-PCR)检测胃癌患者和健康人群血清中miR-181b-5p的水平以及胃癌细胞HGC-27和胃黏膜细胞GES-1中miR-181b-5p的水平,采用脂质体瞬时转染技术将miR-181b-5p抑制剂(inhibitors)以及inhibitors阴性对照分别转入胃癌细胞HGC-27中,用q RTPCR验证转染后miR-181b-5p的水平,CCK-8法检测miR-181b-5p对胃癌细胞HGC-27的增殖能力的影响,流式细胞术检测转染后胃癌细胞HGC-27细胞周期和凋亡的变化。q RT-PCR结果显示,胃癌患者血清中miR-181b-5p的水平高于健康人群(P0.05);胃癌细胞HGC-27中miR-181b-5p的水平显著高于胃黏膜细胞GES-1中的水平(P0.01);转染miR-181b-5p inhibitors后其miR-181b-5p的水平显著低于inhibitors阴性对照组(P0.01)。CCK-8结果显示,将miR-181b-5p的水平下调后,胃癌细胞HGC-27的增殖能力明显下降(P0.01)。流式细胞术检测结果显示,转染miR-181b-5p inhibitors后,胃癌细胞HGC-27的凋亡率显著增高(P0.01)。细胞周期检测结果显示,转染miR-181b-5p inhibitors后,其S期明显缩短,G2/M期延长,细胞增殖受到抑制。以上结果表明,血清miR-181b-5p可能作为胃癌早期诊断的一个分子肿瘤标志物;miR-181b-5p在胃癌的发生和发展过程中可能起到癌基因的作用,并有可能作为胃癌分子治疗的一个新靶点。     

MiR-18b-5p对人滋养细胞系HTR-8细胞迁移功能的影响

目的:通过研究子痫前期胎盘组织中低表达的miR-18b-5p(微小RNA18b-5p)对人滋养细胞系HTR-8迁移能力的影响,进一步探讨miR-18b-5p在子痫前期发病过程中的作用。方法:将化学合成的miR-18b-5p inhibitor、miR-18b-5p inhibitor NC,采用瞬时转染的方法将miR-18b-5p inhibitor转入人滋养细胞系HTR-8中设为实验组;miR-18b-5p inhibitor NC转入HTR-8细胞中设为阴性对照组;空白转染组为空白对照组。应用Realtime RT-PCR技术检测各组miR-18b-5p在mRNA水平的表达,同时采用微孔滤膜培养小室及双室联合培养系统(Transwell实验)检测实验组与对照组细胞迁移能力的变化。结果:Realtime RT-PCR结果显示:转染miR-18b-5p inhibitor后miR-18b-5p的表达量分别与阴性对照组和空白对照组相比明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。Transwell实验结果显示miR-18b-5p inhibitor组与两对照组相比细胞的迁移能力明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:在HTR-8细胞中降调节miR-18b-5p可以显著的降低细胞的迁移能力,推测病理性低表达的miR-18b-5p有可能通过降低滋养细胞的迁移能力,使妊娠早期细胞滋养细胞从固体绒毛顶端迁出减少,导致覆盖合体滋养细胞进而形成具有增殖能力的细胞簇减少,最终造成滋养层浅表植入,从而引起子痫前期的发生。     

下调lncRNA MCF2L-AS1靶向miR-33b-5p抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进凋亡

摘要 目的：探讨lncRNA MCF2L-AS1对胃癌细胞恶性生物学行为的影响及分子机制。方法：选取45例胃癌患者的癌组织及癌旁正常组织,或培养胃黏膜上皮细胞GES-1、胃癌细胞HGC-27,采用RT-qPCR检测MCF2L-AS1和miR-33b-5p的表达水平。采用双荧光素酶报告实验检测MCF2L-AS1和miR-33b-5p的靶向关系。将HGC-27细胞分为si-NC组、si-MCF2L-AS1组、mimic NC组、miR-33b-5p mimic组、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC组、si-MCF2L-AS1+miR-33b-5p inhibitor组,分别转染si-NC、si-MCF2L-AS1、mimic NC、miR-33b-5p mimic或共转染si-MCF2L-AS1+inhibitor NC、si-MCF2L-AS1+miR-33b-5p inhibitor。采用MTT实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,克隆形成实验检测细胞克隆形成数,Transwell实验检测迁移和侵袭细胞数。结果：与癌旁正常组织或GES-1细胞相比,胃癌组织或HGC-27细胞中MCF2L-AS1表达水平升高、miR-33b-5p表达水平降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。MCF2L-AS1可靶向调控miR-33b-5p。下调MCF2L-AS1或过表达miR-33b-5p,miR-33b-5p表达水平升高,HGC-27细胞凋亡率升高,但细胞增殖、克隆形成数、迁移和侵袭数均减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。抑制miR-33b-5p可减弱下调MCF2L-AS1对HGC-27细胞的生物学作用。结论：下调MCF2L-AS1通过上调miR-33b-5p抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进凋亡;MCF2L-AS1通过靶向调控miR-33b-5p表达进而参与胃癌细胞的恶性生物学行为。     

miR-199b-5p在糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化中作用机制

[目的]探索miR-199b-5p在糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化中的作用机制。[方法]选择92只雄性大鼠,随机分为空白对照组、DN组、慢病毒对照组、miR-199b-5p敲低组,造模结束后第12 w处死大鼠。对比上述4组大鼠在肾组织病理学、肾功能指标,Klotho、Wnt、β-catenin等相关蛋白表达差异。[结果] DN组、慢病毒对照组的miR-199b-5p表达高于空白对照组和miR-199b-5p敲低组,miR-199b-5p敲低组高于空白对照组(1.08±0.24、3.27±0.12、3.22±0.53、1.62±0.15;P<0.05);DN组、慢病毒对照组的Scr、BUN、β-catenin、α-SMA、MMP-7均显著高于空白对照组和miR-199b-5p敲低组,miR-199b-5p敲低组高于空白对照组(78.66±2.12 vs 61.14±3.78;14.04±1.09 vs 9.26±1.73;32.33±2.57 vs 27.23±1.78;0.97±0.02 vs 0.34±0.35;3.49±0.28 vs 1.43±0.23;P<0.05);而D...     

miR-106b-5p靶向调控SIRT7/SMAD4信号通路对口腔鳞状细胞癌侵袭和迁移的影响机制探究

该文探讨了miR-106b-5p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其机制。采用qRT-PCR检测OSCC组织与细胞系中mi R-106b-5p表达情况,将SCC15、OECM1细胞分为Control组、miR-NC组、miR-106b-5p mimics组、anti-miR-NC组、anti-miR-106b-5p、anti-miR-106b-5p+si-NC组、anti-miR-106b-5p+si-SIRT7组,分别检测各组细胞增殖、迁移及侵袭能力, Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、MMP-9、SIRT7、SMAD4蛋白表达情况,双荧光素酶报告基因实验与RIP实验验证miR-106b-5p与SIRT7的靶向关系。结果显示, miR-106b-5p在OSCC组织与细胞中表达水平升高(P<0.05),过表达mi R-106b-5p可显著促进OSCC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,抑制miR-106b-5p表达可显著抑制OSCC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实, miR-...     

miR-135b-5p抑制脓毒症引起的小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制*

目的: 探究miR-135b-5p在小鼠脓毒症(sepsis)引起的急性肺损伤(ALI)模型中的表达水平及其对小鼠肺部炎症反应和细胞焦亡的影响。方法: 将C57BL/6小鼠随机分为6组,每组8只,通过盲肠结扎穿刺法(CLP)手术构建CLP诱导的脓毒症小鼠模型:腹腔注射0.1 mg/kg的巴比妥麻醉,腹部纵向切开暴露盲肠,结扎盲肠并用注射器针头进行穿孔,挤出部分肠道内容物后缝合伤口。假手术组(Sham组)开腹后不做任何处理缝合伤口,无CLP手术处理。治疗组分为CLP+NC mimic组,CLP+miR-135b-5p mimic组,CLP+NC mimic+empty vector组,CLP+消皮素D (GSDMD)组,CLP+miR-135b-5p mimic+GSDMD组。治疗组小鼠在CLP手术前一周皮下注射200 μl溶解于生理盐水的NC mimic(200 nmol/L),miR-135b-5p mimic(200 nmol/L),empty vector(100 nmol/L),GSDMD vector(100 nmol/L),每天注射1次,连续一周。术后24 h采用二氧化碳窒息法实施安乐死。采用qRT-PCR检测小鼠肺组织样本中miR-135b-5p和GSDMD mRNA的表达水平;苏木精-伊红(HE)染色检测小鼠肺组织形态和损伤状态;采用5 ml生理盐水冲洗小鼠右肺3次,每次持续约3~5 min,收集肺泡灌洗液(BALF),酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中GSDMD、白介素1β(IL-1β)和白介素18(IL-18)的表达水平;蛋白免疫印迹法检测小鼠肺组织内含NLR家族PYRIN域蛋白3(NLRP3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase 1)以及切割后的N-端GSDMD端蛋白结构域(cleaved-GSDMD-N)的表达水平。双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-135b-5p与GSDMD的靶向结合关系。结果: 与对照组相比,CLP组小鼠肺组织中有大量的炎症细胞浸润,肺泡损伤,细胞间质水肿及肺泡塌陷等病理特征,小鼠肺组织内细胞焦亡相关蛋白(NLRP3,caspase-1和GSDMD)的表达水平明显增加(P<0.01),但miR-135b-5p的表达水平明显下调(P<0.01);与CLP组相比,超表达miR-135b-5p能够明显抑制CLP诱导的小鼠肺组织内细胞焦亡(P<0.01),靶向抑制GSDMD的表达水平(P<0.01);超表达GSDMD能够逆转超表达miR-135b-5p对肺组织细胞焦亡的抑制作用(P<0.01),超表达miR-135b-5p能够通过靶向GSDMD抑制小鼠BALF中IL-1β及IL-18的表达水平(P<0.01)。结论: miR-135b-5p靶向下调GSDMD抑制细胞焦亡,改善脓毒症引起的ALI,为脓毒症诱导的ALI治疗提供了潜在的治疗靶点和理论依据。     

抑制miR-130b-3p通过上调PTEN和灭活PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路抑制膀胱癌细胞增殖

miR-130家族在癌的进展中发挥作用;然而,其家族成员在膀胱癌中的作用尚罕见报告。本研究证明,抑制miR-130家族成员miR-130b-3p表达促进PTEN表达,诱导细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞增殖。首先,我们采用微阵列对来自膀胱癌患者的4对膀胱癌和癌旁组织进行了miRNA和mRNA组学分析,发现miR-130b-3p和miR-106b-3p在膀胱癌组织高表达,而miR-99a-3p、miR-199a-5p和miR-145-3p低表达。RT-q PCR检测30对膀胱癌组织5种miRNA的表达与微阵列中的表达状况一致。此外,我们在mRNA组学分析中还发现,miR-130b-3p在膀胱癌组织的高表达与PTEN表达呈负相关。为此,在后续研究中集中探索了miR-130b-3p在膀胱癌中的作用及其作用机制。生物信息学及荧光素酶报告结果证明,miR-130b-3p可直接结合PTEN的3'-UTR,靶向抑制PTEN的表达。转染结合CCK-8、EDU、流式分析、划痕及Transwell小室实验显示,转染miR-130b-3p模拟物可明显促进膀胱癌T24细胞的增殖、迁移及侵袭能力;相反,转染miR-130b-3p抑制物可明显诱导T24细胞凋亡。鬼笔环肽染色揭示,转染miR-130b-3p模拟物可促进细胞骨架形成,而转染miR-130b-3p抑制物抑制细胞骨架形成。Western印迹证明,转染miR-130b-3p可下调PTEN在T24细胞的表达,上调p-PI3K、p-AKT、p-FAK和整合素β1的表达;而转染miR-130b-3p抑制物上调PTEN的表达,下调p-PI3K、p-AKT、p-FAK和整合素β1的表达。上述结果提示,miR-130b-3p通过抑制PTEN表达,激活PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路,在膀胱癌中发挥癌基因样作用;相反,抑制miR-130b-3p可上调PTEN表达,抑制PI3K-AKT及整合素β1/FAK信号通路的激活,诱导凋亡,抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。我们的结果还提示,miR-130b-3p作为可能的临床标志物,对膀胱癌的诊断、靶向治疗具有潜在的应用价值。     

糖皮质激素受体激动剂对神经病理性疼痛大鼠痛敏感反应的干预作用及其机制

目的:探讨糖皮质激素受体激动剂调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素1β(IL-1β)通路对神经病理性疼痛(NPP)大鼠痛敏反应的影响机制。方法:40只SD大鼠分为对照组、模型组、NLRP3抑制剂组、治疗组,每组10只,应用坐骨神经慢性压迫性损伤法诱导NPP大鼠模型,模型组按照上述方法造模,NLRP3抑制剂组按照上述方法造模后给予NLRP3抑制剂(MCC950)干预,治疗组按照上述方法造模后给予糖皮质激素受体激动剂(地塞米松)干预,对照组给予等量生理盐水。干预28 d之后,比较各组机械痛阈、热痛阈、脊髓背角形态学变化、疼痛因子[前列腺素E2(PGE2)、P物质(SP)、5-羟色胺(5-HT)]、炎症因子[白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)]、NLRP3/IL-1β通路蛋白表达量变化。结果:六胺银染色结果显示,模型组神经原纤维变粗并缠结,可见颗粒空泡变性,内含嗜银颗粒,提示神经元坏死,与模型组比较,NLRP3抑制剂组和治疗组大鼠的神经原纤维缠结变少,颗粒空泡变性变少。TUNNEL染色结果提示,模型组大鼠神经元凋亡率较...     

髓核突出模型大鼠背根神经节中Wnt5a的表达

目的:观察Wnt5a在大鼠髓核突出模型的表达变化,探索Wnt5a在神经根病中的作用。方法:将80只成年雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=20)、髓核突出组(NP组,n=20)、髓核突出+生理盐水组(NP+Saline组,n=20)、髓核突出+益赛普组(NP+Etanercept组,n=20)。从大鼠尾椎椎间盘中取髓核,将髓核种植于L5背根神经节旁,制作髓核突出大鼠模型。采用免疫组织化学法分别检测各组大鼠背根神经节中的Wnt5a蛋白的表达,利用RT-PCR的方法分别检测各组大鼠背根神经节中Wnt5a m RNA的表达。结果:免疫组化结果显示,各组大鼠背根神经节的大中小神经元均有Wnt5a的表达,NP组较Sham组在3天、7天时Wnt5a表达量均增加(P0.01),3天和7天时NP+Etanercept组大鼠背根神经节中Wnt5a的表达量较NP+Saline组均减少(P0.01)。RT-PCR的结果与免疫组化的结果相符,表现为NP组较Sham组在3天、7天时Wnt5a mRNA的相对表达量增加(P0.01),NP+Etanercept组大鼠背根神经节中Wnt5a的相对表达量较NP+Saline组均减少(P0.01)。结论:髓核突出并压迫背根神节时,可引起背根神经节Wnt5a的表达增加,且阻断肿瘤坏死因子α(TNF-α)时,背根神经节的Wnt5a表达减少。     

骆驼蓬在类风湿关节炎大鼠中的抗炎作用及对关节功能、关节滑膜组织NLRP3，ASC，Caspase-1的影响

摘要 目的：探讨骆驼蓬在类风湿关节炎大鼠中的抗炎作用及对关节功能、关节滑膜组织NLRP3,ASC,Caspase-1的影响。方法：采用胶原诱导性关节炎模型。将大鼠分为对照组（假手术组）、模型组、骆驼蓬组、扶他林组、甲氨蝶呤组。关节围度及疼痛情况测定;关节滑膜组织HE染色;关节滑膜组织TUNEL染色观察凋亡;免疫组化检测大鼠关节滑膜组织NLRP3,ASC,Caspase-1表达。结果：与空白组相比,模型组、甲氨蝶呤组、骆驼蓬组、扶他林组左右踝关节肿胀程度和关节疼痛指数明显更高（P＜0.05）;与模型组相比,甲氨蝶呤组、骆驼蓬组、扶他林组左右踝关节肿胀程度和关节疼痛指数明显更低（P＜0.05）,且骆驼蓬组左右踝关节肿胀程度和关节疼痛指数明显低于甲氨蝶呤组、扶他林组;与空白组相比,模型组、甲氨蝶呤组、骆驼蓬组、扶他林组NLRP3、ASC、Caspase-1明显更高（P＜0.05）;与模型组相比,甲氨蝶呤组、骆驼蓬组、扶他林组NLRP3、ASC、Caspase-1明显更低（P＜0.05）,且骆驼蓬组NLRP3、ASC、Caspase-1明显低于甲氨蝶呤组、扶他林组;与空白组相比,模型组、甲氨蝶呤组、骆驼蓬组、扶他林组凋亡率明显更高（P＜0.05）;与模型组相比,甲氨蝶呤组、骆驼蓬组、扶他林组凋亡率明显更低（P＜0.05）,且骆驼蓬组凋亡率明显低于甲氨蝶呤组、扶他林组;与模型组比较,甲氨蝶呤组、扶他林组、骆驼蓬组三组关节软骨面均较光滑,滑膜组织增生及炎细胞浸润程度均减轻（P＜0.05）。结论：骆驼蓬可通过调节滑膜组织NLRP3炎症小体的表达抑制滑膜组织炎症反应,进而达到改善关节肿胀和疼痛的目的。     

miR-195-5p调节TGF-β1/Smad3信号通路对心力衰竭大鼠心肌细胞的影响

[目的]观察miR-195-5p调节TGF-β1/Smad3信号通路对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞的影响.[方法]将80只SD大鼠随机分为对照组、HF组、miR-195-5p-agomir组、miR-NC组,每组各20只,阿霉素建立HF大鼠模型.比较心功能、心肌细胞miR-195-5p表达、心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白、...     

天麻素通过下调Nav1.6通道表达缓解糖尿病神经病理性疼痛的研究

目的:探究天麻素对Ⅱ型糖尿病神经病理性痛的镇痛作用以及天麻素对背根神经节Nav1.6通道的表达调控作用。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、糖尿病组和天麻素处理组(10 mg·kg^-1·d^-1)。通过高脂饮食喂养4周,低剂量腹腔注射STZ(30 mg·kg^-1)的方法构建Ⅱ型糖尿病神经病理性痛大鼠模型,利用痛行为学检测观察各组大鼠的机械刺激足缩反应阈值变化,采用免疫荧光组织化学及Western blot方法观察各组大鼠背根神经节上Nav1.6通道的表达变化。结果:与空白对照组相比,糖尿病模型大鼠出现显著的机械刺激疼痛阈值下降(P<0.05),且模型组大鼠背根神经节神经元上的Nav1.6通道表达上调(P<0.05)。与糖尿病组相比,连续腹腔注射天麻素3天、7天、14天后,模型动物的疼痛明显缓解(P<0.05),另外天麻素可以翻转背根神经节上Nav1.6通道的高表达(P<0.05)。结论:天麻素可能通过降低Nav1.6通道的表达来缓解Ⅱ型糖尿病神经病理性疼痛,从而为天麻素缓解糖尿病神经病理性疼痛提供新的理论依据。     

circEPSTI1通过靶向调控miR-216b-5p调节胃癌细胞顺铂耐药性

该研究的目的是为了观察circEPSTI1是否通过靶向调控miR-216b-5p对胃癌细胞顺铂耐药性产生影响,并探讨其可能的作用机制。采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织、人胃黏膜细胞GES-1、人胃癌细胞HGC27与胃癌耐药性细胞HGC27/DDP中circEPSTI1与miR-216b-5p的表达情况;使用双荧光素酶报告实验验证circEPSTI1与miR-216b-5p的靶向调控关系;以HGC27/DDP细胞为研究对象,实验分组:si-NC组、si-circEPSTI1组、si-circEPSTI1+anti-miR-NC组、si-circEPSTI1+anti-miR-216b-5p组;采用CCK-8法、平板克隆形成实验、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移及侵袭; Western blot检测Cleavea-caspase 3、Cleavea-caspase 9、E-cadherin、N-cadherin蛋白表...     

miR-20b-5p在肿瘤及其他疾病中的生物学功能

miRNAs是一类非编码的小RNA分子,在多种疾病的发病和治疗中发挥重要作用,可调控细胞增殖、细胞周期、凋亡和迁移等过程中关键基因的表达。miR-20b-5p属于miR-17家族,在多种肿瘤中和非肿瘤性疾病中存在异常表达。在肿瘤中,miR-20b-5p扮演着癌基因或抑癌基因的角色,可通过调控相应靶分子的表达影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭与迁移等生物学行为,进而促进或抑制肿瘤的发生发展。该文对miR-20b-5p在肿瘤和非肿瘤性疾病中的生物学功能和机制进行简要综述。相信随着对miR-20b-5p的功能和机制的深入阐明,miR-20b-5p有望作为多种疾病的诊治靶点。     

鼻咽癌组织miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平与放疗敏感性和预后的关系研究

摘要 目的：探讨鼻咽癌组织微小核糖核酸（miR）-20b-5p、miR-325-3p表达水平与放射治疗敏感性和预后的关系。方法：选取2017年11月至2019年6月我院收治的84例确诊为鼻咽癌并拟进行放射治疗的患者设为鼻咽癌组,另选取同期收治的42例慢性鼻咽炎患者为对照组,比较鼻咽癌组织及鼻咽部炎症组织中miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平,分析鼻咽癌组织中miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平与鼻咽癌患者临床病理特征的关系。根据鼻咽癌患者放疗敏感性评估结果分为敏感组和抵抗组,比较两组miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平。随访3年,Kaplan-Meier法及Cox回归分析法分析miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平与鼻咽癌患者生存预后的关系。结果：鼻咽癌组miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平均高于对照组（P＜0.05）。不同T分期、N分期、临床分期患者在miR-20b-5p、miR-325-3p高表达组与低表达组中的占比比较存在统计学差异（P＜0.05）。完成7~8周放疗后3个月评估患者放疗抵抗率36.90%,抵抗组miR-20b-5p、miR-325-3p表达水平均高于敏感组（P＜0.05）。miR-20b-5p高表达鼻咽癌患者的累积生存时间短于miR-20b-5p低表达患者（P＜0.05）;miR-325-3p高表达鼻咽癌患者的累积生存时间短于miR-325-3p低表达患者（P＜0.05）。单因素、多因素Cox回归分析显示,年龄＞60岁、T3/T4期、miR-20b-5p高表达、miR-325-3p高表达是鼻咽癌患者预后不良的独立危险因素（P＜0.05）。结论：鼻咽癌组织中miR-20b-5p、miR-325-3p均异常高表达,其表达水平与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期及放疗敏感性有关,且miR-20b-5p、miR-325-3p高表达患者放疗后预后不良风险更大。     

miR-20b-5p靶向MAPK1调控脑出血过程中脑微血管内皮细胞铁死亡

摘要 目的：探讨miR-20b-5p对氧糖剥夺（OGD）/Hemin处理的脑微血管内皮细胞（BMVEC）功能的影响及机制。方法：将BMVEC分为Control组、agomir-NC组、agomir-miR-20b-5p组、antagomir-NC组和antagomir-miR-20b-5p组。使用Lipofectamine 2000试剂对细胞进行相应的转染处理。BMVEC转染后，将BMVEC再分为Control组、OGD/Hemin组（O/H组）、OGD/Hemin+agomir-NC组（O/H+agomir-NC组）、OGD/Hemin+agomir-miR-20b-5p组（O/H+agomir-miR-20b-5p组）、OGD/Hemin+antagomir-NC组（O/H+antagomir-NC组）和OGD/Hemin+antagomir-miR-20b-5p组（O/H+antagomir-miR-20b-5p组）。Control组BMVEC正常培养，其他组BMVEC进行OGD/Hemin处理。MTT法检测BMVEC增殖，TUNEL染色检测BMVEC凋亡，Transwell检测BMVEC迁移。使用试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）水平。使用Iron Assay试剂盒检测Fe²⁺含量。通过qRT-PCR检测miR-20b-5p和MAPK1 mRNA水平。通过Western blot检测MAPK1、Bax、Bcl-2、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）蛋白表达水平。通过免疫荧光染色检测MAPK1的荧光强度水平。结果：与Control组和agomir-NC组比较，agomir-miR-20b-5p组BMVEC中的miR-20b-5p水平升高（P<0.05）。与Control组和antagomir-NC组比较，antagomir-miR-20b-5p组BMVEC中的miR-20b-5p水平降低（P<0.05）。与Control组比较，O/H组BMVEC中的miR-20b-5p水平降低，细胞活力降低，TUNEL阳性率和Bax蛋白表达水平升高，Bcl-2蛋白表达水平降低，迁移数量降低，SOD和GSH-Px活性降低，MDA含量升高，Fe²⁺含量和PTGS2的蛋白表达水平升高，GPX4的蛋白表达水平降低，MAPK1的mRNA和蛋白表达水平以及相对荧光强度升高（P<0.05）。与O/H组和O/H+agomir-NC组比较，O/H+agomir-miR-20b-5p组BMVEC中的miR-20b-5p水平升高，细胞活力升高，TUNEL阳性率和Bax蛋白表达水平降低，Bcl-2蛋白表达水平升高，迁移数量升高，SOD和GSH-Px活性升高，MDA含量降低，Fe²⁺含量和PTGS2的蛋白表达水平降低，GPX4的蛋白表达水平升高，MAPK1的mRNA和蛋白表达水平以及相对荧光强度降低（P<0.05）。与O/H组和O/H+antagomir-NC组比较，O/H+antagomir-miR-20b-5p组BMVEC中的miR-20b-5p水平降低，细胞活力降低，TUNEL阳性率和Bax蛋白表达水平升高，Bcl-2蛋白表达水平降低，迁移数量降低，SOD和GSH-Px活性降低，MDA含量升高，Fe²⁺含量和PTGS2的蛋白表达水平升高，GPX4的蛋白表达水平降低，MAPK1的mRNA和蛋白表达水平以及相对荧光强度升高（P<0.05）。结论：本研究表明上调miR-20b-5p通过抑制OGD/Hemin处理的BMVEC中MAPK1的表达从而抑制了铁死亡途径。     

血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p水平与股骨颈骨折患者骨折延迟愈合的关系及其预测价值分析

摘要 目的：探讨血清微小核糖核酸（miR）-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p水平与股骨颈骨折患者术后骨折延迟愈合的关系及对术后骨折延迟愈合的预测价值。方法：选择2020年1月~2022年10月在徐州医科大学附属医院行内固定治疗的292例新鲜股骨颈骨折患者为研究对象。于术后4周复查时,检测患者血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p水平;并根据其骨折愈合情况分为延迟组（n=36）和愈合组（n=256）。采用多因素Logistic回归分析股骨颈骨折患者术后骨折延迟愈合的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p对股骨颈骨折患者术后骨折延迟愈合的预测价值。结果：术后4个月复查时,骨折延迟愈合发生率为12.33%。两组年龄、吸烟史、合并糖尿病组间比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。愈合组血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p水平均高于延迟组（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥60岁、合并糖尿病、血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p水平降低是股骨颈骨折患者术后骨折延迟愈合的独立危险因素（P＜0.05）。ROC曲线结果显示,三者联合检测的曲线下面积（AUC）（0.95CI）为0.841（0.738~0.936）,高于各指标单独应用时的AUC,三者联合检测的灵敏度和特异度亦高于单一指标检测。结论：血清miR-203a、miR-31-5p、miR-19b-1-5p在股骨颈骨折术后骨折延迟愈合患者中呈低表达,是骨折延迟愈合的独立危险因素,三者联合检测对股骨颈骨折患者骨折延迟愈合具有较高的预测价值。